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Anti-microsporidial effect of thymoquinone on Encephalitozoon intestinalis infection in vitro 被引量:1
1
作者 Ulfet Cetinkaya Gülay Sezer Arzuv Charyyeva 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2020年第1期42-46,共5页
Objective:To evaluate the anti-microsporidial effects of the active component of Nigella sativa seeds,thymoquinone,against Encephalitozoon intestinalis using an in vitro model.Methods:Anti-microsporidial effect of thy... Objective:To evaluate the anti-microsporidial effects of the active component of Nigella sativa seeds,thymoquinone,against Encephalitozoon intestinalis using an in vitro model.Methods:Anti-microsporidial effect of thymoquinone against Encephalitozoon intestinalis was evaluated by using various concentrations of thymoquinone(0,1,5,10,15,20,30,35,and 40μM)and sterile dimethyl sulfoxide.Real time PCR was used to evaluate the inhibitory effects of thymoquinone on the life cycle of Encephalitozoon intestinalis.Results:The cytotoxic effect of thymoquinone on HEK293 cell line was observed with 30,35,and 40μM concentrations of thymoquinone after 24,48,and 72 hours of incubation.It was observed that 10,15,20,and 30μM concentrations of thymoquinone decreased the spore density compared with the control;however,it was significant only at 30μM.Conclusions:Thymoquinone shows potent anti-microsporidial effects against Encephalitozoon intestinalis in the in vitro model;however,the toxic concentrations of thymoquinone are also toxic to the host cells. 展开更多
关键词 MICROSPORIDIA THYMOQUINONE Nigella sativa ANTIPARASITIC encephalitozoon intestinalis
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Two New Identification Methods for Encephalitozoon cuniculi on Tissue Section
2
作者 Pan Yaoqian Li Ruizhen +3 位作者 Song Gaojie Zhang Zhonghua Quan Suopei Fu Yanfang 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2016年第2期75-78,共4页
[ Objective] The paper aimed to search new identification methods of Encephalitozoon cuniculi on tissue sections. [ Method] Using improved Gram staining method and methyl green pyronin staining method, the pathologica... [ Objective] The paper aimed to search new identification methods of Encephalitozoon cuniculi on tissue sections. [ Method] Using improved Gram staining method and methyl green pyronin staining method, the pathological sections of sick rabbits were stained and identified. [ Result] The pathological changes in brain tissue could be clearly observed on sections, but parasites were not examined in pathological brain tissues stained by common staining method. When the pathological section was stained by improved Gram staining method, the pathological changes in brain tissue were not ouly stained very clearly, but blue parasites were also found in brain tissues. The parasites in epithelioid cells were stained into purple ones by methyl green pyronin staining method. [ Conclusion] The im- proved Gram staining method and methyl green pyronin staining method performed good staining effects of E. cuniculi in pathological sections, which were conducive to rapid diagnosis of encephalitozoonosis in rabbit. 展开更多
关键词 encephalitozoon cuniculi Improved Gram staining method Methyl green pyronin staining method Pathological tissue section
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1例兔脑炎原虫感染的诊治
3
作者 熊苏悦 任子菡 +1 位作者 孙琛 李艳艳 《现代畜牧科技》 2024年第4期92-94,共3页
1岁雌性安哥拉长毛兔,于2021年4月就诊,就诊前该兔食欲减退,表现头颈歪斜。通过临床检查、血液学检查、影像学检查、尿液检查进行诊断,并根据诊断结果进行治疗。结果表明,根据检查结果患兔表现明显的神经症状,左侧鼓泡不透明度升高,存... 1岁雌性安哥拉长毛兔,于2021年4月就诊,就诊前该兔食欲减退,表现头颈歪斜。通过临床检查、血液学检查、影像学检查、尿液检查进行诊断,并根据诊断结果进行治疗。结果表明,根据检查结果患兔表现明显的神经症状,左侧鼓泡不透明度升高,存在全身性炎症表现,进一步采集尿液送至病理实验室检查,确诊该兔为脑炎原虫感染。经过对症及对因治疗,取得良好的治疗效果。 展开更多
关键词 脑炎原虫感染 诊断 治疗
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自然感染兔脑炎原虫獭兔肾上皮细胞凋亡的研究 被引量:4
4
作者 张柳平 潘耀谦 段艳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期365-369,共5页
运用透射电镜术、原位末端标记技术(TUNEL)和流式细胞术对11只自然感染兔脑炎原虫獭兔的肾脏进行了细胞凋亡研究,5只健康长耳白兔用作对照。结果表明,凋亡细胞多见于远曲小管和集合管的上皮细胞。用透射电镜观察,初期的凋亡细胞,其细胞... 运用透射电镜术、原位末端标记技术(TUNEL)和流式细胞术对11只自然感染兔脑炎原虫獭兔的肾脏进行了细胞凋亡研究,5只健康长耳白兔用作对照。结果表明,凋亡细胞多见于远曲小管和集合管的上皮细胞。用透射电镜观察,初期的凋亡细胞,其细胞核的染色质高度凝集,边缘化,粗面内质网增多、扩张呈泡状;后期的凋亡细胞,其细胞质浓缩,细胞膜起泡,细胞核分裂成块状,最后形成膜包裹的凋亡小体。TUNEL法检测,病变轻微的细胞,胞核微缩,胞膜增厚;病变严重的细胞,其胞核体积明显缩小,胞膜皱缩,最后形成膜包裹的凋亡小体。流式细胞术检测,病兔可呈现明显的亚“G1”峰,凋亡细胞百分比与对照兔相比差异极显著(P=0101),且病兔肾细胞的周期也有所改变。结果表明,3种方法检测的病兔肾上皮细胞凋亡数均高于对照兔。 展开更多
关键词 细胞凋亡 自然感染 兔脑炎 獭兔 原虫 流式细胞术检测 凋亡细胞 透射电镜观察 TUNEL法 凋亡小体 粗面内质网 标记技术 上皮细胞 对照 集合管 染色质 细胞核 边缘化 细胞膜 细胞质 核分裂 病兔 百分比 肾细胞 包裹 成膜
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兔脑炎原虫引起肾上皮凋亡的研究 被引量:3
5
作者 潘耀谦 张柳平 段艳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期134-137,共4页
对 16只具有兔脑炎原虫病的示病症状 ,即出现不同程度的头颈歪邪、震颤、平衡失调和转圈运动等运动障碍症状的獭兔 ,运用原位末端标记技术和基因染色技术 ,着重对病兔肾组织损伤的发生进行了研究。结果表明 :肾远曲小管和集合管是脑炎... 对 16只具有兔脑炎原虫病的示病症状 ,即出现不同程度的头颈歪邪、震颤、平衡失调和转圈运动等运动障碍症状的獭兔 ,运用原位末端标记技术和基因染色技术 ,着重对病兔肾组织损伤的发生进行了研究。结果表明 :肾远曲小管和集合管是脑炎原虫主要的寄生部位 ,在此常能检出虫体或假囊 ;凋亡的细胞多见于集合小管的上皮细胞。用TUNEL染色 ,不同阶段的凋亡细胞可出现不同的病理形态学变化。初期的凋亡细胞 ,其胞核浓缩 ,胞膜增厚 ,着色较均匀 ;后期的凋亡细胞 ,其胞核的体积明显变小 ,胞浆减少 ,胞膜呈皱襞状 ,紧紧地包绕着皱缩而浓染的细胞核 ,形成典型的凋亡小体。用 P53和 Bcl- 2染色 ,由于基因表达产物的扩散 ,不仅受损细胞的核染色较深 ,而且胞浆染色也较深。研究证明 ,TUNEL 染色是一种检测由脑炎原虫引起肾细胞凋亡的灵敏、可靠的方法 ;P53和 Bcl- 2基因参与了肾细胞的凋亡过程 ;临床上病兔多尿与脱水可能主要与肾远曲小管和集合管的上皮细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 肾脏 细胞凋亡 示病症状
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扫描及负染电镜在兔脑炎原虫病诊断中的应用 被引量:2
6
作者 张柳平 段艳 +2 位作者 潘耀谦 夏志平 邹啸环 《动物医学进展》 CSCD 2003年第6期96-97,共2页
12只临床表现头颈歪斜、昏睡、震颤、局部或全身轻瘫的可疑为兔脑炎原虫病的獭兔 ,对其肾脏皮髓交界和尿沉渣分别进行了扫描电镜和负染电镜观察 ,看到了大小为 1~ 1 .5× 1 .4~ 2 .5μm,形态呈卵圆形和杆状的兔脑炎原虫。阳性检... 12只临床表现头颈歪斜、昏睡、震颤、局部或全身轻瘫的可疑为兔脑炎原虫病的獭兔 ,对其肾脏皮髓交界和尿沉渣分别进行了扫描电镜和负染电镜观察 ,看到了大小为 1~ 1 .5× 1 .4~ 2 .5μm,形态呈卵圆形和杆状的兔脑炎原虫。阳性检出率为 1 0 0 %。说明扫描及负染电镜术是诊断兔脑炎原虫病的一种较为可靠的技术。 展开更多
关键词 扫描 负染电镜 兔脑炎 原虫病 诊断 临床表现 阳性检出率
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脑炎原虫病兔免疫器官的病理形态学观察 被引量:2
7
作者 潘耀谦 刘兴友 +5 位作者 赵振升 陈金山 银梅 唐海蓉 朱广蕊 夏银可 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第3期58-62,共5页
研究脑炎原虫病兔外周免疫器官的形态学变化,采集20只病兔和12只对照兔的淋巴结、脾脏和圆小囊,通过临床检查,病理剖检,病理切片的HE染色、吉姆萨染色和免疫组织化学染色进行了比较观察。结果表明病兔淋巴结内的淋巴小结数量增多,生发... 研究脑炎原虫病兔外周免疫器官的形态学变化,采集20只病兔和12只对照兔的淋巴结、脾脏和圆小囊,通过临床检查,病理剖检,病理切片的HE染色、吉姆萨染色和免疫组织化学染色进行了比较观察。结果表明病兔淋巴结内的淋巴小结数量增多,生发中心明显,髓索增粗,副皮质区增宽。脾脏的脾小结增多,变大,具有明显的生发中心,边缘区明显增宽,动脉周围淋巴鞘明显变大,聚集大量淋巴细胞。圆小囊的淋巴小结增大,数量增多,生发中心明显,淋巴小结周围弥散大量淋巴细胞。通过α-ANAE和sABC染色,在淋巴结、脾脏和圆小囊中均可检出大量T细胞、巨噬细胞和IgG阳性细胞。据此认为患脑炎原虫病时,病兔的体液免疫和细胞免疫均增强,但以细胞免疫反应更强。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 免疫器官 细胞免疫 体液免疫
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阿苯达唑对种兔感染脑炎原虫的防治研究 被引量:1
8
作者 潘耀谦 刘兴友 +5 位作者 冯春花 赵振升 李瑞珍 刘志科 李会珍 孙玉倩 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第12期196-199,共4页
为了有效地防治种兔的脑炎原虫病,本研究根据脑炎原虫的生物学特点和对组织损伤的特征选用阿苯达唑进行了防治试验。对115只种兔做了ELISA检测和尿沉渣检查,发现有18只种兔已感染脑性原虫,另97只并未感染。用阿苯达唑对感染种兔进行了治... 为了有效地防治种兔的脑炎原虫病,本研究根据脑炎原虫的生物学特点和对组织损伤的特征选用阿苯达唑进行了防治试验。对115只种兔做了ELISA检测和尿沉渣检查,发现有18只种兔已感染脑性原虫,另97只并未感染。用阿苯达唑对感染种兔进行了治疗,对未感染种兔做了预防。结果18只感染种兔经三个疗程治疗后,虽然尿沉渣中均未检出脑炎原虫,但仍有两例种兔的OD值呈阳性。将2例OD值阳性种兔剖检后在其脑组织中检出脑炎原虫包囊和肉芽肿。用药物预防的97只未感染种兔,经两个预防期后血清学检查呈阴性,尿沉渣中也未检出脑炎原虫。试验证明,阿苯达唑对兔脑炎原虫病有良好防治作用,用药的时机以脑炎原虫还未进入脑组织时最合适,用药的剂量一定要保持有效的杀虫浓度。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 种兔 阿苯达唑 预防 治疗
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獭兔脑原虫病的诊断 被引量:1
9
作者 徐镔蕊 孙艳争 +3 位作者 李宁 李博 余春明 冯小宇 《中国养兔》 2003年第1期25-27,共3页
对发生脑原虫病的獭兔进行尸体剖检和组织病理学检查,尸体剖检发现肾脏有2~4mm灰白色凹陷区,组织病理学检查可见典型的肉芽肿性脑炎及间质性肾炎的变化,这是该病特征性的病理形态学的变化,并在大脑胶质结节内和肾脏髓质见到虫体的剖面。
关键词 獭兔 脑原虫病 诊断 尸体剖检 组织病理学 肉芽肿性脑炎 间质性肾炎
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兔脑炎微孢子虫病的免疫学研究进展
10
作者 段艳 潘耀谦 +1 位作者 夏志平 张柳平 《动物医学进展》 CSCD 2003年第3期10-12,共3页
兔脑炎微孢子虫病是由兔脑炎微孢子虫引起的一种隐性、慢性感染或临床经过的人畜共患的原虫病。近十余年来 ,出现大量有关兔脑炎微孢子虫引起艾滋病患者致死性临床感染的报道 ,此病日益引起医学界的广泛关注和重视。就兔脑炎微孢子虫病... 兔脑炎微孢子虫病是由兔脑炎微孢子虫引起的一种隐性、慢性感染或临床经过的人畜共患的原虫病。近十余年来 ,出现大量有关兔脑炎微孢子虫引起艾滋病患者致死性临床感染的报道 ,此病日益引起医学界的广泛关注和重视。就兔脑炎微孢子虫病的免疫学检测方法、细胞免疫应答、感染兔脑炎微孢子虫后人及动物的免疫学比较的研究状况进行了综述。 展开更多
关键词 兔脑炎 微孢子虫病 免疫学 慢性感染 临床兽医
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细胞培养的脑炎原虫感染家兔实验
11
作者 潘耀谦 苏维萍 +2 位作者 刘纯杰 李普霖 夏志平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 1996年第3期290-293,共4页
用在体外连续培养10代的兔脑炎原虫,接种于12只家兔,动态地观察了脑炎原虫对家免的感染情况。实验发现,肾脏产生的病变明显早于大脑,即感染3周后,用Gram's和Goodpasture's染色,即可在髓袢和远曲小管内脱... 用在体外连续培养10代的兔脑炎原虫,接种于12只家兔,动态地观察了脑炎原虫对家免的感染情况。实验发现,肾脏产生的病变明显早于大脑,即感染3周后,用Gram's和Goodpasture's染色,即可在髓袢和远曲小管内脱落的上皮细胞中发现兔脑炎原虫。6周后即可见到间质性肾炎变化,而脑组织于感染9~12周时才见有细胞性肉芽肿的形成;脑炎原虫具有较强的抗原性,即在感染3周后,血液中的抗体含量足以进行诊断。 展开更多
关键词 脑炎原虫 实验感染
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脑炎微孢子虫病豚鼠模型的实验研究
12
作者 王万山 曲莉芝 +3 位作者 刘真喜 吴清洪 张嘉宁 顾为望 《实验动物与比较医学》 CAS 2008年第4期246-250,共5页
目的建立FMMU白化豚鼠脑炎微孢子虫病动物模型。方法动物分为免疫抑制组和非免疫抑制对照组两组。从患病兔分离纯化兔脑炎微孢子虫,豚鼠灌胃接种,免疫抑制剂组肌肉注射氢化可的松。粪便检查虫体,观察临床症状,光镜检查内脏组织病理学变... 目的建立FMMU白化豚鼠脑炎微孢子虫病动物模型。方法动物分为免疫抑制组和非免疫抑制对照组两组。从患病兔分离纯化兔脑炎微孢子虫,豚鼠灌胃接种,免疫抑制剂组肌肉注射氢化可的松。粪便检查虫体,观察临床症状,光镜检查内脏组织病理学变化,电镜观察微孢子虫超微结构,评价FMMU白化豚鼠作为脑炎微孢子虫感染动物模型的可行性。结果免疫抑制豚鼠于感染后第3天检出原虫,比非免疫抑制豚鼠检出时间早1 d。免疫抑制豚鼠于第6天全部检出原虫,比对照组豚鼠早2 d。对照组豚鼠除少数有食欲下降和消瘦外,其余无症状。免疫抑制豚鼠感染后出现消瘦、腹水等症状,5只于感染后35 d出现神经症状和少尿、排尿痛苦等泌尿系统症状。造模后40 d免疫抑制豚鼠死亡率达25%。光镜观察发现主要在脑、肾、肝等内脏器官中存在局灶性淋巴上皮样肉芽肿病变。电镜观察表明脑炎微孢子虫具三层结构的孢子壁,孢子内部极管呈6圈螺旋排列。结论成功建立免疫抑制FMMU白化豚鼠脑炎微孢子虫感染模型,可作为动物及人类的急性脑炎微孢子虫病动物模型用于相关研究。 展开更多
关键词 脑炎微孢子虫 FMMU白化豚鼠 免疫抑制 脑炎微孢子虫病
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重庆地区人类免疫缺陷病毒携带者的微孢子虫感染情况调查 被引量:1
13
作者 包佳玲 莫碧莹 +4 位作者 李同心 刘敏 李田 潘国庆 周泽扬 《微生物与感染》 2020年第5期271-277,共7页
目前我国关于微孢子虫感染人的研究相对较少,更没有关于重庆地区人类免疫缺陷病毒(HIV)携带者感染微孢子虫的数据统计。对重庆市公共卫生医疗救治中心收治的22例HIV抗体阳性,但尚未接受抗病毒治疗的患者进行研究。将22例患者粪便样本分... 目前我国关于微孢子虫感染人的研究相对较少,更没有关于重庆地区人类免疫缺陷病毒(HIV)携带者感染微孢子虫的数据统计。对重庆市公共卫生医疗救治中心收治的22例HIV抗体阳性,但尚未接受抗病毒治疗的患者进行研究。将22例患者粪便样本分别提取总DNA,通过聚合酶链反应(PCR)法和DNA测序等技术对微孢子虫在患者中的感染情况进行检测,并对微孢子虫种类进行鉴定。同时对22例患者的免疫细胞亚群进行计数和分析。结果显示,微孢子虫的感染率为36.3%(8/22),主要由脑炎微孢子虫属(Encephalitozoon spp)的海伦脑炎微孢子虫(E.hellem)和肠脑炎微孢子虫(E.intestinalis)引起。22例患者的免疫细胞亚群分析显示,平均淋巴细胞数0.93±0.13×10^9/L,CD4^+T细胞数132±22个/mL,CD8^+T细胞数495±91个/mL,CD4/CD8细胞比值0.37±0.1,表明患者免疫功能受到严重抑制。进一步将微孢子虫感染患者与未感染患者的免疫细胞亚群进行比较发现,感染患者淋巴细胞数为0.51±0.1×10^9/L,未感染患者为1.17±0.17×10^9/L,两者具有显著差异(P<0.05);感染患者CD4^+T细胞数为71±27个/mL,未感染患者为167±28个/mL,两者具有显著差异(P<0.05);感染患者CD8^+T细胞数为209±35个/mL,未感染患者为658±123个/mL,两者具有显著差异(P<0.05),以上表明微孢子虫感染组的免疫功能受损情况更严重。本研究结果提示微孢子虫的机会性感染与患者免疫功能受损情况密切相关,脑炎微孢子虫属在重庆地区有较高的感染率,这为进一步阐明微孢子虫与宿主相互作用关系奠定基础,也为公共卫生健康管理提供重要参考。 展开更多
关键词 微孢子虫病 艾滋病 人类免疫缺陷病毒 海伦脑炎微孢子虫 肠脑炎微孢子虫 共感染
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兔脑炎微孢子虫感染对家兔细胞免疫功能的影响 被引量:1
14
作者 段艳 潘耀谦 张柳平 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2003年第3期109-111,共3页
以临床症状和病理学变化确诊为兔脑炎微孢子虫感染的家兔为研究对象,用流式细胞计数仪检测外周血CD4+、CEB+细胞比例,并与健康家兔进行比较。结果表明兔脑炎微孢子虫病患兔外周血CD4+细胞比例与对照组相比无明显变化,P>0.05;而CD8+... 以临床症状和病理学变化确诊为兔脑炎微孢子虫感染的家兔为研究对象,用流式细胞计数仪检测外周血CD4+、CEB+细胞比例,并与健康家兔进行比较。结果表明兔脑炎微孢子虫病患兔外周血CD4+细胞比例与对照组相比无明显变化,P>0.05;而CD8+细胞比例明显高于对照组,CD4+/CD8+比值则明显低于对照组,P<0.05。提示兔脑炎微孢子虫患兔外周血CD4+/CD8+比值明显下降,机体免疫力减弱,可能是导致兔脑炎微孢子虫入侵机体,引起家兔发病的重要原因。 展开更多
关键词 兔脑炎 微孢子虫 家兔 细胞 免疫功能 影响因素 临床症状 病理学变化 流式细胞计数仪
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大观霉素磺酰化衍生物的合成及抗微生物活性研究
15
作者 李永清 范莉 +3 位作者 王巍 朱洪林 韦俊宏 杨大成 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1313-1326,共14页
微孢子虫是一类威胁畜牧渔生产与人类健康的胞内寄生真核微生物,但目前尚无专用微孢子虫化学治疗药物。基于大观霉素的低毒性和磺酰胺的良好药学性质,作者设计了大观霉素的磺酰胺类衍生物;通过反应条件探索,以52%~74%的收率合成了21个... 微孢子虫是一类威胁畜牧渔生产与人类健康的胞内寄生真核微生物,但目前尚无专用微孢子虫化学治疗药物。基于大观霉素的低毒性和磺酰胺的良好药学性质,作者设计了大观霉素的磺酰胺类衍生物;通过反应条件探索,以52%~74%的收率合成了21个目标分子,并通过氢谱、碳谱、高分辨质谱等确证了分子结构;通过体外筛选,研究了目标分子的宿主细胞毒性和对脊椎动物微孢子虫代表-海伦脑炎微孢子虫的生物活性,发现各有4个目标分子能抑制或促进海伦脑炎微孢子虫增殖。本研究建立了大观霉素的磺酰胺类衍生物的合成方法,发现了对海伦脑炎微孢子虫有效的新型化合物,为大观霉素的进一步衍生及微孢子虫治疗药物的发现提供了新的思路。 展开更多
关键词 大观霉素 磺酰氯 磺酰胺 海伦脑炎微孢子虫 生物活性
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狐源兔脑炎微孢子虫极管蛋白2(PTP2)的原核表达及间接ELISA方法的建立
16
作者 高妍 贺飞 +1 位作者 王好 刘丽凡 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第12期108-114,共7页
为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质... 为了建立一种特异性好、敏感性高、重复性好的可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,试验首先从疑似感染兔脑炎微孢子虫(Encephalitozoon.cuniculi)的蓝狐脑组织DNA中扩增PTP2基因,并将其与原核表达载体pET-32a(+)连接,构建重组质粒pET32a-PTP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,将菌体超声后对表达的重组蛋白进行可溶性分析,并纯化目的蛋白;然后以重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件和临界值的确定建立蓝狐兔脑炎微孢子虫的间接ELISA方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验;最后采用建立的间接ELISA方法对28份经常规PCR方法验证已经感染兔脑炎微孢子虫病的蓝狐血清样品进行检测,并计算符合率。结果表明:表达的重组蛋白的分子质量为45.8 ku,且表达产物以可溶性蛋白和包涵体两种形式存在,经纯化杂带明显减少,纯化后的重组蛋白质量浓度为1.55 mg/mL。间接ELISA方法的最佳包被抗原质量浓度为8μg/ml,最佳一抗稀释度为1∶100,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳封闭条件为37℃、1 h,最佳一抗孵育时间为120 min,最佳二抗稀释度为1∶5 000,最佳二抗孵育时间为60 min,最佳显色时间为20 min。阴、阳性血清OD_(450)临界值分别为0.268和0.302。建立的间接ELISA方法检测蓝狐犬瘟热病毒、蓝狐伪狂犬病毒、蓝狐细小病毒阳性血清均为阴性,可检测到稀释度为1∶3 200的蓝狐兔脑炎微孢子虫阳性血清,批内重复与批间重复变异系数均小于10%。用建立的间接ELISA方法检测28份蓝狐血清样品的阳性样品数为23份,与常规PCR方法的符合率为82.14%。说明试验成功建立了一种可检测蓝狐兔脑炎微孢子虫病的间接ELISA方法,该方法特异性好、敏感性高、重复性好,适合在基层推广。 展开更多
关键词 兔脑炎微孢子虫病 微孢子虫极管蛋白2(PTP2) 原核表达 间接ELISA 检测方法的建立
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脑炎原虫病兔血液中几种免疫指标的检测 被引量:8
17
作者 潘耀谦 刘兴友 +5 位作者 赵振升 陈金山 银梅 唐海蓉 朱广蕊 夏银可 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期304-308,共5页
为了调查脑炎原虫病兔血液中几种免疫指标的变化,采用E-玫瑰花环试验、流式细胞仪检测、间接ELISA试验和双向免疫琼脂扩散试验对12只病兔和12只对照兔血液中的T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和IgG进行了测定。结果显示,脑炎原虫病兔与对... 为了调查脑炎原虫病兔血液中几种免疫指标的变化,采用E-玫瑰花环试验、流式细胞仪检测、间接ELISA试验和双向免疫琼脂扩散试验对12只病兔和12只对照兔血液中的T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和IgG进行了测定。结果显示,脑炎原虫病兔与对照兔相比,E-玫瑰花环形成率增高,CD4+T细胞没有明显变化,但CD8+T细胞明显增多,CD4+/CD8+T细胞的比值变小,血液中IgG含量增高,双向免疫琼脂扩散时形成沉淀线的抗体稀释倍数增大。据此认为,脑炎原虫病兔的体液免疫和细胞免疫均增强,但以细胞免疫为主,CD4+/CD8+T细胞的比值变小可能与兔脑炎原虫所引起的隐性或慢性感染有关。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 免疫指标 细胞免疫 体液免疫
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兔脑炎原虫引起脑细胞凋亡与血脑屏障破坏的关系 被引量:7
18
作者 潘耀谦 李瑞珍 +3 位作者 梁莹莹 郝军红 张中华 全锁配 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1151-1156,共6页
为了研究兔脑炎原虫如何破坏血脑屏障,侵入脑组织并引起脑肉芽肿形成,本试验采用IG染色、MGP染色,TUNEL染色和anti-GFAP染色等方法对26只有典型脑炎原虫病神经症状的病兔和10只健康兔的脑组织进行了详细研究。结果显示:病兔大脑皮质有... 为了研究兔脑炎原虫如何破坏血脑屏障,侵入脑组织并引起脑肉芽肿形成,本试验采用IG染色、MGP染色,TUNEL染色和anti-GFAP染色等方法对26只有典型脑炎原虫病神经症状的病兔和10只健康兔的脑组织进行了详细研究。结果显示:病兔大脑皮质有少部分锥体细胞、血管内皮细胞及星形胶质细胞发生不同程度的凋亡。病损的血管旁有时检出兔脑炎原虫集落,附近的脑组织有巨噬细胞和小胶质细胞聚集形成的细胞性肉芽肿。用特殊染色可在血管内皮细胞、单核细胞和巨噬细胞中检出大量脑炎原虫和集虫泡。大量星形胶质细胞在病损的脑组织部位增生,包绕在聚集的巨噬细胞和小胶质细胞周围形成了肉芽肿。其粗大的足突在血管周围形成了厚层血脑屏障。总之,兔脑炎原虫通过导致血管内皮细胞和星形胶质细胞凋亡的方式而破坏了血脑屏障;通过侵入血管内皮细胞和单核细胞的方式进入脑组织,引起脑损伤。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 脑细胞凋亡 血脑屏障 胶质细胞 肉芽肿
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兔脑炎原虫性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点 被引量:6
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作者 李瑞珍 宋高杰 +3 位作者 刘志科 梁莹莹 郝军红 潘耀谦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期979-984,共6页
为了研究兔脑炎原虫(EC)性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点,通过特殊染色、TUNEL染色、anti-GFAP染色和anti-NGF染色对26只病兔和10只健康对照兔的脑组织进行了详细地观察与分析。结果显示,EC能侵入血管内皮细胞引起血管损伤,可被单核... 为了研究兔脑炎原虫(EC)性脑肉芽肿的病理学发生及形态特点,通过特殊染色、TUNEL染色、anti-GFAP染色和anti-NGF染色对26只病兔和10只健康对照兔的脑组织进行了详细地观察与分析。结果显示,EC能侵入血管内皮细胞引起血管损伤,可被单核细胞吞噬但不被消灭,并随之进入脑组织,导致大量星状胶质细胞增生,包围脑炎原虫集落或带虫的巨噬细胞,从而形成肉芽肿。EC性肉芽肿主要有3种形态,即细胞性肉芽肿、增生性肉芽肿和坏死性肉芽肿。构成脑肉芽肿的主要细胞为上皮样细胞、小胶质细胞、星状胶质细胞及内皮细胞,而淋巴细胞较少。结论,EC可侵入血管内皮破坏血脑屏障或随单核细胞的浸润而进入脑组织;脑肉芽肿的形成限制了EC的扩散;3种形态的脑肉芽肿实际上是一个病理过程的不同发展阶段。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 脑肉芽肿 特殊染色 肉芽肿分型 胶质细胞
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兔脑炎原虫引起脑星形胶质细胞增殖和胶质纤维酸性蛋白的表达 被引量:4
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作者 李瑞珍 银梅 +1 位作者 唐海蓉 潘耀谦 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1308-1314,共7页
为了研究兔脑炎原虫引起脑组织星形胶质细胞增生的特点和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的丰度,经特殊染色、免疫组织化学染色和免疫印迹技术对30只病兔和10只对照兔的脑组织进行了详细的研究。结果显示,病兔的脑组织出现了弥漫性或局灶性... 为了研究兔脑炎原虫引起脑组织星形胶质细胞增生的特点和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的丰度,经特殊染色、免疫组织化学染色和免疫印迹技术对30只病兔和10只对照兔的脑组织进行了详细的研究。结果显示,病兔的脑组织出现了弥漫性或局灶性非化脓性脑炎病变及不同形态的特异性肉芽肿。用改良的革兰染色可在肉芽肿的上皮样细胞及坏死组织中检出蓝色的兔脑炎原虫;用甲基绿派若宁染色可在上皮样细胞的胞质中检出红色的兔脑炎原虫;用抗-GFAP免疫组织化学染色,见病兔脑组织中有大量星形胶质细胞增生,在脑肉芽肿及血管套周围也有大量反应态星形胶质细胞,使之与正常脑组织隔离,增生的星形胶质细胞的足突在血管周围、脑软膜下和室管膜细胞的基底部形成厚层屏障膜。用免疫印迹技术检测,病兔脑组织中GFAP表达的丰度明显高于对照兔,且与抗-GFAP免疫组织化学染色的结果相一致。研究结果表明,兔脑炎原虫能引起脑组织中星形胶质细胞增生,反应态的星形胶质细胞形成的各种屏障膜可保护脑组织免受更大的损伤。 展开更多
关键词 兔脑炎原虫 星形胶质细胞 胶质纤维酸性蛋白 免疫组织化学 免疫印迹技术
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