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毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析
1
作者
彭月梅
叶状
+7 位作者
汪飞燕
王礼跃
冯永翠
王乐乐
候照峰
许金俊
陶建平
刘丹丹
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期846-853,共8页
旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,...
旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。
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关键词
毒害艾美耳球虫
engpx
克隆表达
反应原性
免疫荧光定位
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题名
毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析
1
作者
彭月梅
叶状
汪飞燕
王礼跃
冯永翠
王乐乐
候照峰
许金俊
陶建平
刘丹丹
机构
扬州大学兽医学院
扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期846-853,共8页
基金
国家自然科学基金(31972698,31602039)
江苏高校优势学科建设四期工程项目(2022-2025)
高等学校学科创新引智计划资助(D18007)。
文摘
旨在研究毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的反应原性及其在虫体内的亚细胞定位。提取毒害艾美耳球虫(扬州株)配子体总RNA,RT-PCR扩增En GPX的ORF编码序列,构建原核表达质粒pET-28a(+)-En GPX,转化至BL21(DE3)进行体外诱导表达,同时制备鼠抗rEnGPX多克隆抗体,对重组蛋白进行Western blot反应原性分析和激光共聚焦免疫荧光定位分析。结果表明,En GPX ORF序列全长753 bp,编码250个氨基酸,体外重组表达蛋白大小约30 ku,主要以包涵体形式存在。该重组蛋白能被6×HIS标签单克隆抗体,鼠抗rEnGPX多克隆抗体,毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫病鸡康复血清所识别,表明其具有较好的反应原性和交叉反应原性。在天然配子体蛋白中检测出EnGPX,其编码蛋白主要分布于配子体内的Ⅱ型成壁体(WFBII)及卵囊壁上。本研究成功克隆表达了毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX,验证其具有良好的反应原性,并定位于配子体及卵囊壁上。以期为研究En GPX参与卵囊壁形成的分子机制提供新的线索,也为研制新型球虫亚单位疫苗提供新的靶标。
关键词
毒害艾美耳球虫
engpx
克隆表达
反应原性
免疫荧光定位
Keywords
Eimeria necatrix
engpx
cloning and expression
reactivity
immunofluorescence localization
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
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1
毒害艾美耳球虫谷胱甘肽过氧化物酶EnGPX的原核表达与分析
彭月梅
叶状
汪飞燕
王礼跃
冯永翠
王乐乐
候照峰
许金俊
陶建平
刘丹丹
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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