Endoglin表达和MVD检测与肺癌凋亡指数及临床病理特性相关研究

目的探究肺癌组织中Endoglin表达和微血管密度(MVD)与凋亡指数和临床病理特性之间的相关性。方法回顾性对照研究我院行肺癌根治手术后随访大于5年且临床资料完整的60例肺癌患者的临床资料,根据患者的生存时间分为三组,生存时间≥5年者为A组、生存时间3～5年者为B组,生存时间<5年者为C组,分别研究肺癌组织Endoglin的表达、MVD计数、凋亡指数(AI)与肿瘤病理、分期、预后、凋亡指数间的关系。结果 A组患者的MVD记数平均为(26.32±8.49),平均术后生存期为(6.5±1.3)年,与B、C组相比,均具有统计学意义(P均<0.05);A、B、C组凋亡分数(AI)分别为(5.67±3.11)%、(8.49±3.42)%、(16.57±2.68)%,三组间两两比较,均具有统计学意义(P均<0.05)。结论肺癌中的Endoglin表达和MVD记数与肺癌的凋亡指数密切相关,且MVD记数越高,凋亡指数越高,肿瘤恶性程度越高,预后越差。

血清中sFlt-1、sEng水平及胎盘中Endoglin表达的变化与子痫前期相关性研究

目的:通过对子痫前期患者血清中的可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)和可溶性Endoglin(sEng)的表达水平以及胎盘中Endoglin蛋白的表达水平的测定,探讨它们在子痫前期发生中的作用。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测并比较10例轻度子痫前期患者、30例重度子痫前期患者及40例正常晚期妊娠妇女血清中的sFlt-1和sEng的水平。并通过免疫组化SP法测定三组妊娠妇女胎盘中Endoglin蛋白的表达。结果:(1)正常妊娠组血清中sFlt-1水平低于轻度子痫前期组和重度痫前期组,各组比较差异有显著性(P<0.01)。但轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较差异无统计学意义(P>0.05)。(2)正常妊娠组血清中sEng水平和胎盘组织中Endoglin的平均光密度低于轻度子痫前期组,轻度子痫前期组低于重度子痫前期组,各组比较差异有显著性(P<0.01)。(3)血清中sEng的水平与胎盘组织中Endoglin的表达水平(MOD值)呈正相关关系。结论:sFlt-1和sEng在子痫前期患者的外周血中高表达,Endoglin蛋白在子痫前期胎盘中的表达增高,血清中sFlt-1与sEng可能参与了子痫前期的发生和发展。

血清和胎盘组织TSP-1、Endoglin表达与早发型子痫前期血管生成的相关性

目的分析妊娠期血清及胎盘组织血小板反应蛋白-1(TSP-1)、Endoglin表达与早发型子痫前期血管生成的相关性。方法选取2016年1月至2017年1月,在金华市中心医院收治的30例轻度早发型子痫前期患者作为A组,30例重度早发型子痫前期患者作为B组,30例正常妊娠孕妇作为对照组;检测血中及胎盘组织中TSP-1、Endoglin水平和表达,并分析两者与早发型子痫前期血管生成的相关性。结果三组孕妇血清TSP-1、Endoglin水平比较有显著性差异(F值分别为2.547、2.908,均P<0.05)。B组血清TSP-1、Endoglin水平均显著高于A组和对照组(t值分别为2.346、3.758、2.780、3.995,均P<0.05),A组上述指标显著高于对照组(t值分别为2.258、2.863,均P<0.05)。三组孕妇胎盘组织中TSP-1、Endoglin表达比较有显著性差异(χ~2值分别为24.375、36.733,均P<0.05),B组孕妇胎盘组织中TSP-1及Endoglin表达均显著高于A组和对照组(χ~2值分别为5.079、24.093、2.588、31.093,均P<0.05),A组上述指标显著高于对照组(χ~2值分别为8.531、17.143,均P<0.05)。三组孕妇胎盘组织微血管密度计数有显著性差异(F=5.326,P<0.05),B组显著低于A组和对照组(t值分别为2.547、4.765,均P<0.05),A组显著低于对照组(t=3.558,P<0.05)。A组及B组患者血清中、胎盘中TSP-1与Endoglin呈显著正相关(r=0.641～0.978,均P<0.05),但对照组血清中及胎盘中TSP-1与Endoglin无显著相关性(r分别为0.243、0.195,均P>0.05)。A组及B组患者血清中、胎盘组织中TSP-1、Endoglin水平与微血管密度计数均呈显著负相关(r=-0.598～-0.912,均P<0.05),但对照组血清中及胎盘组织中TSP-1、Endoglin与微血管密度计数均无显著相关性(r=-0.105～-0.183,均P>0.05)。结论早发型子痫前期患者血清及胎盘组织中TSP-1、Endoglin水平增高,两者与血管生成有密切关系。

妊娠期高血压疾病患者血清及脐血中TGF-β1、Endoglin表达水平及临床意义

目的探究妊娠期高血压疾病患者血清及脐血中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Endoglin表达水平及临床意义。方法回顾性分析2020年2月至2023年4月徐州医科大学附属邳州医院收治的148例妊娠期高血压疾病患者的临床资料,将其设为观察组(n=148),选择本院同期收治的109例正常妊娠期女性为对照组(n=109)。比较两组的血清、脐血中TGF-β1、Endoglin水平差异,使用受试者特征(ROC)曲线分析血清指标的诊断价值。将观察组患者根据疾病的严重程度分为妊娠期高血压组(n=64)及子痫前期组(n=84),比较两组患者的血清、脐血中TGF-β1、Endoglin的水平差异,分析血清指标对严重程度的诊断价值。结果观察组患者血清中TGF-β1、Endoglin及脐血中Endoglin水平均高于对照组(P<0.05);两组的脐血TGF-β1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);ROC曲线显示,血清中TGF-β1、Endoglin诊断妊娠期高血压疾病的AUC分别为0.830、0.711(P<0.05);子痫前期组患者血清、脐血中TGF-β1和Endoglin水平均高于妊娠期高血压组患者(P<0.05);ROC曲线显示,血清中TGF-β1、Endoglin诊断妊娠期高血压疾病严重程度的AUC分别为0.808、0.905(P<0.05)。结论TGF-β1、Endoglin表达水平的变化与妊娠期高血压疾病的发生、发展存在联系。

胎儿生长受限孕妇血清与胎盘Gas6、Endoglin、PLAC-1表达水平及其临床意义

目的分析胎儿生长受限(FGR)孕妇血清及胎盘中生长阻滞特异性蛋白6(Gas6)、Endoglin、胎盘特异性蛋白1(PLAC-1)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2022年5月至2024年9月确山县人民医院收治的81例FGR孕妇为FGR组,按照1∶1配对原则,另选取同期81例无FGR孕妇为对照组。比较两组孕妇的基线资料和胎盘相关指标(Gas6 mRNA、Endoglin mRNA、PLAC-1 mRNA、胎盘厚度、胎盘质量),采用Pearson法分析胎盘各指标表达与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量的相关性,比较两组孕妇不同孕期的血清各指标水平,采用Pearson法分析孕妇血清与胎盘各指标表达的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清各指标对FGR的预测价值。结果FGR组孕妇的新生儿体质量、PLAC-1 mRNA、胎盘厚度、胎盘质量[(2.13±0.32)kg、0.50±0.11、(1.90±0.66)cm、(0.38±0.10)kg]明显低于对照组[(3.23±0.29)kg、1.00±0.06、(2.51±0.57)cm、(0.59±0.08)kg],胎盘Gas6 mRNA、Endoglin mRNA(1.42±0.24、1.38±0.16)明显高于对照组(1.04±0.05、1.06±0.07),差异均有统计学意义(P<0.05);胎盘Gas6 mRNA、Endoglin mRNA与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量呈负相关(P<0.05),PLAC-1 mRNA与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量呈正相关(P<0.05);FGR组孕妇孕早、中、晚期的血清Gas6、Endoglin明显高于对照组,PLAC-1明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);孕早、中、晚期血清Gas6、Endoglin、PLAC-1表达与对应指标胎盘中表达量均呈正相关(P<0.05);经ROC分析结果显示,孕早、中、晚期血清Gas6、Endoglin、PLAC-1联合预测FGR的曲线下面积(AUC)分别为0.890、0.913、0.936,均优于单一指标,且血清各指标联合预测FGR的AUC随着孕期的推进依次增大,至孕晚期联合预测AUC为0.936,为最大。结论FGR孕妇血清及胎盘组织中Gas6、Endoglin、PLAC-1表达异常,且血清各指标联合检测对FGR具有一定预测价值,可作为临床早期评估FGR的辅助指标。

瓠瓜KNOX基因家族全基因组鉴定及组织表达分析

【目的】探明瓠瓜KNOX基因家族特征,在瓠瓜全基因组水平上对KNOX基因家族成员进行鉴定和分析,研究其组织表达模式。【方法】利用生物信息学方法,对瓠瓜KNOX家族基因成员进行鉴定、编码蛋白理化性质分析及家族成员结构域和保守基序分析,利用MEGA 5.05软件构建系统进化树,采用实时荧光定量PCR技术,分析KNOX基因在瓠瓜不同组织(根、茎、叶、花、果实)中的表达情况。【结果】鉴定到12个瓠瓜KNOX家族基因,这些基因分布在6条染色体上,且均定位于细胞核。大多数瓠瓜KNOX家族蛋白含有同源异型盒蛋白特有的4种结构域KNOX1、KNOX2、ELK和Homeobox_KN。系统进化分析将瓠瓜KNOX基因分为KNOX ClassⅠ和KNOX ClassⅡ2大类群,2个类群又可进一步分为5个分支,其中ClassⅠ-C为瓠瓜特有的进化分支。KNOX基因启动子区有多个激素响应元件和植物生长相关元件。组织表达分析发现,瓠瓜KNOX基因具有不同的表达模式,KNOX ClassⅠ类基因表达具有组织特异性,在根、茎和果实中表达量较高,在其余组织中表达量较低或不表达,其中Lsi04G014450在根和茎中表达量最高,Lsi11G006380在果实中表达量最高;KNOX ClassⅡ类基因在所有组织中均有较高表达。【结论】瓠瓜KNOX基因家族有12个成员,分布于6条染色体上,在进化关系上可分为5组,具有瓠瓜特有的进化分支,在不同组织中的表达具有特异性。

小麦倒春寒响应基因TaJAZ6的克隆、表达模式及亚细胞定位分析

JAZ蛋白在植物生长发育和胁迫信号通路中具有关键作用。为探究JAZ蛋白在小麦倒春寒中的调控机制,从小麦幼穗中克隆了TaJAZ6基因,并对其分子特征、表达特性与亚细胞定位进行分析。结果表明,该基因CDS序列全长为549 bp,编码178个氨基酸,预测编码蛋白质的分子质量为18.376 ku,理论等电点为9.37,不稳定系数为62.44,属于不稳定蛋白。该基因编码蛋白质具有1个TIFY结构域和1个CCT_2结构域。系统进化树分析发现,该蛋白质与野生二粒小麦和乌拉尔图小麦TIFY 11b蛋白亲缘关系最近。TaJAZ6基因启动子区除含有CAAT-box、TATA-box等基础作用元件外,还含有激素类响应元件、光响应元件、低温响应元件、防御和应激反应元件等。实时荧光定量PCR分析发现,TaJAZ6基因在根、茎、叶和幼穗中均有表达,根系中表达量最高。TaJAZ6基因还受低温和茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导表达,低温胁迫下,TaJAZ6在矮抗58(耐倒春寒)和郑麦366(倒春寒敏感)根、茎和叶中表达趋势相同,均显著升高;喷施300,350μmol/L的MeJA之后再低温处理TaJAZ6在2个小麦品种中表达量均显著下降。TaJAZ6在低温胁迫后的幼穗中表达量出现相反的趋势,在矮抗58幼穗中表达量显著下降,在郑麦366幼穗中则显著上升,推测该基因可能负调控了小麦倒春寒胁迫防御反应。通过喷施MeJA显著降低了低温胁迫下2个小麦品种幼穗中TaJAZ6基因的相对表达量,同时提高了小麦的结实粒数。亚细胞定位试验显示,TaJAZ6蛋白定位于细胞核中。以上研究结果表明,TaJAZ6可能在小麦响应倒春寒胁迫过程中发挥重要作用。

笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响

本试验旨在探讨笼养密度对公母分饲黄羽肉鸡生长性能、免疫器官发育、抗氧化能力、肠道组织形态及免疫相关基因mRNA表达的影响。选用21日龄黄脚麻鸡720只,3层层叠式笼内饲喂,鸡笼规格为长×宽×高=1.2 m×0.8 m×0.4 m,公鸡和母鸡分开饲养,均随机分为4组(每组5个重复),笼养密度分别为15(低密度组)、17(中密度组)、19(中高密度组)和21只/m 2(高密度组)。试验期42 d。结果表明:1)对于公鸡,21~42日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05);43~63日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组和高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。对于母鸡,21~42日龄时,中高密度组和高密度组平均日采食量显著低于低密度组(P<0.05),高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05);43~63日龄时,高密度组平均日采食量显著低于低密度组和中密度组(P<0.05),中高密度组平均日增重显著低于低密度组(P<0.05)。2)对于公鸡,低密度组肝脏重量显著低于其他各组(P<0.05),肝脏指数显著低于高密度组(P<0.05)。3)对于母鸡,中密度组血清超氧化物歧化酶活性显著高于高密度组(P<0.05),中高密度组血清丙二醛含量显著高于高密度组(P<0.05)。4)对于公鸡,中密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05)。对于母鸡,高密度组十二指肠隐窝深度显著高于中高密度组(P<0.05),中高密度组十二指肠绒毛高度/隐窝深度显著高于高密度组(P<0.05);高密度组空肠绒毛高度显著低于中密度组和中高密度组(P<0.05),高密度组空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于低密度组(P<0.05);高密度组回肠隐窝深度显著高于其他各组(P<0.05)。5)对于公鸡,中高密度组空肠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA相对表达量显著高于其他各组(P<0.05)。对于母鸡,中高密度组空肠核因子E2相关因子2(Nrf2)和Toll样受体4(TLR4)mRNA相对表达量显著高于低密度组(P<0.05)。由此可见,高笼养密度会对黄羽肉鸡生长性能、抗氧化能力、肠道组织形态等相关指标产生影响;笼养密度可能通过影响肠道抗氧化和免疫相关基因表达影响黄羽肉鸡肠道免疫功能。

LHCGR胞外结构域蛋白的生信分析、原核表达及纯化

目的为获得小鼠LHCGR胞外结构域蛋白(LHCGR-1),分析其结构及理化性质,为今后研究该蛋白功能及筛选与之相互作用的小分子化合物奠定基础。方法根据NCBI中小鼠LHCGR氨基酸序列合成目的基因Lhcgr-1,经生物信息学分析后,将该基因插入至表达载体pET-28a(+),并转化至BL21(DE3)感受态细胞中;经IPTG诱导,表达重组蛋白pET-28a-LHCGR-1,利用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,之后对该蛋白进行纯化,并通过分子对接技术预测该蛋白与LH、CG的相互作用。结果预测LHCGR-1蛋白分子量为40749.08,由367个氨基酸组成,等电点理论值为5.47;氨基酸序列中有29个丝氨酸位点、10个苏氨酸位点和5个酪氨酸位点;成功构建了表达载体pET-28a-LHCGR-1并获得纯化的目的蛋白;分子对接结果表明目的蛋白可以与LH、CG通过多种相互作用,形成稳定的复合物,有利于其发挥原有的生物学功能。结论成功构建了小鼠胞外结构域蛋白LHCGR-1在大肠杆菌内的原核表达体系并获得了纯化蛋白,分子对接预测该蛋白具有生物学功能,提示该蛋白可以用于后续研究。

西瓜蔗糖转运蛋白SUT家族的鉴定及其在果实发育和逆境响应中的表达分析

蔗糖转运蛋白(SUTs)作为蔗糖主动转运的主要载体,在分配同化物从源到库组织的转运中起着关键作用。尽管SUTs的特性及其生物学功能已在高等植物中得到了深入研究,但该基因家族尚未在西瓜中进行鉴定。本研究在西瓜基因组中共鉴定了4个ClSUT基因,并对其基因和蛋白结构、保守基序、亚细胞定位、染色体分布、进化关系、启动子元件等进行了全面分析。基因结构分析表明,亚族Ⅰ的ClSUT3和ClSUT4基因均只含有一个内含子。所有ClSUT均被预测定位在质膜中,它们均含有一个保守的MFS-2结构域,并且含有与之对应的5个保守基序。系统发育分析发现拟南芥、水稻和西瓜中的SUT分为5个亚族,西瓜ClSUT与拟南芥SUT的亲缘关系更近,被聚类在亚族Ⅰ、亚族Ⅱ和亚族Ⅴ。还在西瓜ClSUT基因的启动子中鉴定到一些与激素和逆境响应相关的作用元件。此外,转录组数据表明,西瓜ClSUT基因的表达对渗透和盐胁迫呈现多样性,很可能参与西瓜对这些逆境的响应。

黄芩苷对多杀性巴氏杆菌感染猪巨噬细胞后炎症因子表达及信号通路影响的研究

为研究不同浓度黄芩苷对多杀性巴氏杆菌(Pm)HN-13株感染的猪巨噬细胞(HD11)内炎症因子表达的影响及与炎症信号通路的相互作用关系,本研究采用western blot检测HN-13株感染(0、30 min、60 min、90 min)HD11细胞中促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路3个关键蛋白(p-ERK/ERK、p-p38/p38、p-JNK/JNK)的表达水平;采用ELISA和荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)分析检测低浓度剂量黄芩苷(L组,20μmol/L)、中浓度剂量黄芩苷(M组,40μmol/L)和高浓度剂量黄芩苷(H组,60μmol/L)对Pm感染的猪巨噬细胞内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β分泌水平及其m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)和模型组(HN-13);利用抑制剂SCH772984阻断ERK通路,采用ELISA和RT-qPCR检测黄岑苷对Pm感染的HD11细胞内炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β表达及m RNA转录水平的影响,同时设置对照组(Control)、模型组(HN-13)、抑制组(HN-13+抑制剂)。结果显示:与HN-13株处理0 min组相比,随着感染时间的延长,HN-13株感染HD11细胞中p-ERK/ERK的蛋白表达量逐渐升高(P<0.01),而p-p38/p38和p-JNK/JNK蛋白表达量均未发生显著变化(P>0.05),表明,HN-13株可使HD11细胞炎症相关ERK通路蛋白表达增强,且与作用时间呈正相关。与模型组(HN-13)相比,3个浓度剂量的黄芩苷均显著抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌水平及m RNA转录水平(P<0.05),且抑制作用随着黄芩苷浓度升高而增强。与抑制组相比,黄芩苷与抑制剂共处理组可以显著抑制HN-13感染的HD11细胞中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌及m RNA转录水平(P<0.05)。综上所述,黄芩苷可以抑制Pm感染的HD11细胞中ERK通路相关蛋白的表达和分泌,进而发挥抗炎作用。本研究为研制防治Pm引起的猪肺疫的新药提供了思路。

荔枝GRF基因家族的全基因组鉴定及表达分析

为揭示荔枝(Litchi chinensis)GFR基因的功能,对荔枝生长调控因子(LcGRF)基因家族进行了全基因组鉴定和分析,并研究其在荔枝中的表达模式。基于荔枝基因组数据库,使用生物信息学软件对LcGRFs家族成员进行全基因组鉴定,分析基本理化性质、染色体定位、基因结构、进化关系、蛋白保守基序、顺式作用元件和时空表达情况进行系统分析。共获得12个GRF基因,不均匀地分布在10条染色体上,内含子2~5个。蛋白保守基序分析发现,荔枝GRF蛋白均含有保守的motif1(WRC)和motif2(QLQ),进化分析LcGRF划分为5个亚家族,LcGRFs启动子上存在大量的光、植物激素、非生物胁迫响应以及生长发育相关的顺式作用元件。不同转录组表达模式结果显示,各个组织中呈现出多样化的表达特征,表明不同成员可能在荔枝不同生长发育过程中发挥调控作用,参与调节荔枝的生长发育。研究显示,荔枝GRF家族成员有12个,划分为5个亚家族。

烟草甲抗菌肽基因Defensin的鉴定及响应细菌的表达模式分析

本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne Defensin(LsDef1和LsDef2)基因在响应细菌侵染过程中的功能。利用生物信息学分析了LsDef1和LsDef2编码蛋白的结构、特征和系统进化关系。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测LsDef1和LsDef2在烟草甲不同发育阶段(卵、1龄幼虫、2龄幼虫、3龄幼虫、4龄幼虫、蛹、成虫)、4龄幼虫不同组织(脂肪体、表皮、中肠、血细胞和马氏管)、病原微生物诱导情况、细菌及细菌细胞壁成分胁迫后的表达模式。序列比对发现烟草甲LsDef1和LsDef2具有典型的6个半胱氨酸,形成3对二硫键,属于β防御素。RT-qPCR显示LsDef1和LsDef2基因在烟草甲不同发育阶段均有表达,在幼虫4龄处于高水平表达;主要表达组织为脂肪体(Fat body)和血细胞(Hemocyte),其次为表皮和中肠,而在马氏管的表达水平最低。外来病原物诱导后,LsDef1和LsDef2基因表达量显著增加,对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus诱导最为敏感,进一步得细菌和细菌细胞壁成分诱导表达模式显示金黄色葡萄球菌诱导高峰期出现在诱导后6 h;PGN-SA诱导表达高峰期为3 h。烟草甲LsDef1和LsDef2是一类可被革兰氏阳性菌诱导的抗菌肽,研究结果为进一步研究昆虫防御素类抗菌肽的功能奠定了基础。

心理资本对大学生压力知觉的影响:认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应

目的:考察心理资本对大学生压力知觉的影响以及认知重评的中介效应和表达抑制的遮掩效应。方法:利用心理资本问卷、情绪调节量表和压力知觉量表对1502名大学生进行问卷调查,采用SPSS 24.0进行描述性统计分析,采用PROCESS进行中介效应分析。结果:1压力知觉与心理资本(r=-0.67,P<0.001)、认知重评(r=-0.48,P<0.001)和表达抑制(r=-0.08,P<0.01)显著负相关,心理资本与认知重评(r=0.65,P<0.001)、表达抑制(r=0.18,P<0.001)显著正相关,认知重评与表达抑制(r=0.37,P<0.001)显著正相关;2中介效应结果表明,控制性别后,认知重评在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有中介效应,表达抑制在心理资本对大学生压力知觉的影响间具有遮掩效应。结论:通过提升大学生的心理资本、增加大学生对认知重评策略的使用频率和减少对表达抑制策略的使用频率来降低其感知的压力。

大白菜BrCYP83B1基因的克隆及表达分析

【目的】细胞色素P450家族是十字花科植物硫苷合成重要的酶系,其中CYP83亚家族主要参与核心结构的合成,旨在探究大白菜(Brassica rapa ssp.pekinensis)CYP83B1基因的功能。【方法】利用RT-PCR技术克隆BrCYP83B1基因,通过生物信息学软件分析其编码蛋白理化性质、同源性及启动子顺式作用元件,利用RT-qPCR技术分析BrCYP83B1的表达模式,并构建其植物超表达载体。【结果】BrCYP83B1 cDNA序列全长为1500 bp,编码499个氨基酸,编码蛋白属于细胞色素P450超家族,主要定位于细胞质,二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,与甘蓝型油菜、青花菜的CYP83B1蛋白具有较高的同源性。启动子分析表明,该基因启动子区域包含水杨酸、脱落酸及茉莉酸甲酯等激素响应的顺式作用元件,说明BrCYP83B1基因表达可能受激素调控。RT-qPCR分析结果表明,BrCYP83B1基因在大白菜的根、茎、叶、花和果中均有表达,且以叶中的表达量最高;茉莉酸甲酯够显著促进该基因的表达,而水杨酸处理对其表达具有一定的抑制作用,脱落酸处理下基因先上调后又下调。【结论】BrCYP83B1可能参与大白菜对激素的响应调控。

急性脑出血模型大鼠脑组织中差异表达基因测序的验证及功能分析

背景:急性脑出血中存在差异表达的基因,这些基因与脑出血发生发展有关。目的:筛选急性脑出血大鼠模型脑组织中差异表达的基因和关键基因,并采用qPCR进行验证,分析关键基因与脑出血后神经功能、脑组织含水量的关系。方法:78只SD大鼠随机分为2组:脑出血组大鼠于右侧尾状核部位注射胶原酶构建脑出血模型,假手术组大鼠于相同部位注射等量生理盐水。运用TRIzol法将2组大鼠的脑组织提取出RNA,转录组测序,筛选急性脑出血脑组织的差异表达的基因,经过qPCR验证,分析基因与脑出血后神经功能、脑组织含水量的关系,并结合生物信息学对关键基因进行GO、KEGG功能富集分析。结果与结论:①筛选出10个关键基因,分别是CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E、CCL20;②脑出血组的关键基因GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E含量低于假手术组(P<0.05),CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、CCL20含量高于假手术组(P<0.05);③关键基因GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E含量与脑组织含水量、神经功能缺损评分正相关(P<0.05),CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、CCL20含量与脑组织含水量、神经功能缺损评分负相关(P<0.05);④GO分析显示基因在生物过程差异表达基因主要富集于白细胞趋化性、趋化因子介导的信号通路;细胞组成差异表达基因主要富集于阳离子通道复合物、离子通道复合物;分子功能差异表达基因主要富集于门控通道活动、离子通道活动;⑤KEGG分析示基因集中于TNF信号通路、谷氨酸能突触、GABA能突触;⑥结论:在脑出血中出现差异表达的基因为CXCL8、SERPINE1、TFPI2、CXCR4、GDA、KCNQ5、ERICH3、SCN3B、CACNA1E、CCL20,这些基因与脑出血后脑组织含水量、神经功能相关,这些基因主要富集在细胞组分、结合功能、细胞突起等相关的生物学功能上。

国产动画对传统文化的表达策略

近年来,迅速发展的国产动画面临着许多困境,如何运用现代思维讲好传统故事,在神话、文化与现实之间找到平衡,是动画创作必须面对的问题。神话作为动画的“壳”,以其特有的结构特征和表达方式,融入了传统文化元素;而文化作为动画的“核”,凭借丰富的意义,赋予动画深刻的内涵和情感。要在世界动画舞台上占据一席之地,国产动画必须充分挖掘和利用传统文化资源,打造具有中国特色的动画品牌。因此,研究国产动画对传统文化的表达对于促进动画的繁荣发展具有积极意义。

低温处理下青花菜衰老过程中叶绿素降解相关基因的表达

为研究不同低温处理对青花菜黄化衰老过程中叶绿素变化及叶绿素降解相关基因表达量的影响。以兰州高原特色蔬菜‘耐寒优秀’品种的青花菜为试验材料,设置近冰温(-0.7℃~-0.4℃)、4℃、10℃3个贮藏温度。结果表明,近冰温(-0.7℃~-0.4℃)处理组在整个贮藏期叶绿素含量显著高于4℃、10℃处理,且L^(*)、a^(*)和b^(*)显著低于4℃和10℃处理。在整个贮藏期,近冰温处理的青花菜BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达量显著低于4℃、10℃处理,这说明近冰温处理抑制了青花菜贮藏期BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达,而4℃、10℃处理诱导了青花菜贮藏期BoCLH1(叶绿素酶1)和BoCLH2(叶绿素酶2)的表达;近冰温处理的青花菜BoPPH(脱镁叶绿素酶)的表达量随着贮藏时间的延长不断下降,而在4℃和10℃处理组中在贮藏15 d时有显著上升,且始终高于近冰温处理组。近冰温处理的BoPaO(脱镁叶绿酸a加氧酶)表达量高峰出现明显滞后,而BoRCCR(红色叶绿素代谢产物还原酶)的表达量在贮藏过程中始终显著高于4℃和10℃处理组。可见,近冰温处理可有效抑制叶绿素的降解,延缓青花菜组织衰老。

羽衣甘蓝BoLMI基因的克隆及时空表达分析

【目的】探究羽衣甘蓝裂叶表型形成的分子机制,研究BoLMI基因对裂叶形成的作用。【方法】以裂叶羽衣甘蓝DH系为试验材料,利用同源克隆技术,成功获取基因完整的cDNA序列,将其命名为BoLMI。【结果】序列分析发现,BoLMI基因全长531个碱基对,共编码176个氨基酸,其蛋白分子量为20 789.35 Da,理论等电点为7.24。根据Pfam保守结构域分析,BoLMI蛋白包含homeobox保守结构域。系统发育分析结果显示,羽衣甘蓝的BoLMI基因与甘蓝型油菜以及结球甘蓝的BoLMI基因同属于一个分支,亲缘关系较近。BoLMI蛋白是位于细胞核内的可溶性蛋白,包含1个跨膜结构域,无信号肽序列。qRT-PCR分析表明,BoLMI基因在裂叶羽衣甘蓝的幼苗期表达水平较高,在莲座期表达水平较低;在羽衣甘蓝莲座期,裂叶品种不同部位叶片BoLMI基因的表达水平均高于圆叶品种,其中在第1片叶的表达量最高。裂叶品种和圆叶品种不同叶片BoLMI基因的表达量差异显著。【结论】推测BoLMI基因在羽衣甘蓝裂叶形成中起重要作用,为加速羽衣甘蓝叶形育种提供了理论基础。

论人工智能生成内容的可版权性:以用户的独创性表达为视角

AIGC既包含来自机器的选择,也包含来自人类用户的选择。当后者满足独创性表达要求时,AIGC便足以被认定为作品。在判断用户的独创性表达时,裁判者应当关心人贡献了什么,而不是工具贡献了什么;应当关心人贡献了什么,而不是人没有贡献什么;应当关心人贡献的实质,而非纠结于其形式。在以上原则的指导下,既有的作品构成要件规则足以支持相当一部分AIGC获得作品资格。AIGC的所谓“随机性”,只是发生在用户指定范围内的“随机”,并不妨碍用户控制达到著作权法的要求。作为文本的提示词,具有转化为包括视觉表达在内的其他类型表达的可能性。若以摄影为参照系,AI与传统工具的比较不仅不能导致对作品资格的否定,反而能够凸显“工具贡献大并不意味着人的贡献不足”。著作权法的“宽进宽出”结构提示我们,将用户做出独创性表达的AIGC纳入著作权法图式是在认知层面最为经济的利益平衡分析框架。考虑到独立创作例外和版权救济手段的灵活性,承认AIGC获得作品资格的可能性并不会过度妨碍公众自由。