大肠杆菌耐热肠毒素的纯化及部分特性分析

本文介绍一种简单、快速的提取和纯化大肠杆菌耐热肠毒素(ST)的方法,纯化过程包括:硫酸铵沉淀,Sephadex G-25 Bio-Gel P-4凝胶过滤。纯化后的纯毒素比活性为5×10~5鼠单位/mg蛋白。肠毒素被纯化167倍,回收率为33.7％。

产肠毒素性大肠杆菌耐热性肠毒素(ST)提纯方法研究

本文运用硫酸铵沉淀、羟基磷灰右处理、酒精抽提、Sp-sephadex C-25阳离子交换凝胶柱及DEAE-Sephadex A-25阴离子交换凝胶柱交换洗脱以及高压液相色谱法进行产肠毒素大肠杆菌(ETEC)耐热性肠毒素(ST)的纯化,从10000ml细菌培养液中获得纯化ST1.05mg。

肠产毒性大肠埃希菌定植因子研究进展

肠产毒性大肠埃希菌定植因子为近几年发现的一种重要的细菌致病菌毛,它能使大肠杆菌粘附于宿主肠牯膜而不被肠蠕动和肠分泌液所清除,再通过其分泌肠毒素导致婴幼儿和旅行者腹泻。菌毛亚单位的保守区域、抗原决定簇组成、定植因子质粒与毒力编码基因的联系,对研制广谱重组菌毛疫苗具有重要指导意义。本文综述了近几年来有关定植因子菌毛的研究进展,以及与各类肠毒素编码质粒的相关性和疫苗研究概况。

CFA／Ⅰ重组克隆定居因子菌毛抗原的纯化及形态学观察

用基因重组技术获得的高效表达肠毒素大肠杆菌定居日子抗原Ⅰ（ＣＦＡ／Ⅰ）的重组克隆，通过匀浆破碎、硫酸铵分级盐析部分纯化，再经超速离心及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０柱层析，得到了ＣＰＡ／Ⅰ的纯化样品，得率约为０．９ｍｇ／ｇ湿菌。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）显示一条蛋白质带，其分子量为１５ｋＤａ，与天然ＣＦＡ／Ⅰ相同。免疫扩散和蛋白质印迹试验证明，纯化的重组克隆ＣＦＡ／Ⅰ与天然ＣＦＡ／Ⅰ具有相同的抗原性及免疫原性。并在电镜下观察了ＣＦＡ／Ⅰ的菌毛形态。

大肠杆菌耐热性肠毒素(STa)的纯化及其特性鉴定

产肠毒素性大肠杆菌工程菌株pSLM004在限定性培养基上培养后,上清液经硫酸铵沉淀、丙酮抽提、Sephadex G-25凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Bio-gel P-4凝胶及反相高压液相层析,获得的STa纯化倍数为302.7倍,有效剂量达10.72ng/鼠单位,回收率为9.9%。纯化的STa在Sephadex G-25凝胶过滤时出现1个蛋白峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)呈现1条蛋白带;在100℃30min不失活,121℃15min则失活;在pH 1～10范围内保持活性;胰蛋白酶、链霉蛋白酶对其活性无影响;2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)可使其迅速失活,表明在STa分子中有生物活性所必需的二硫键存在。