铜绿假单胞菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的研究

目的了解氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌16S r RNA甲基化酶基因和氨基糖苷修饰酶基因的携带情况,探讨铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物的耐药机制。方法收集临床分离的氨基糖苷类抗菌药物耐药的铜绿假单胞菌35株,采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药物敏感性试验,聚合酶链反应(PCR)检测arm-A、rmt-A、rmt-B、rmt-C、rmt-D 5种16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰb、aac(6')-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ6种氨基糖苷修饰酶基因。结果对氨基糖苷类药物耐药的铜绿假单胞菌同时对多种其他抗菌药物耐药,仅碳青霉烯类的亚胺培南耐药率较低,为5.7%。21株检出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因,占60.0%;30株检出氨基糖苷修饰酶基因,占85.7%,其中28株检出aac(3)-Ⅱ基因,占80.0%,18株检出ant(3″)-Ⅰ基因,占51.4%,其余8种基因未检出。结论在铜绿假单胞菌对氨基糖苷类抗菌药物耐药的菌株中,检测出rmt-B 16S r RNA甲基化酶基因和aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ氨基糖苷修饰酶基因,铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。

肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因及氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解临床分离的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pnenmoniae,Kpn)氨基糖苷类耐药基因携带状况。方法对临床分离的84株Kpn16S rRNA甲基化酶基因,armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA;氨基糖苷类修饰酶基因,aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、aac(6’)-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ用PCR法检测。结果84株菌中检出16S rRNA甲基化酶基因rmtB阳性4株(4.8%);氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ阳性分别为8株(9.5%)、10株(11.9%)、8株(9.5%)。结论从84株Kpn菌中发现16S rRNA甲基化酶基因rmtB及氨基糖苷类修饰酶基因aac(3)-Ⅱ、aac(6’)-Ⅰb、ant(3")-Ⅰ,临床应对此类菌株引起重视。

肠杆菌科细菌对氨基糖苷类的耐药性及 16S rRNA 甲基 化酶基因的检测研究

目的了解氨基糖苷类耐药肠杆菌科细菌的分布、耐药情况,及16S rRNA甲基化酶基因型的分布,为临床用药提供参考依据。方法收集宁夏医科大学总医院2017年临床分离的非重复肠杆菌科细菌142株,细菌鉴定采用VITEK-2 Compact系统,药敏试验采用肉汤微量稀释法,PCR扩增16S rRNA甲基化酶基因(armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH、npmA)。结果142株肠杆菌科细菌中72株对氨基糖苷类耐药。这72株菌对头孢菌素类、氟喹诺酮类、氨曲南的耐药率均≥77.1%,对酶抑制剂复合制剂头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦的耐药率≥51.4%,对头孢他啶-阿维巴坦、替加环素的耐药率<10%,对碳青霉烯类耐药率≤40.0%。氨基糖苷类敏感株对多数抗菌药物的耐药率低于氨基糖苷类耐药株。氨基糖苷类耐药株中有71株检出16S rRNA甲基化酶基因,总阳性率为50.0%(71/142),在氨基糖苷类耐药株中的阳性率为98.6%(71/72)。71株中rmtB 54株,占76.1%;armA 14株,占19.7%;rmtA 2株,占2.8%;rmtB+armA 1株,占1.4%。未检出rmtC、rmtD、rmtE、rmtF、rmtG、rmtH和npmA基因。结论rmtB和armA 16S rRNA甲基化酶是该院临床分离肠杆菌科细菌对氨基糖苷类耐药的主要机制。

16S rRNA甲基化酶基因在产ESBLs肠杆菌科细菌中的分布

目的了解临床分离的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的革兰阴性肠杆菌科细菌中16S rRNA甲基化酶基因的分布情况。方法对临床分离的70株革兰阴性肠杆菌科细菌用VITEK-32型全自动微生物分析系统进行细菌鉴定,用纸片扩散法检测ESBLs,并用聚合酶链反应(PCR)检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA 6种16S rRNA甲基化酶基因,对检测的阳性产物进行测序,并通过GenBank比对DNA序列。结果 70株产ESBLs革兰阴性肠杆菌中,9株16S rRNA甲基化酶基因阳性,其中5株检出armA基因,4株检出rmtB基因,2株同时检出armA和rmtB基因,rmtA、rmtC、rmtD、npmA 4种基因扩增均为阴性。结论不同地区医院16S rRNA甲基化酶基因的分布情况各不相同。

氨基糖苷类修饰酶基因aac(2')-Ib型在耐药鲍曼不动杆菌中流行

目的调查一组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药机制。方法收集2013年1至3月江苏省淮安市第一人民医院住院患者标本中分离到的鲍曼不动杆菌共32株,用分子鉴定法确认为鲍曼不动杆菌,再用聚合酶链反应(PCR)方法分析9种氨基糖苷类修饰酶基因与7种16S r RNA甲基化酶基因。结果本组32株耐药鲍曼不动杆菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:aac(2')-Ib 32株(100.0%)、aac(3)-I 15株(46.9%)、aac(6')-Ib 19株(59.4%)、ant(3'')-I 20株(62.5%)、aph(3')-I 19株(59.4%),与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A 25株(78.1%)。阳性基因共分为7种检测模式,其中以aac(2')-Ib+aac(3)-I+aac(6')-Ib+ant(3'')-I+aph(3')-I+arm A等6种基因均阳性的模式最高,为12株(37.5%)。结论产5种氨基糖苷类修饰酶基因(aac(2')-Ib、aac(3)-I、aac(6')-Ib、ant(3'')-I、aph(3')-I)与1种16S r RNA甲基化酶基因arm A是本组耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药的重要原因。在鲍曼不动杆菌临床分离株检出aac(2')-Ib型氨基糖苷类修饰酶基因为国内首次报道。

肠杆菌科细菌16S rRNA甲基化酶基因检测及其同源性研究

目的了解肠杆菌科细菌含16S rRNA甲基化酶基因的现状并初步探讨该基因的传播途径。方法临床分离阿米卡星高度耐药菌株,用PCR方法检测其16S rRNA甲基化酶基因,并进行序列比对;肠杆菌科基因间重复一致性序列-PCR(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析,接合试验验证耐药基因水平传播途径。结果 374株临床分离菌中24株含有甲基化酶基因(6.41%),其中armA基因阳性10株,rmtB基因阳性10株,2种基因同时阳性4株;ERIC-PCR发现其中包含高度同源的大肠埃希菌;45.8%(11/24)16S rRNA阳性菌接合试验阳性。结论肠杆菌科细菌对氨基糖苷类药物高度耐药与16S rRNA甲基化酶有关。16S甲基化酶编码基因既可通过克隆传播,也可通过质粒水平传播。

鲍氏不动杆菌ICU分离株16SrRNA甲基化酶、氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的了解分离于ICU的鲍氏不动杆菌(ABA)氨基糖苷类药物各种耐药相关基因存在状况,探讨ABA多药耐药机制。方法收集20株分离自2007年10月-2008年7月ICU患者临床标本的ABA,采用纸片扩散法测定32种抗菌药物的敏感性;采用PCR法检测armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD、npmA、aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Iad、aac(6′)-Ⅰb、aac(6′)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、ant(2″)-Ⅰ16S rRNA甲基化酶与氨基糖苷类修饰酶基因。结果20株ABA菌株中检出aac(3)-Ⅰ、aac(3)-Ⅱ、aac(6′)-Ⅰb、ant(3″)-Ⅰ4种氨基糖苷类修饰酶基因,阳性率分别为aac(3)-Ⅰ10%、aac(3)-Ⅱ15%、aac(6′)-Ⅰb 30%、ant(3″)-Ⅰ25%;未检出氨基糖苷类修饰酶新亚型-aac(6′)-Iad基因和16S rRNA甲基化酶基因。结论ABA对氨基糖苷类药物耐药情况严重、机制复杂,产氨基糖苷类修饰酶为主要原因之一。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对氨基糖苷类抗生素耐药基因研究

目的了解浙江部分地区碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）对氨基糖苷类抗生素（AGs）耐药情况，揭示耐药基因携带情况及耐药菌株分子流行病学规律。方法收集2013年1月至2014年6月浙江省4家医院分离的CRKP菌株104株，包括浙江大学医学院附属邵逸夫医院（简称S医院）56株，浙江大学医学院附属第一医院（简称z医院）22株，义乌市中医医院（简称Y医院）13株和杭州市富阳区第一人民医院（简称F医院）13株。采用VITEK2Compact法和K—B纸片法检测菌株对常用药物及3种AGs（卡那霉素、庆大霉素和阿米卡星）进行药敏分析。通过PCR及测序技术筛查常见氨基糖苷类耐药基因：16SrRNA甲基化酶基因（rmtA、rmtB和armA）及氨基糖苷修饰酶耐药基因[aac（6’）Ib]，并分析耐药性与耐药基因携带状态的关系。采用PFGE对rmtB阳性菌株进行同源性分析，解析各医院菌株流行播散规律。结果104株CRKP菌株均为多重耐药菌，对头孢菌素类、氟喹诺酮类中的环丙沙星和左旋氧氟沙星及呋喃妥因均具有极高的耐药率，对庆大霉素、卡那霉素和阿米卡星的耐药率分别为：73．1％（76／104）、64．4％（67／104）和56．7％（59／104）；氨基糖苷类耐药基因的携带率分别为rmtB56．7％（59／104）、aac（6’）Ib17．3％（18／104）、armA1．9％（2／104），未检到rmtA，未携带筛选基因的菌株有37株。阿米卡星耐药株同时对卡那霉素和庆大霉素耐药，且均为rmtB阳性菌株。PFGE分型结果显示，104株菌分为11个克隆群，每家医院均存在散在分布的非流行克隆。携带rmtB基因菌株有7个主要流行克隆群（Ⅰ～Ⅶ），其中Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅴ型流行于S医院，Ⅱ型、Ⅵ型和Ⅶ型流行于Z医院，Y医院的菌株呈克隆散在分布，F医院有Ⅳ型克隆型别（3株）。结论AGs对CRKP菌株仍有一定敏感性，菌株对AGs耐药产生的主要机制是rmtB基因介导的16SrRNA甲基化酶，医院须加强院感防控。

铜绿假单胞菌临床分离株新型氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的了解铜绿假单胞菌临床分离株对氨基糖苷类药物耐药的遗传学背景。方法收集2018年3月-2019年5月浙江省宁波与杭州两个地区6所医院的耐药铜绿假单胞菌98株(非重复株),采用琼脂稀释法测定其对13种抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);聚合酶链反应检测14种氨基糖苷类修饰酶基因和10种16S rRNA甲基化酶基因;比较宁波与杭州地区分离株耐药率和耐药基因携带率。结果98株铜绿假单胞菌对阿米卡星、妥布霉素和庆大霉素3种氨基糖苷类药物耐药率均<30%,对其余10种抗菌药物的耐药率高达60.20%~94.90%。宁波分离株对3种氨基糖苷类药物的耐药率均高于杭州分离株。98株菌共检出5种氨基糖苷类修饰酶基因:ant(3'')-Ⅰ(13/98,13.27%)、ant(2'')-Ⅰ(11/98,11.22%)、aac(6')-Ⅰb(7/98,7.14%)、aph(3')-ⅩⅤ(4/98,4.08%)、aac(6')-Ⅱ(3/98,3.06%),和1种16S rRNA甲基化酶基因:rmtB(10/98,10.20%)。宁波分离株氨基糖苷类耐药基因ant(2'')-Ⅰ、ant(3'')-Ⅰ、aph(3')-ⅩⅤ和rmtB检出率高于杭州分离株。25株菌检出氨基糖苷类耐药基因(25/98,25.51%),其中15株携带2种及以上耐药基因,10株携带1种耐药基因。10株检出16S rRNA甲基化酶基因rmtB的菌株对氨基糖苷类药物的MIC均≥256μg/ml。耐药基因携带模式共有6种,与氨基糖苷类药物耐药表型相符。结论携带ant(3'')-Ⅰ、ant(2'')-Ⅰ、aac(6')-Ⅰb、aph(3')-ⅩⅤ、aac(6')-Ⅱ、rmtB基因是本组铜绿假单胞菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。

多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类耐药相关基因研究

目的调查多药耐药鲍氏不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、16S rRNA甲基化酶基因和抗菌药物外排泵基因adeB的存在情况。方法收集2008年1-12月医院住院患者痰标本中分离的多药耐药鲍氏不动杆菌共20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析9种AMEs基因、2种16S rRNA甲基化酶基因和抗菌药物外排泵基因adeB。结果 20株鲍氏不动杆菌共检出4种AMEs基因:aac(3)-Ⅰ11株为55.0%、aac(6′)-Ⅰb 12株为60.0%、ant(3″)-Ⅰ15株为75.0%、aph(3′)-Ⅰ15株为75.0%,抗菌药物外排泵基因adeB 17株为85.0%,其余7种基因未检出。结论 20株多药耐药鲍氏不动杆菌菌株检出的4种氨基糖苷类修饰酶基因阳性率较高,2种16S rRNA甲基化酶基因未检出,抗菌药物外排泵基因adeB阳性率高;在氨基糖苷类耐药株中抗菌药物外排泵基因adeB检出率高。