为了进一步研究烯脂酰辅酶A水解酶1(enoyl CoA hydratase,ECH1)基因的生物学功能,研究采用克隆测序结合PCR-RFLP的方法分析了民猪ECH1基因的部分DNA序列,并对其中的1个点突变进行了3个猪种内的基因型频率和基因频率计算。结果表明:研究...为了进一步研究烯脂酰辅酶A水解酶1(enoyl CoA hydratase,ECH1)基因的生物学功能,研究采用克隆测序结合PCR-RFLP的方法分析了民猪ECH1基因的部分DNA序列,并对其中的1个点突变进行了3个猪种内的基因型频率和基因频率计算。结果表明:研究所检测的ECH1基因序列与网上已有序列相比存在8个单核苷酸多态性(SNPs)位点,其中有2个造成酶切位点的改变;民猪和大白猪在PCR-RFLP-BamHⅠ位点的A、B基因频率均接近0.5,而长白猪B为优势等位基因。展开更多
目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)和细胞增殖核抗原Ki-67在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择2013年1月至2016年12月秦皇岛市第一医院肿瘤科收治的50例结直肠癌...目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)和细胞增殖核抗原Ki-67在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择2013年1月至2016年12月秦皇岛市第一医院肿瘤科收治的50例结直肠癌患者手术切除的组织标本,以10例癌旁组织作为对照,采用免疫组织化学SP法检测结直肠癌组织及癌旁组织中ECHS1和Ki-67的表达,并分析其与临床病理学特征的关系。结果 ECHS1和Ki-67在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为56.0%(28/50)和62.0%(31/50),均显著高于癌旁组织中的表达,差异有显著性(P<0.05)。ECHS1和Ki-67的异常表达与结直肠癌的Dukes分期、分化程度及有无淋巴转移有关(P<0.05)。ECHS1和Ki-67的表达呈正相关关系(r=0.501,P=0.010)。结论在结直肠癌组织中ECHS1和Ki-67的表达明显升高,与Dukes分期、分化程度和淋巴转移有关,且二者具有协同作用。展开更多
目的研究肝细胞癌(HCC)组织中能量代谢相关酶的表达及对肝癌细胞侵袭能力的影响,探讨烯酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)、AMP蛋白激酶(AMPK)、脂肪合成酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶(ACC)等相关酶及低糖环境在HCC发生发展过程中的作用。方法选取解...目的研究肝细胞癌(HCC)组织中能量代谢相关酶的表达及对肝癌细胞侵袭能力的影响,探讨烯酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)、AMP蛋白激酶(AMPK)、脂肪合成酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶(ACC)等相关酶及低糖环境在HCC发生发展过程中的作用。方法选取解放军第一七五医院2015年6月-2016年6月经手术切除的32例HCC患者肝癌及癌旁组织,通过免疫组化技术,检测不同分化程度肝癌及癌旁组织中能量代谢过程中关键酶FAS、ACC及AMPK等表达情况。构建两组肝癌细胞株,对照组:转染空白对照质粒的肝癌细胞Huh7-plv、HepG2-PU6;实验组:转染小干扰RNA(siRNA)的肝癌细胞株Huh7-siECHS1、HepG2-siECHS1。应用Transwell小室实验观察ECHS1及低糖培养和加入表皮生长因子(EGF)等不同营养条件对肝癌细胞侵袭能力的影响。计量资料组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果免疫组化结果显示,肝癌细胞中ACC、AMPKβ表达高于癌旁组织,差异均有统计学意义(21/11 vs 7/25,χ~2=12.44,P<0.05;31/1 vs 26/6,χ~2=4.68,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,在正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)及加入EGF的正常营养条件(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-NEGF)的肝癌细胞侵袭数均明显大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-N、HepG2-siECHS1-N、Huh7-siECHS1-N-EGF、HepG2-siECHS1-N-EGF)的侵袭细胞数(t值分别为6.93、6.51、7.55、4.93,P值均<0.05);低糖培养环境(Huh7-plvLowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)及加入EGF的低糖培养环境(Huh7-plv-LowGlu-EGF、HepG2-PU6-LowGlu-EGF)的肝癌细胞侵袭数亦大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-LowGlu、HepG2-siECHS1-LowGlu、Huh7-siECHS1-LowGlu-EGF、HepG2-siECHS1-LowGlu-EGF)的侵袭细胞数,差异均有统计学意义(t值分别为9.52、5.80、20.52、8.80,P值均<0.05)。表明不同营养条件下,干扰ECHS1后肝癌细胞Huh7、HepG2的侵袭能力均明显降低。此外,加入EGF后(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-N-EGF)与正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)相比,穿透小室的细胞数明显增多(t值分别为4.44、3.17,P值均<0.05);而低糖条件下(Huh7-plv-LowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)与正常营养环境相比,发生侵袭的细胞数有所增加,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 ECHS1、EGF可明显增强肝癌细胞侵袭转移能力,低糖饥饿条件亦可对肝癌细胞侵袭能力起到一定促进作用。展开更多
目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2...目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,蛋白质印迹法检测细胞中ECHS1蛋白的表达水平。pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染HepG2细胞后,CCK-8(cellcountingkit-8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平。结果:成功建立稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞中ECHS1蛋白的表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pGPU6的HepG2细胞)(P<0.05)。与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),p-ERK、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ECHS1可能通过上调p-ERK、cyclinD3和cyclinD1的表达而促进肝癌HepG2细胞的增殖。展开更多
文摘为了进一步研究烯脂酰辅酶A水解酶1(enoyl CoA hydratase,ECH1)基因的生物学功能,研究采用克隆测序结合PCR-RFLP的方法分析了民猪ECH1基因的部分DNA序列,并对其中的1个点突变进行了3个猪种内的基因型频率和基因频率计算。结果表明:研究所检测的ECH1基因序列与网上已有序列相比存在8个单核苷酸多态性(SNPs)位点,其中有2个造成酶切位点的改变;民猪和大白猪在PCR-RFLP-BamHⅠ位点的A、B基因频率均接近0.5,而长白猪B为优势等位基因。
文摘目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)和细胞增殖核抗原Ki-67在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。方法选择2013年1月至2016年12月秦皇岛市第一医院肿瘤科收治的50例结直肠癌患者手术切除的组织标本,以10例癌旁组织作为对照,采用免疫组织化学SP法检测结直肠癌组织及癌旁组织中ECHS1和Ki-67的表达,并分析其与临床病理学特征的关系。结果 ECHS1和Ki-67在结直肠癌组织中的阳性表达率分别为56.0%(28/50)和62.0%(31/50),均显著高于癌旁组织中的表达,差异有显著性(P<0.05)。ECHS1和Ki-67的异常表达与结直肠癌的Dukes分期、分化程度及有无淋巴转移有关(P<0.05)。ECHS1和Ki-67的表达呈正相关关系(r=0.501,P=0.010)。结论在结直肠癌组织中ECHS1和Ki-67的表达明显升高,与Dukes分期、分化程度和淋巴转移有关,且二者具有协同作用。
文摘【目的】在分子层面上研究家蚕微孢子虫Nosema bombycis与家蚕Bombyx mori蛋白的相互作用,初步探讨家蚕微孢子虫向家蚕细胞能量中心靠近的原因。【方法】采用Far-western blot分析与家蚕微孢子虫具有相互作用的家蚕中肠蛋白,质谱鉴定筛选出候选蛋白。PCR扩增候选蛋白的基因,连接到p ET30a载体并转入大肠杆菌Escherichia coli DH5α感受态细胞培养,测序选取正确的3个重组质粒,转化到大肠杆菌E.coli BL21感受态细胞中诱导表达候选蛋白,亲和层析柱纯化候选蛋白,制备多克隆抗体。用免疫共沉淀和间接免疫荧光技术验证候选蛋白与家蚕微孢子虫的相互作用。【结果】Far-western blot筛选到的anti-SWP9和anti-SWP5抗体与感染家蚕微孢子虫的家蚕中肠总蛋白的PVDF膜孵育,分别在26 k D和34 k D处检测到一条特异条带,说明家蚕微孢子虫与26 k D和34 k D的家蚕中肠蛋白发生了相互作用。对质谱鉴定结果进行蛋白质的分子量、肽段数以及功能的分析,筛选出与家蚕微孢子虫相互作用的候选家蚕蛋白烯酰辅酶A水合酶(ECH1)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和3-羟酰辅酶A脱氢酶(HCDH)。利用制备的能够特异识别ECH1,GAPDH和HCDH 3种蛋白的多克隆抗体anti-ECH1,anti-GAPDH和anti-HCDH进行免疫共沉淀,证实了家蚕微孢子虫与家蚕中肠蛋白ECH1和GAPDH具有相互作用;间接免疫荧光分析结果进一步说明GAPDH能与家蚕微孢子虫特异性结合。【结论】家蚕微孢子虫可以和家蚕蛋白ECH1和GAPDH特异性结合。由于ECH1是定位于线粒体膜上的脂肪酸β-氧化的关键酶,GAPDH是糖酵解途径的关键酶,推测家蚕微孢子虫可能通过和家蚕ECH1和GAPDH的相互作用,在空间上靠近宿主细胞的线粒体和糖酵解途径,便于摄取宿主细胞脂肪酸β-氧化和糖酵解途径产生的中间产物和ATP,满足家蚕微孢子虫的物质和能量需求。
文摘目的研究肝细胞癌(HCC)组织中能量代谢相关酶的表达及对肝癌细胞侵袭能力的影响,探讨烯酰辅酶A水合酶短链1(ECHS1)、AMP蛋白激酶(AMPK)、脂肪合成酶(FAS)、乙酰CoA羧化酶(ACC)等相关酶及低糖环境在HCC发生发展过程中的作用。方法选取解放军第一七五医院2015年6月-2016年6月经手术切除的32例HCC患者肝癌及癌旁组织,通过免疫组化技术,检测不同分化程度肝癌及癌旁组织中能量代谢过程中关键酶FAS、ACC及AMPK等表达情况。构建两组肝癌细胞株,对照组:转染空白对照质粒的肝癌细胞Huh7-plv、HepG2-PU6;实验组:转染小干扰RNA(siRNA)的肝癌细胞株Huh7-siECHS1、HepG2-siECHS1。应用Transwell小室实验观察ECHS1及低糖培养和加入表皮生长因子(EGF)等不同营养条件对肝癌细胞侵袭能力的影响。计量资料组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ~2检验。结果免疫组化结果显示,肝癌细胞中ACC、AMPKβ表达高于癌旁组织,差异均有统计学意义(21/11 vs 7/25,χ~2=12.44,P<0.05;31/1 vs 26/6,χ~2=4.68,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,在正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)及加入EGF的正常营养条件(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-NEGF)的肝癌细胞侵袭数均明显大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-N、HepG2-siECHS1-N、Huh7-siECHS1-N-EGF、HepG2-siECHS1-N-EGF)的侵袭细胞数(t值分别为6.93、6.51、7.55、4.93,P值均<0.05);低糖培养环境(Huh7-plvLowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)及加入EGF的低糖培养环境(Huh7-plv-LowGlu-EGF、HepG2-PU6-LowGlu-EGF)的肝癌细胞侵袭数亦大于相应干扰ECHS1后(Huh7-siECHS1-LowGlu、HepG2-siECHS1-LowGlu、Huh7-siECHS1-LowGlu-EGF、HepG2-siECHS1-LowGlu-EGF)的侵袭细胞数,差异均有统计学意义(t值分别为9.52、5.80、20.52、8.80,P值均<0.05)。表明不同营养条件下,干扰ECHS1后肝癌细胞Huh7、HepG2的侵袭能力均明显降低。此外,加入EGF后(Huh7-plv-N-EGF、HepG2-PU6-N-EGF)与正常营养条件(Huh7-plv-N、HepG2-PU6-N)相比,穿透小室的细胞数明显增多(t值分别为4.44、3.17,P值均<0.05);而低糖条件下(Huh7-plv-LowGlu、HepG2-PU6-LowGlu)与正常营养环境相比,发生侵袭的细胞数有所增加,但差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 ECHS1、EGF可明显增强肝癌细胞侵袭转移能力,低糖饥饿条件亦可对肝癌细胞侵袭能力起到一定促进作用。
文摘目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,蛋白质印迹法检测细胞中ECHS1蛋白的表达水平。pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染HepG2细胞后,CCK-8(cellcountingkit-8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平。结果:成功建立稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞中ECHS1蛋白的表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pGPU6的HepG2细胞)(P<0.05)。与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),p-ERK、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ECHS1可能通过上调p-ERK、cyclinD3和cyclinD1的表达而促进肝癌HepG2细胞的增殖。
