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代谢工程改造大肠杆菌生产氢咕啉酸
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作者 董宁 房欢 +4 位作者 赵莹 姜平涛 赵江华 张同存 张大伟 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第19期44-52,共9页
维生素B_(12)是唯一含有金属离子的维生素,其合成途径尤为复杂。大肠杆菌工程菌是生成维生素B_(12)的新菌种。氢咕啉酸作为维生素B_(12)合成途径重要的稳定中间体,通过代谢工程提高大肠杆菌氢咕啉酸的产量具有重要意义。经过不同宿主的... 维生素B_(12)是唯一含有金属离子的维生素,其合成途径尤为复杂。大肠杆菌工程菌是生成维生素B_(12)的新菌种。氢咕啉酸作为维生素B_(12)合成途径重要的稳定中间体,通过代谢工程提高大肠杆菌氢咕啉酸的产量具有重要意义。经过不同宿主的对比发现BW25113(DE3)是生产氢咕啉酸的合适宿主。利用CRISPR/Cas9介导的基因组编辑技术将氢咕啉酸生物合成基因在染色体上表达,氢咕啉酸产量提高12倍,达到6.38 mg/L。增加前体尿卟啉原Ⅲ供应,氢咕啉酸产量再次提高,达到11.61 mg/L。敲除ackA-pta对氢咕啉酸产量提高没有效果。经过引入运动发酵假单胞菌来源的Entner-Doudoroff途径提高还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)水平,1株无抗菌株的氢咕啉酸产量提高到14.60 mg/L。该研究为大肠杆菌高效生产维生素B_(12)奠定了基础。 展开更多
关键词 氢咕啉酸 大肠杆菌 适配筛选 代谢工程 entner-doudoroff途径
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系统代谢工程改造谷氨酸棒杆菌高产L-丙氨酸 被引量:1
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作者 吴晨 王泽婷 +5 位作者 赵桂红 吕庚承 王非傲 刘月香 陈宁 李燕军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2023年第21期9-15,I0001,I0002,共9页
L-丙氨酸是一种重要的天然氨基酸,广泛应用于医药、食品、饲料等领域。目前,L-丙氨酸主要通过大肠杆菌来生产,开发安全、工业稳定的谷氨酸棒杆菌生产菌株具有重要的意义。该研究筛选了外源丙氨酸脱氢酶,在不以其他氨基酸为氨基供体的条... L-丙氨酸是一种重要的天然氨基酸,广泛应用于医药、食品、饲料等领域。目前,L-丙氨酸主要通过大肠杆菌来生产,开发安全、工业稳定的谷氨酸棒杆菌生产菌株具有重要的意义。该研究筛选了外源丙氨酸脱氢酶,在不以其他氨基酸为氨基供体的条件下高效率合成L-丙氨酸。强化非磷酸转移酶系统(phosphotransferase system,PTS)葡萄糖摄取途径,极大地促进了细胞的生长和L-丙氨酸的合成。引入异源Entner-Dondoroff途径,通过4步反应即可实现糖酵解途径10步反应供应前体物丙酮酸,进一步提高了L-丙氨酸的产量。此外,为了避免抗生素的使用和保证菌株的遗传稳定性,将关键基因整合到基因组上。最终工程菌株在5 L发酵罐发酵48 h产生104 g/L L-丙氨酸。该研究为利用谷氨酸棒杆菌工业化生产L-丙氨酸奠定了基础,同时为其他丙酮酸族产品的代谢工程研究提供了参考。 展开更多
关键词 谷氨酸棒杆菌 L-丙氨酸 丙氨酸脱氢酶 非PTS系统 EMP途径 ED途径
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产乙醇运动发酵单胞菌的研究进展 被引量:16
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作者 蔺玉萍 张木清 陈柏铨 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期472-477,共6页
运动发酵单胞菌作为天然生产乙醇的主要微生物之一,具有特殊的Entner Doudoroff途径和其他一些特殊的糖代谢和能量代谢方式,因此具有乙醇产率高和乙醇耐受力强的显著特点。通过简述运动发酵单胞菌的糖代谢和能量代谢、乙醇和高渗透压等... 运动发酵单胞菌作为天然生产乙醇的主要微生物之一,具有特殊的Entner Doudoroff途径和其他一些特殊的糖代谢和能量代谢方式,因此具有乙醇产率高和乙醇耐受力强的显著特点。通过简述运动发酵单胞菌的糖代谢和能量代谢、乙醇和高渗透压等耐性及其遗传改造三方面的研究进展。 展开更多
关键词 运动发酵单胞菌 乙醇 entner-doudoroff途径
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古菌独特的脱氧酮糖酸(ED)葡萄糖酵解途径 被引量:4
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作者 刘天明 申玉龙 +1 位作者 刘庆军 刘波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1126-1131,共6页
葡萄糖通过"中心代谢途径"降解为丙酮酸的过程对于生物体物质及能量的代谢具有重要的作用。古菌的葡萄糖酵解过程具有与真核生物以及细菌葡萄糖代谢显著不同的特征。生化性质分析、基因组学、代谢组学等研究结果表明,古菌糖酵... 葡萄糖通过"中心代谢途径"降解为丙酮酸的过程对于生物体物质及能量的代谢具有重要的作用。古菌的葡萄糖酵解过程具有与真核生物以及细菌葡萄糖代谢显著不同的特征。生化性质分析、基因组学、代谢组学等研究结果表明,古菌糖酵解Embden-Meyerhof(EM)与Entner-Doudoroff(ED)途径具有许多与真核生物及细菌经典的EM与ED途径不同的特异性酶类,其中ED糖酵解代谢又可分为非磷酸化与半磷酸化的糖酵解途径。古菌独特的ED糖酵解途径在代谢路径、酶、调节位点、表达调控、能量转化等方面与真核生物及细菌经典的糖酵解途径均存在明显的差异,反映了其适应极端的生理环境而形成可塑性代谢路径的能力。本文综述了古菌ED葡萄糖降解过程中的各种酶、调控机制以及能量转化特征的最新进展,并对进一步的研究方向做了展望。 展开更多
关键词 古菌 糖酵解 entner-doudoroff(ED)途径 极端酶 ATP
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Glycolytic Shunts Replenish the Calvin-Benson-Bassham Cycle as Anaplerotic Reactions in Cyanobacteria
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作者 Alexander Makowka Lars Nichelmann +4 位作者 Dennis Schulze Katharina Spengler Christoph Wittmann Karl Forchhammer Kirstin Gutekunst 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2020年第3期471-482,共12页
The recent discovery of the Entner-Doudoroff(ED)pathway as a third glycolytic route beside Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)and oxidative pentose phosphate(OPP)pathway in oxygenic photoautotrophs requires a revision of thei... The recent discovery of the Entner-Doudoroff(ED)pathway as a third glycolytic route beside Embden-Meyerhof-Parnas(EMP)and oxidative pentose phosphate(OPP)pathway in oxygenic photoautotrophs requires a revision of their central carbohydrate metabolism.In this study,unexpectedly,we observed that deletion of the ED pathway alone,and even more pronounced in combination with other glycolytic routes,diminished photoautotrophic growth in continuous light in the cyanobacterium Synechocystis sp.PCC 6803.Furthermore,we found that the ED pathway is required for optimal glycogen catabolism in parallel to an operating Calvin-Benson-Bassham(CBB)cycle.It is counter-intuitive that glycolytic routes,which are a reverse to the CBB cycle and do not provide any additional biosynthetic intermediates,are important under photoautotrophic conditions.However,observations on the ability to reactivate an arrested CBB cycle revealed that they form glycolytic shunts that tap the cellular carbohydrate reservoir to replenish the cycle.Taken together,our results suggest that the classical view of the CBB cycle as an autocatalytic,completely autonomous cycle that exclusively relies on its own enzymes and C02 fixation to regenerate ribulose-1,5-bisphosphate for Rubisco is an oversimplification.We propose that in common with other known autocatalytic cycles,the CBB cycle likewise relies on anaplerotic reactions to compensate for the depletion of intermediates,particularly in transition states and under fluctuating light conditions that are common in nature. 展开更多
关键词 central carbohydrate metabolism Calvin-Benson-Bassham cycle entner-doudoroff pathway oxidative pentose phosphate pathway Embden-Meyerhof-Parnas pathway CYANOBACTERIA
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