釉基质蛋白对人皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成影响的体外研究

目的观察釉基质蛋白(enamel matrix proteins,EMPs)对体外培养的人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成的影响。方法取自愿捐赠包皮环切术后包皮组织,采用组织块法培养人皮肤成纤维细胞,取第3～6代细胞进行实验。以终浓度为50、100、150、200μg/mL的EMPs工作液预铺培养板。①细胞黏附实验:取细胞以1×106个/mL置于预铺EMPs的96孔培养板,每孔0.2mL,作为实验组(A、B、C、D组)。培养1.5、3.0和4.5h后MTT比色法测定黏附细胞量。②细胞增殖实验:取细胞以5×104个/mL置于预铺EMPs的培养板,每孔0.2mL,作为实验组(A1、B1、C1、D1组)。于第2、4、6、8天以MTT比色法测定增殖细胞量。③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验:取细胞以1×106个/mL置于预铺EMPs培养板,每孔2mL,作为实验组(A2、B2、C2、D2组)。于培养第5天RT-PCR法测定Ⅰ型胶原前mRNA合成的量。以上实验均以相同浓度细胞悬液加入未预铺EMPs的板孔作为对照组,每组均3个复孔。结果①细胞黏附实验中,各时间点B、C、D组与A组及对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);A组与对照组间及B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。②细胞增殖实验中,第2天各组间差异均无统计学意义(P>0.05);第4、6天,B1、C1、D1组吸光度(A)值分别为0.598±0.020、0.582±0.017、0.574±0.021及0.639±0.016、0.641±0.020、0.635±0.021,均高于对照组的0.548±0.021及0.605±0.019(P<0.05);A1组A值分别为0.545±0.023及0.603±0.016,与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。第8天,B1、C1组A值分别为0.629±0.012、0.631±0.014,高于对照组的0.606±0.031(P<0.05),A1、D1组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。③细胞Ⅰ型胶原前mRNA合成实验中,B2、C2、D2组Ⅰ型胶原前mRNA合成量高于对照组。结论EMPs促进人正常皮肤成纤维细胞黏附、增殖及Ⅰ型胶原前mRNA合成,且EMPs在100μg/mL浓度时可发挥最大促进作用。