转录因子EN2在小鼠胚胎组织中的分布

目的观察转录因子EN2在小鼠胚胎发育过程中的时空分布规律。方法利用Westernblot技术检测EN2在小鼠胚胎E8．5-E17．5的表达强度；利用免疫组化技术观察EN2在胚胎发育不同时期各组织器官中的分布。结果①Westernblot：E8．5未检测到明显的阳性蛋白条带，E9．5-E15．5在相对分子质量为41×10。处检测到清晰的EN2蛋白条带，表达水平从E9．5-E12．5逐渐增强，E13．5之后逐渐减弱，至E16．5消失。②免疫组化：在胚胎不同时期，EN2蛋白在中后脑交界部、Rathke囊周围、下颌弓、视交叉、嗅球、椎间盘、轴旁肌和一些间充质组织中都有不同程度的表达。结论EN2蛋白可能参与了神经系统、骨骼肌、椎间盘和一些间充质组织的发育与分化。

EN-2:脊椎动物中一种多功能转录因子

EN-2(Engrailed-2)蛋白是同源盒蛋白转录因子EN(Engrailed)在脊椎动物中的一个亚型,它能被细胞分泌和内摄,并调节转录和翻译。EN-2蛋白在脊椎动物的胚胎发育过程中具有重要作用,是神经系统喙尾(A-P)轴分化的重要决定因子,并控制着中脑多巴胺能神经元的发育和存活。新近研究发现,EN-2蛋白还具有更多的功能,包括轴突导向等;并且与一些疾病相关,如帕金森病;它还被认为是自闭症一类疾病和乳腺癌的候选基因。本文就EN-2蛋白的结构、分布、功能及其与疾病的关系作一综述。

Engrailed-2基因在肝癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究Engrailed-2基因(EN2)在人肝癌组织中的表达及意义,观察EN2基因干扰对人肝癌Hep G2细胞增殖和侵袭的影响。方法:应用免疫组织化学法检测126例人肝癌及其癌旁组织EN2的表达。EN2染色结果与临床病理特征的关系采用c2检验。Kaplan-Meier法和Log-rank检验分析EN2表达水平与患者生存期的关系。利用Lipofectamine^(TM) 2000转染EN2小分子干扰RNA(siRNA)至Hep G2细胞,Western blot技术检测EN2蛋白的表达水平。噻唑蓝(MTT)法和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭能力。结果:肝癌组织EN2的阳性表达率为62.7%,明显高于癌旁组织的23.5%(P<0.01)。EN2的阳性表达与肿瘤直径、转移和AJCC分期明显相关。EN2高表达组患者术后5年生存率(5.1%)明显低于低表达组(33.9%,P<0.01)。EN2 si RNA组细胞EN2蛋白的表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。MTT和Transwell实验分别提示EN2 si RNA组细胞的增殖和侵袭率较阴性对照组和空白对照组降低(P<0.05)。结论:EN2在人肝癌组织中表达明显升高,表达下调后可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖和侵袭,EN2可能参与了肝癌的发生发展过程,检测EN2表达水平对判断肝癌的预后具有一定的参考价值。

EN2与β-catenin在膀胱尿路上皮癌中的表达及其意义

目的探讨膀胱尿路上皮癌中EN2与β-catenin的表达及其意义。方法选取60例手术切除的不同病理分级和分期的膀胱尿路上皮癌组织和10例正常膀胱粘膜组织。通过免疫组织化学、Western blot及RT-PCR方法分别检测EN2与β-catenin蛋白和基因的表达情况。结果 EN2及β-catenin蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达明显增强(P<0.05),并与病理分级、分期的程度成正比(P<0.05);EN2及β-catenin基因在膀胱尿路上皮癌中的表达也明显增强(P<0.05),并与病理分级、分期的程度成正比(P<0.05)。结论 EN2和β-catenin在膀胱尿路上皮癌中的表达明显增强;EN2可能通过激活Wnt/β-catenin信号通路,参与膀胱尿路上皮癌的发生、发展。

EN2沉默对肝癌HepG2细胞凋亡以及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的:探究RNA干扰技术(RNAi)沉默Engrailed-2基因(EN2)后对肝癌HepG2细胞凋亡影响以及10号染色体上缺失的磷酸酯酶和张力蛋白同源基因/磷脂酰肌醇激/蛋白激酶B信号通路(PTEN/PI3K/Akt)信号通路的影响。方法:将NC-siRNA、EN2-siRNA的质粒载体分别转染HepG2细胞,转染后分为空白对照组(Control组)、阴性转染组(NC-siRNA组)、EN2-siRNA组,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制情况;平板细胞克隆形成实验检测HepG2细胞克隆形成数量;流式细胞术检测EN2沉默后细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹(WB)检测PTEN/PI3K/Akt蛋白表达情况。结果:EN2-siRNA组24 h、36 h、48 h、72 h细胞增殖抑制率、凋亡率均显著高于Control组和NC-siRNA组,细胞克隆数量形成数目显著低于Control组和NC-siRNA组;EN2-siRNA组细胞G1期细胞比例显著高于Control组、NC-siRNA组,S期细胞比例显著低于Control组、NC-siRNA组(P<0.05)。EN2-siRNA组细胞EN2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著低于Control组、NC-siRNA组,PTEN蛋白高于Control组、NC-siRNA组(P<0.05)。结论:EN2在肝癌HepG2细胞中高表达,沉默EN2表达后,可抑制HepG2细胞增殖,促进凋亡,推测其机制可能与上调PTEN蛋白表达、抑制PI3K/Akt通路有关。

EN2在前列腺癌细胞株和正常前列腺上皮细胞中的表达及其意义

目的探讨同源异型盒基因EN-2在不同前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞中的表达差异及意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫荧光法检测前列腺癌PC3、DUl45和LNCAP细胞以及人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中EN2mRNA和蛋白的表达，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测上述细胞培养液中EN2蛋白的含量变化。结果RT—PCR和ELISA检测结果显示：EN2mRNA和蛋白水平在激素依赖性前列腺癌细胞LNCAP（1．65±0．19、8．74±0．34）和激素非依赖性前列腺癌细胞PC3中（1．08±0．12、3．07±0．24）及DU145（1．15±0．53、2．86±0．26）均高于人正常前列腺上皮细胞（0．42±0．11、0．86±0．99）（P〈0．05），其中LNCAP细胞中EN2mRNA和蛋白表达水平高于其余两种前列腺癌细胞（P〈0．05）。结论EN2在前列腺上皮细胞中呈低表达，在各前列腺癌细胞株中表达增高，并为前列腺癌细胞所分泌。EN2的表达可能与前列腺癌发生发展有关。