CD248负向调控肾细胞癌血流供应

目的探讨肾细胞癌(RCC)组织中内皮唾液酸蛋白(CD248)表达的临床意义。方法应用免疫组化技术,对80例RCC患者肿瘤组织中的CD248进行检测,同时收集患者临床数据进行相关性分析。结果根据CD248的表达程度将患者分为高表达组和低表达组,发现CD248高表达组患者术中出血更少、肿瘤Ki67表达更低。结论在RCC中,CD248表达于血管周细胞上,且高表达组患者的术中出血更少,表明CD248可能发挥促进血管正常化的作用。

内皮唾液酸蛋白在人增生性瘢痕中的表达及其对成纤维细胞表型的调控

目的探讨内皮唾液酸蛋白即CD248在人增生性瘢痕(HS)中的表达及其对人HS成纤维细胞(HSF)表型的调控作用。方法采用实验研究方法。2023年3—5月,空军军医大学第一附属医院烧伤与皮肤外科收治3例HS患儿,其中女2例、男1例,年龄1岁10个月~2岁。取前述患儿术中切除的HS组织及行全厚皮移植术后剩余的全厚皮片即正常皮肤组织,进行后续实验。取前述2种组织,行苏木精-伊红染色后观察组织结构,行Masson染色后观察组织中胶原分布情况,行免疫组织化学染色后观测组织中CD248表达情况。取HS组织,采用组织块培养法提取原代HSF,取第3~5代HSF进行后续实验。将HSF按随机数字表法分为免疫球蛋白G78(IgG78)处理组与IgG对照组,分别用终物质的量浓度为200 nmol/L的人源性CD248单克隆抗体IgG78与人源性IgG对照抗体处理24 h,采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,采用蛋白质印迹法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA的蛋白表达,采用免疫荧光法检测细胞中Ⅰ型胶原蛋白和α-SMA的定位和蛋白表达情况。各实验样本数均为3。对数据行配对样本t检验和独立样本t检验。结果相较于正常皮肤组织,HS组织中表皮与真皮层均明显增厚,真皮层中胶原大量蓄积且排布紊乱。HS组织中CD248表达量明显高于正常皮肤组织(t=5.29,P<0.05)。处理24 h,IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的mRNA表达量分别为0.39±0.05、0.56±0.09,分别明显低于IgG对照组的1.00±0.07、1.00±0.08(t值分别为11.87、6.49,P值均<0.05);IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的蛋白表达量分别为0.617±0.011、0.67±0.14,分别明显低于IgG对照组的1.259±0.052、1.23±0.16(t值分别为20.92、4.52,P值均<0.05)。处理24 h,免疫荧光染色显示,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA主要定位在2组HSF的细胞质中,IgG78处理组HSF中Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的蛋白表达均较IgG对照组明显减少。结论CD248在人HS中表达显著增高,靶向阻断CD248能够显著抑制人HSF的胶原合成与向肌Fb的转分化。

人内皮唾液酸蛋白改良双抗体夹心ELISA检测方法的建立

为建立肿瘤内皮标志物1(tumor endothelial marker 1,TEM 1)ELISA检测方法,依据TEM 1基因胞外区片段序列及原核表达载体pMAL-p5x多克隆位点设计引物,采用PCR技术从含TEM 1全长基因载体中扩增目的片段,将双酶切的目的基因和载体经胶回收连接后插入表达载体并经测序鉴定,在转入宿主菌后用IPTG诱导目的蛋白表达,用分离纯化后的目的蛋白分别免疫鼠和兔以制备多克隆抗体并用ELISA和流式细胞术对抗体进行鉴定,采用兔抗TEM1为捕获抗体、鼠抗TEM 1为检测抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法,棋盘滴定法探索各抗体最佳工作浓度,倍比稀释TEM 1,检测建立方法的灵敏度。成功构建的重组表达质粒pMAL-p5x-hCD248,经纯化复性后获得目的蛋白,免疫后获得兔多抗抗体效价为1∶1 024 000、鼠多抗抗体1∶512 000,棋盘法确定捕获抗体、检测抗体及酶标抗体最佳浓度分别为1∶500、1∶16 000和1∶20 000,经检测证实该方法测定下限为18.31ng/mL;检测50例恶性肿瘤患者与50例健康人血清TEM 1含量,发现差异无统计学意义。