大黄素对牙周炎大鼠临床指标影响的实验研究

目的:观察中药大黄素对牙周炎大鼠临床指标的影响,探讨大黄素是否可以用于牙周炎的治疗。方法:健康雄性4月龄Wistar大鼠40只建立牙周炎模型,建模后随机分为四组,每组10只,P:模型对照组;P1:小剂量大黄素(80mg/kg)组;P2:大剂量(100mg/kg)大黄素组;P3:替硝唑(400mg/kg)组。分别于用药前及用药5天、10天、15天观察大鼠牙周探诊出血、探诊深度、附着丧失变化,分析两种剂量的大黄素与替硝唑组对大鼠临床指标的影响,比较其疗效。结果:两种剂量的大黄素对牙周炎大鼠牙周临床指标均有改善,大剂量大黄素组与替硝唑组对大鼠临床指标改善无显著性差异(P>0.05)。结论:大黄素可改善牙周炎大鼠牙周状况。

大黄素对膀胱癌细胞BIU87增殖和凋亡的影响

目的探讨大黄素对人膀胱癌细胞BIU87生长的抑制作用及其对细胞增殖周期和凋亡的影响。方法采用甲基噻唑（MTT）比色法测定不同浓度大黄素在不同作用时间内对在体外培养BIU87细胞增殖的影响，同时应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化，免疫组化SP法检测细胞内bcl-2和caspase-3蛋白的表达水平。结果在一定范围内，大黄素的浓度（10—80μg/ml）越高、作用时间越长，对肿瘤细胞生长的抑制作用越强，凋亡率也越高[分别为（9．84±21．13）％、（18．32±22．14）％、（29．73±1．42）％、（42．13±2．36）％]，与对照组[（2．01±20．92）％]相比，差异均有统计学意义（F=531．85，P〈0．01）；大黄素可在G0／G1期阻滞人膀胱癌细胞BIU87的增殖，使S期细胞比率降低[分别为（33．27±1．26）％、（29．17±1．39）％、（16．94±0．86）％、（10．85±1．47）％]，与对照组[（35．45±0．38）％]相比，差异均有统计学意义（F=524．64，P〈0．01）。大黄素作用48h后，BIU87细胞中bel-2蛋白表达下降（灰度值分别为122．65±2．12、131．37±1．62、134．81±1．36、145．55±2．01），easpase-3蛋白表达上调（灰度值分别为135．26±1．41、130．22±1．74、126．11±1．77、118．36±1．53），呈浓度依赖性，与对照组（灰度值分别为108．42±3．73、149．35±1．82）相比，差异均有统计学意义（F=216．23、224．83，P〈0．01）。结论大黄素在体外能抑制人膀胱癌细胞株BIU87的生长、诱导细胞凋亡，其作用与下调bcl-2蛋白表达、上调easpase一3蛋白表达和阻滞细胞周期于Go／G．期有关。

大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的探讨大黄素对人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用，并探讨其作用机制。方法建立人膀胱癌细胞株BIU87裸鼠移植瘤模型，并随机分为4组：对照组、大黄素组、Z—VAD—FMK组、大黄素＋Z—VAD—FMK组。观察各组裸鼠移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线，4周后处死全部裸鼠，取出肿瘤组织，称瘤质量；HE染色观察肿瘤细胞形态，流式细胞分析仪细胞凋亡，RT-PCR检测各组肿瘤组织中AIF和EndoGmRNA的表达，Western blot检测各组肿瘤组织中AIF和EndoG蛋白的表达。结果大黄素组肿瘤生长速度明显慢于其他3组，大黄素组[（0．41±0．05）g]和大黄素＋Z-VAD—FMK组[（0．69±0．07）g]肿瘤较其他2组[（1．08±0．13、1．04±0．09）g]轻，差异有统计学意义（F=90．56、27．49，P〈0．01），大黄素组与大黄素＋Z—VAD—FMK组相比差异也有统计学意义（t=10．01，P〈0．01）。流式细胞仪检测凋亡显示大黄素组细胞凋亡率[（42．71±2．69）％]明显高于大黄素＋Z-VAD—FMK组[（34．38±1．73）％]（t=6．38，P〈0．01）。RT—PCR和Western blot结果显示，大黄素＋Z—VAD—FMK组中AIF和EndoG的表达水平显著上调，与其他各组比较[（1．65±0．12）vs（1．24±0．08）、（0．51±0．07）、（0．48±0．04）；（2．12±0．16）vs（1．75±0．13）、（0．57±0．06）、（0．59±0．07）；（2．42±0．13）vs（1．73±0．11）、（0．78±0．07）;（0．75±0．08）；（3．13±0．25）vs（2．15±0．18）、（0．85±0．09）、（0．81±0．14）]，差异均有统计学意义（F=303．22，319．32，409．38，258．53，P〈0．01）。结论大黄素能够明显抑制人膀胱癌裸鼠移植瘤的生长，其机制可能部分与大黄素可上调膀胱癌细胞BIU87中AIF和EndoG的表达，通过启动非Caspase依赖途径诱导细胞凋亡有关。

芦荟大黄素诱导硬皮病成纤维细胞凋亡的研究

目的探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞凋亡的影响。方法以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞，用TUNEL法和荧光显微镜观察法测定芦荟大黄素对成纤维细胞凋亡的诱导。结果芦荟大黄素对患者皮肤成纤维细胞的凋亡具有显著的诱导作用，该作用在一定范围内随着药物浓度的增高和作用时间的延长而增强。结论芦荟大黄素可诱导硬皮病患者皮肤成纤维细胞的凋亡，从而抑制其增殖，减少其胶原蛋白的合成。

大黄素激活AMPK／SREBP-1通路减少脂肪酸诱导的HepG2细胞脂肪变性

目的研究大黄素对游离脂肪酸（FFAs）诱导的人源肝癌细胞HepG2细胞脂质蓄积的脂质调节和氧化应激作用及其可能的相关机制。方法以噻唑蓝（MTT）法测定大黄素对HepG2细胞存活率的影响；采用1mmol／IJFFAs（油酸：棕榈酸=2：1）诱导HepG2细胞脂肪变性，将HepG2细胞分为5组：正常对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素中剂量组、大黄素高剂量组。采用油红O染色及甘油三酯含量测定评价大黄素对肝细胞脂肪变性程度的影响。流式细胞术检测各组细胞脂质蓄积引起的活性氧（ROS）的变化；WesternNot检测各组细胞单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、固醇调节元件蛋白1（SREBP-1）的表达变化。结果1mmol／LFFAs处理后的HepG2细胞24h后出现大量脂滴，TG含量明显增加（P〈0．05）。与模型组相比，大黄素组的脂滴减少，甘油三酯蓄积下降（P〈0．05），并呈剂量依赖性；还可以降低脂肪酸氧化后的ROS水平（P〈0．01）。另外，大黄素处理后增加AMPK与p-AMPK的表达水平（P〈0．01），下调SREBP-1的表达水平（P〈0．01）。结论大黄素可抑制FFAs诱导的HepG2细胞脂肪蓄积，减轻氧化应激损伤，其作用可能与激活AMPK／SREBP-1通路有关。