电针可促进前脑啡肽原mRNA在大鼠脊髓和延髓的表达:原位杂交研究

本实验室以往的研究表明电针可促进脊髓脑啡肽释放,本研究进一步利用原位杂交方法观察电针后前脑啡肽原mRNA在脊髓和延髓的表达。结果表明电针刺激(2Hz,1-2-3mA,30)后24h同侧脊髓背角前脑啡肽原(PPE)-mRNA阳性细胞数高于对侧。电针后对侧延髓腹内侧网状结构[包括延髓网状巨细胞核(Gi)及其α部(GiA)和Gi的外侧旁核(LPGi)]PPE-mRNA阳性细胞数高于同侧。我们推测电针诱发前脑啡肽原mRNA表达增加可弥补因脑啡肽释放增多而导致脑啡肽前体物质的损失,从而参与针刺镇痛的长期效应。

大鼠延髓内含前-原脑啡肽mRNA、甲硫氨酸-脑啡肽和亮氨酸-脑啡肽神经元的分布

应用原位杂交和免疫组织化学方法,对成年大鼠延髓内含前-原脑啡肽(PPE)mRNA和甲硫氨酸-脑啡肽(M-ENK)与亮氨酸-脑啡肽(L-ENK)免疫反应神经元进行观察。结果表明:含PPEmRNA的神经元胞体,多数分布在孤束核、腹外侧区以及两者之间的网状结构等形成的一条从背内侧到腹外侧区的弧形带内。M-ENK与L-ENK样免疫反应阳性结构(神经元胞体、纤维和终末)也主要密集分布在该带内。本结果对ENK(M-ENK和L-ENK)参与延髓内脏功能活动的调控过程,提供了进一步的形态学证据。

海马内生长抑素及脑啡肽原mRNA对癫痫发作敏感性形成的影响

用惊厥剂量 ( 10mg/kg)的红藻氨酸 (Kainicacid ,KA)诱发SD大鼠出现癫痫发作后 ,观察癫痫发作对海马结构内、海马门部位含生长抑素 (SOM)的抑制性中间神经元以及海马齿状回颗粒细胞 (DGCs)部位的脑啡肽及脑啡肽原mRNA表达的影响。免疫组化结果显示 ,在癫痫发作敏感性形成期 (KA后 5～ 7d)出现前 ,海马门区含SOM抑制性中间神经元进行性脱失 ,而海马苔状纤维 (MF)部位的具有兴奋和致癫痫作用的ENK免疫反应阳性纤维明显增多 ;KA后 2d在海马的DGCs部位开始出现脑啡肽免疫反应阳性神经元。原位杂交技术显示 ,KA后海马DGCs部位脑啡肽原mRNA亦明显增加 ,其峰值出现在KA后 1d (P <0 0 1)。结果提示KA后海马结构内兴奋和抑制过程失衡 ,这很可能与KA后癫痫发作敏感性增强的形成有关。

细胞生物活性肽-蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4^+T细胞mRNA的影响

从基因水平探讨蛋氨酸脑啡肽对小鼠CD4'T细胞mRNA转录的影响。6～8周龄BALB/c雌性小鼠体内、外不同浓度MEK刺激。采用RT-PCR技术检测mRNA,所得不同浓度MEK刺激的CD4+T细胞mRNA和β-actin条带密度比值作为相对表达强度,所得数据采用SPSS11.5软件进行统计分析。4mg/mLMEK体内刺激及10-9～10-12mol/mL的MEK体外刺激促进小鼠CD4'T细胞mRNA转录;10-1～10-8mol/mL的MEK抑制小鼠CD4+T细胞mRNA的转录。10-13～10-14mol/mL的MEK对小鼠CD4'T细胞mRNA的转录无明显变化。适量浓度的MEK体内、外刺激能促进小鼠CD4+T细胞mRNA转录的高效表达。

胎脑黑质脑内移植矫正PD鼠纹状体内脑啡肽mRNA过度表达

用６－ＯＨＤＡ损毁大鼠一侧黑质—纹状体通路可引起ＰＤ模型鼠脑纹状体内多巴胺匿乏．同时，亦可导致脑啡肽ｍＲＮＡ过度表达。我们用地高辛标记的ｃＲＮＡ探针对纹状体内脑啡肽ｍＲＮＡ含量进行了斑点杂交定量研究，发现损伤侧脑啡肽ｍＲＮＡ含量较健侧增高８０％，胎中脑移植到失神经支配的纹状体内，脑啡肽ｍＲＮＡ过度表达得以矫正至正常水平，说明胎多巴胺能神经元脑内移植能够调节脑啡肽基因表达，提供了移植物能与宿主发生神经整合、建立突触联系的间接证据。

外周炎性刺激条件下大鼠脊髓背角PPE mRNA及L-ENK样品和μ阿片受体样阳性结构的变化

以鹿角菜胶（ＣＡＲ）注射到大鼠一侧后爪的足底皮下作为伤害性刺激模型，分别于ＣＡＲ刺激后６、１２ｈ和１、３ｄ处死动物，对照组动物仅将盐水注入一侧后爪足底皮下，用原位杂交法和免疫组织化学法观察前原脑啡肽（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ阳性神经元、亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）和μ阿片受体（ＭＯＲ）样阳性结构在大鼠脊髓背角（ＳＤＨ）的分布和变化。对照组大鼠ＳＤＨ内可见到大量ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元，这些阳性神经元主要分布于Ⅰ、Ⅱ层和Ⅴ、Ⅵ层，ＣＡＲ刺激后６ｈ，刺激侧ＳＤＨ中ＰＰＥｍＲＮＡ阳性神经元的数量明显增多，１２ｈ和１ｄ达到最高水平，３ｄ时略有下降，但仍高于正常水平。Ｌ－ＥＮＫ样阳性纤维和终末主要分布于正常大鼠ＳＤＨ的Ⅰ、Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，Ｌ－ＥＮＫ样阳性结构在刺激侧ＳＤＨ中的密度略有升高，３ｄ后下降直至低于正常水平。ＭＯＲ阳性胞体和纤维主要分布于ＳＤＨ的Ⅱ层，ＣＡＲ刺激后１ｄ，刺激侧Ⅱ层中ＭＯＲ阳性结构明显增加，并持续到刺激后３ｄ。上述结果提示阿片类物质在伤害性信息调控中具有重要作用。

长时间给予高选择性δ阿片受体激动剂抑制δ受体mRNA表达

我们采用反转录-聚合酶键反应（RT-PCR）方法，观察了δ阿片受体肽类激动剂[D-Pen2.5]enkephalin（PDPE）及非肽类激动利BW373U86对δ受体mRNA表达的影响，并比较了两者作用的差异性。结果如下：（1）DPDPE作用24及48h可使δ受体mRNA表达水平显著降低，而BW373U86只在24h有显著抑制作用;（2）DPDPE在10－6mol／L时即可使δ受体的mRNA表达水平显著降低;而BW73U86在10－5mol／L时才有效。可见长时间（24h）给予肽类及非肽类δ阿片激动剂均可显著抑制δ受体的mRNA表达；DPDPE作用较强，作用时程较长。

脑啡肽对早期反应性胶质增生形态及其神经营养功能的影响

目的 研究脑啡肽对早期反应性胶质细胞形态、增殖及神经营养功能的影响。方法 在相差显微镜下观察反应性胶质细胞形态，３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验检测反应性胶质细胞增殖，以Ｇｒｉｅｓｓ反应测定亚硝酸盐含量表示一氧化氮（ＮＯ）量，原位杂交实验检测生长相关蛋白（ｇｒｏｗ ｔｈ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＡＰ－４３）ｍ ＲＮＡ 的表达。结果 脑啡肽能促进损伤边缘的胶质细胞向损伤裸露区伸出宽大扁平的突起，增强反应性胶质细胞３Ｈ－ＴｄＲ的掺入（Ｐ＜０．０５），抑制其ＮＯ的生成（Ｐ＜ ０．０５）；经脑啡肽处理的反应性胶质细胞能增强神经元ＧＡＰ－４３ ｍ ＲＮＡ 的表达（Ｐ＜０．０５）。结论 脑啡肽增强反应性胶质增生的同时抑制了反应性胶质细胞ＮＯ 的生成而增强反应性胶质细胞的神经营养功能。