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Development and Validation of a Recombinant Envelop Glycoprotein Based Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay to Detect the Antibody to REV
1
作者 ZHANG Wen-juan PEI Zong-fei +2 位作者 SHI Feng NIU Xing NIU Zhong-xiang 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2010年第3期432-439,共8页
Based on the antigenic analysis of Reticuloendotheliosis virus (REV) envelop glycoprotein (env) protein, an alternative indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of REV antibody was develo... Based on the antigenic analysis of Reticuloendotheliosis virus (REV) envelop glycoprotein (env) protein, an alternative indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of REV antibody was developed using a truncated env protein of REV produced in Escherichia coli. This assay was validated by comparison with an indirect immunofluorescence assay (IFA) and a REV-based ELISA. The diagnostic sensitivity (DSN), specificity (DSP) and accuracy of the env indirect-ELISA (ienv-ELISA) were 93.7, 93.3 and 93.6% compared with IFA on 1 380 field serum samples, and 84.8, 95.2 and 91.7% compared with the REV-based ELISA on 96 field sera, respectively. Cross-reactivity assay showed that this assay was REV-specific. Repeatability test revealed that the coefficients of variation of positive sera within and between runs were less than 15%. This method is simpler to produce and perform, time-saving and suitable for large scale survey of REV antibody at low cost. 展开更多
关键词 REV env protein prokaryotic expression indirect ELISA antibody detection
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The Comparison of Genetic Variation in the Envelope Protein Between Various Immunodeficiency Viruses and Equine Infectious Anemia Virus 被引量:3
2
作者 Qing Yuan Chang Liu +3 位作者 Zhipin Liang Xueqing Chen Danhong Diao Xiaohong Kong 《Virologica Sinica》 CAS CSCD 2012年第4期241-247,共7页
The envelope protein(Env) of lentiviruses such as HIV,SIV,FIV and EIAV is larger than that of other retroviruses.The Chinese EIAV attenuated vaccine is based on Env and has helped to successfully control this virus,de... The envelope protein(Env) of lentiviruses such as HIV,SIV,FIV and EIAV is larger than that of other retroviruses.The Chinese EIAV attenuated vaccine is based on Env and has helped to successfully control this virus,demonstrating that envelope is crucial for vaccine.We compared Env variation of the four kinds of lentiviruses.Phylogenetic analysis showed that the evolutionary relationship of Env between HIV and SIV was the closest and they appeared to descend from a common ancestor,and the relationship of HIV and EIAV was the furthest.EIAV had the shortest Env length and the least number of potential N-linked glycosylation sites(PNGS) as well as glycosylation density compared to various immunodeficiency viruses.However,HIV had the longest Env length and the most PNGS.Moreover,the alignment of HIV and SIV showed that PNGS were primarily distributed within extracellular membrane protein gp120 rather than transmembrane gp41.It implies that the size difference among these viruses is associated with a lentivirus specific function and also the diversity of env.There are low levels of modification of glycosylation sites of Env and selection of optimal protective epitopes might be useful for development of an effective vaccine against HIV/AIDS. 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 包膜蛋白 免疫缺陷病毒 遗传变异 环境保护 艾滋病毒 EIAV 弱毒疫苗
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禽网状内皮组织增生症病毒env蛋白的表达及其在ELISA方法中的应用 被引量:6
3
作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1521-1525,共5页
以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具... 以pb101质粒为模板,PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX-4T-3-env后,转化入宿主菌BL21,IPTG诱导表达env蛋白,对表达的蛋白进行SDS-PAGE及Western blot分析。结果表明,表达的重组蛋白具有良好的反应原性,相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA方法(Ienv-ELISA)。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,与IFA及iREV-ELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 REV env蛋白 原核表达 间接ELISA
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重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫 被引量:2
4
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期410-414,共5页
目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE... 目的 :构建新型的马传染性贫血病毒 (EIAV)的候选疫苗。方法 :利用BAC To BAC杆状病毒表达系统 ,将中国马传贫驴白细胞弱毒疫苗 (EIAVDLV)及其亲本株 (EIAVLN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后 ,得到的重组病毒用SDS PAGE和Westernblot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒 ,单独或与重组杆状病毒表达的EIAVEnv蛋白联合免疫小鼠。结果 :构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比 ,联合免疫组免疫应答显著增强 ,其中中和抗体的滴度提高5~ 9倍。结论 :含有EIAVenv基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫 ,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫应答
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HIV-2 env基因在大肠杆菌和重组痘苗病毒中的表达 被引量:1
5
作者 王秀清 金宁一 +5 位作者 田梅 郭志儒 方厚华 顾万钧 李萍 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期216-220,共5页
将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒(HIV-2)envgp120(E1)和gp36(E2)分别克隆到原核高效表达载体pET17b、pBV220和真核表达载体p10、p16中,构建成8个重组质粒。经SDS-PAGE和Wester... 将编码人Ⅱ型免疫缺陷病毒(HIV-2)envgp120(E1)和gp36(E2)分别克隆到原核高效表达载体pET17b、pBV220和真核表达载体p10、p16中,构建成8个重组质粒。经SDS-PAGE和Westernblot分析证明,在原核表达系统成功地表达了HIV-2env融合蛋白,表达的蛋白分子量分别为35000、70000和50000,而原核表达质粒pETE1在SDS-PAGE凝胶的35000处可见明显的额外蛋白带。经薄层扫描测定,原核系统表达的Env蛋白(gp120)相对含量为5.8%。在真核细胞中表达的Env蛋白经Westernblot检测分析,分子量分别为60000、57000和42000。上述表达的Env蛋白均能与HIV-2阳性血清发生特异性反应。 展开更多
关键词 HIV-2 env蛋白 表达 大肠杆菌 痘苗病毒
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REV重组env蛋白间接ELISA诊断试剂盒的研制 被引量:4
6
作者 李彦 牛星 +1 位作者 王青娟 牛钟相 《中国兽药杂志》 2011年第3期26-30,共5页
以纯化的env蛋白为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA(ienv-ELISA)方法。ienv-ELISA工作条件优化结果表明,最佳包被液为CB;最佳封闭液浓度为1%BSA-PBS;最佳抗原包被量为8μg/mL;血清最佳稀释度为1∶300;血清最佳作用时间为1 h;二... 以纯化的env蛋白为包被抗原,建立了检测REV抗体的间接ELISA(ienv-ELISA)方法。ienv-ELISA工作条件优化结果表明,最佳包被液为CB;最佳封闭液浓度为1%BSA-PBS;最佳抗原包被量为8μg/mL;血清最佳稀释度为1∶300;血清最佳作用时间为1 h;二抗的最佳稀释度为1∶5000;二抗最佳作用时间为1 h;底物最佳显色时间为25 min。重复性试验、特异性试验和对比试验结果显示,建立的ienv-ELISA方法有良好的可重复性,标准差均小于15%;与鸡MDV、ALV、NDV、H5N1、H9N1等病毒阳性抗体均无交叉反应;与REV抗体检测试剂盒(以REV全病毒为包被抗原)对比,所建立的ienv-ELISA诊断敏感性、诊断特异性以及准确率分别为90.625%9、3.75%和92.7%。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒 env蛋白 间接ELISA 试剂盒 抗体检测
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表达猴免疫缺陷病毒Env蛋白的重组鸡痘病毒的构建和筛选 被引量:1
7
作者 朱羿龙 李昌 +9 位作者 刘存霞 杜寿文 王茂鹏 叶飞 谭鹏 邢彬 刘继 朱光泽 郭焱 金宁一 《生物技术通讯》 CAS 2014年第3期323-327,共5页
目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定。方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pT... 目的:构建并筛选表达猴免疫缺陷病毒(SIV)Env蛋白的重组鸡痘病毒(FPV),并对其进行鉴定。方法:设计引物,通过PCR技术扩增SIV env基因,将其连接到pMD18-T载体上,测序正确后将其克隆入本实验室自行构建的FPV穿梭载体pTKET中,获得重组质粒pTKET-SIV env,然后将其与FPV282E4株共转染原代鸡胚成纤维细胞进行同源重组,以增强型绿色荧光蛋白为筛选标记,通过噬斑筛选获得重组病毒,应用PCR、RT-PCR、Western印迹对重组病毒进行鉴定和遗传稳定性分析。结果:通过10次噬斑筛选,PCR检测表明目的基因已整合到重组FPV基因组中,RT-PCR、Western印迹结果表明SIV Env蛋白在感染细胞内表达且具有抗原性;连续传代20次,PCR、RT-PCR、Western印迹均能检测到外源基因的整合、转录和表达,且未能扩增出FPV-TK基因,表明重组病毒遗传稳定性良好,且病毒已经纯化。结论:获得表达SIV Env蛋白的重组FPV,为进一步免疫试验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 env蛋白 猴免疫缺陷病毒 遗传稳定性
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Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1)中国流行株B亚型Gag和Env蛋白在大肠杆菌中的表达
8
作者 张锦霞 金宁一 +4 位作者 方厚华 罗坤 郭焱 邵一鸣 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期240-242,共3页
将中国流行株 型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAG... 将中国流行株 型人免疫缺陷病毒 ( HIV-1 ) B亚型 gag基因和 env基因定向插入原核表达载体p ET2 8a和 p ET2 8c,获得重组表达质粒 p ETG、p ETM1、p ETM2和 p ETM3。将 p ETG转化表达宿主菌 BL2 1( DE3 ) plys S,用 IPTG诱导 ,SDS-PAGE电泳分析有重组蛋白表达。该蛋白表达量随诱导时间的延长而逐渐增加 ,4 h达到最大值。凝胶扫描结果显示 ,该蛋白表达量占菌体总蛋白的 1 0 .3 %。Western blotting检测 ,该重组蛋白可与中国流行株 HIV-1 B亚型阳性血清发生特异反应。重组表达质粒 p ETM1、p ETM2和 p ETM3仅在蛋白印迹中与 gp1 2 0单抗发生特异性反应而出现特异显色带 ,SDS-PAGE电泳分析未见表达蛋白带。 展开更多
关键词 I型人免疫缺陷病毒 表达 核心蛋白 膜相关蛋白 中国流行株
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EIAV env基因在痘苗病毒中的表达及其免疫效果的观察
9
作者 代春铭 张晓燕 +1 位作者 邵一鸣 沈荣显 《中国病毒学》 CSCD 2003年第5期473-477,共5页
将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表... 将马传贫驴白细胞弱毒疫苗及其亲本株env基因克隆到痘苗病毒表达载体pSC65的pE/L启动子下游,通过同源重组插入到痘苗病毒天坛株基因组TK区,经蓝白斑筛选获得重组痘苗病毒rvv-DLVenv和rvv-LNenv,Western blot检测目的蛋白的表达,结果表明重组痘苗病毒能够有效表达完整的EIAV Env蛋白,其肌肉接种免疫小鼠后,表达的目的蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导机体产生有效的体液和细胞免疫应答,其中以细胞免疫效果更为显著,CTL特异性裂解最高可达28%。本研究为EIAV基因工程疫苗的开发研制奠定了基础。 展开更多
关键词 重组痘苗病毒 免疫应答 马传染性贫血病病毒 EIAVenv蛋白基因 痘苗病毒 表达
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重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白与含有env基因重组痘苗病毒的联合免疫
10
作者 代春铭 张晓燕 +2 位作者 张然然 邵一鸣 沈荣显 《畜牧市场》 2009年第2期12-16,共5页
目的:构建新型的马传染性贫血病毒(EIAV)的候选疫苗。方法:利用BAC-To-BAC杆状病毒表达系统,将中国马传贫驴白细胞弱毒疲苗(EIAV DLV)及其亲本株(EIAV LN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后,得到的重组病毒用SDS-PAGE和Wes... 目的:构建新型的马传染性贫血病毒(EIAV)的候选疫苗。方法:利用BAC-To-BAC杆状病毒表达系统,将中国马传贫驴白细胞弱毒疲苗(EIAV DLV)及其亲本株(EIAV LN)env基因导入到杆状病毒基因组中。转染昆虫细胞后,得到的重组病毒用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以本实验室构建的含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒,单独或与重组杆状病毒表达的EIAV Env蛋白联合免疫小鼠。结果:构建的重组杆状病毒能正确表达全长Env蛋白。与单独免疫组相比,联合免疫组免疫应答显著增强,其中中和抗体的滴度提高5~9倍。结论:含有EIAV Env基因的重组痘苗病毒与Env蛋白抗原联合免疫,能够诱导高滴度的中和抗体。 展开更多
关键词 EIAV env蛋白 重组杆状病毒 重组痘苗病毒 免疫
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禽网状内皮组织增生症病毒env基因的原核表达及检测 被引量:1
11
作者 牛星 韦平 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第S1期296-300,306,共6页
根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)SNV株的前病毒基因组cDNA序列,设计并合成1对引物,以SNV株前病毒cDNA全基因组克隆为模板,通过PCR技术扩增出该病毒囊膜糖蛋白env基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6P-1载体中... 根据禽网状内皮组织增生症病毒(REV)SNV株的前病毒基因组cDNA序列,设计并合成1对引物,以SNV株前病毒cDNA全基因组克隆为模板,通过PCR技术扩增出该病毒囊膜糖蛋白env基因部分片段。将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进pGEX-6P-1载体中谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的下游,将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在1.0mmol/LIPTG(37℃)诱导下,env基因部分片段以融合蛋白的形式获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,确定其表达的融合蛋白相对分子质量为72kD,并经Western-blot检测,发现在72kd目标条带处呈现一棕红色印迹。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生症病毒 env基因 融合蛋白 表达 间接荧光
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人泡沫病毒GAG、ENV蛋白的原核表达、抗血清制备及鉴定
12
作者 卢飞 孙燕 +1 位作者 李晶 李治 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期71-75,共5页
构建了HFV的GAG和ENV蛋白原核表达载体pET-32a-gag和pET-32a-env,转化E.coli BL21Star(DE3)后用IPTG诱导出高水平的GAG、ENV融合蛋白表达.以融合蛋白免疫新西兰兔制备了GAG和ENV抗血清.Western Blot检测表明,抗血清可以识别原核表达的GA... 构建了HFV的GAG和ENV蛋白原核表达载体pET-32a-gag和pET-32a-env,转化E.coli BL21Star(DE3)后用IPTG诱导出高水平的GAG、ENV融合蛋白表达.以融合蛋白免疫新西兰兔制备了GAG和ENV抗血清.Western Blot检测表明,抗血清可以识别原核表达的GAG和ENV蛋白,说明抗血清具有较好的特异性.结合Western Blot和间接免疫荧光实验,表明抗血清可以检测到病毒表达的GAG和ENV蛋白. 展开更多
关键词 人泡沫病毒 GAG蛋白 env蛋白 原核表达 抗血清
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猪内源性反转录病毒囊膜蛋白基因的克隆及其蛋白二级结构和B细胞表位预测 被引量:5
13
作者 吴健敏 孙建华 +6 位作者 吕茂民 陈忠伟 阳玉彪 赵武 陈凤莲 黄红梅 章金刚 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期412-416,共5页
猪内源性反转录病毒(PERV)是与猪-人异种移植病原安全性密切相关的一类病毒。env基因编码病毒的囊膜蛋白,它与病毒的亚型分类、宿主感染范围、细胞的嗜性以及对宿主细胞的感染机制、诱导宿主产生中和抗体等密切相关。本研究利用RT-PCR... 猪内源性反转录病毒(PERV)是与猪-人异种移植病原安全性密切相关的一类病毒。env基因编码病毒的囊膜蛋白,它与病毒的亚型分类、宿主感染范围、细胞的嗜性以及对宿主细胞的感染机制、诱导宿主产生中和抗体等密切相关。本研究利用RT-PCR的方法,从五指山小型猪外周血淋巴细胞中扩增PERV的囊膜蛋白基因并进行测序,随后用生物信息学相关软件和方法,对PERV-Env蛋白二级结构及B细胞表位进行预测。经综合分析评价,结果发现PERV-Env蛋白有18个可能的B细胞优势抗原表位区域,7个可能的糖基化位点。该分析预测结果不但有利于PERV疫苗的设计、单抗及诊断试剂研制,而且将有助于分析Env蛋白的功能及PERV对人源细胞的感染机制。 展开更多
关键词 PERV env蛋白 B细胞表位 二级结构 预测
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肝细胞靶向性系统表达载体的构建 被引量:3
14
作者 王传玺 韩金祥 +2 位作者 鲁艳芹 高雪芹 张翠 《生物技术通讯》 CAS 2004年第5期429-432,共4页
在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM-T载体上,经测序正确后,将一目的基因亚克隆在pcDNA3.1(-)表... 在肝脏疾病的基因治疗过程中,为把目的基因定向导入靶细胞,构建了具有靶向性的逆转录病毒的包装细胞,即应用RT-PCR方法分别反转录并扩增env、pres2基因,将它们分别克隆至pGEM-T载体上,经测序正确后,将一目的基因亚克隆在pcDNA3.1(-)表达载体上,然后将另一目的片段从T载体上切下,克隆至经同样酶切的重组表达载体中。从而成功地构建了肝细胞靶向性系统的表达载体pcDNA3.1(-)-env-pres2和pcDNA3.1(-)-pres2-env。 展开更多
关键词 靶向性 肝细胞 PCDNA3 表达载体 pres2基因 包装细胞 逆转录病毒 T载体 目的基因 克隆
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绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究 被引量:9
15
作者 张宇飞 刘月 +2 位作者 王专家 孙晓林 刘淑英 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期268-277,共10页
为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤... 为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env。exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有外源性病毒特有的YXXM基序。系统进化树也表明我们克隆的exJSRV-env基因属于致病性的外源性病毒。运用生物信息学技术分析env基因编码的蛋白质的基本性质,并预测其可能的结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。说明绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白可引起NIH3T3细胞发生恶性转化。研究结果为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。 展开更多
关键词 外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因 囊膜蛋白 亚细胞定位 细胞转化
原文传递
外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白生物信息学分析
16
作者 赵庆亮 卢梅 +3 位作者 王永树 谭艳 冉光鑫 盛金良 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第7期792-796,共5页
目的采用生物信息学方法分析外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白的结构和功能。方法利用NCBI数据库查询外源性对绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白基因序列,采用在线软件ProtParam、Prot Scale、DNASTAR、SOPMA、SWISS MODEL、SOSUI... 目的采用生物信息学方法分析外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白的结构和功能。方法利用NCBI数据库查询外源性对绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白基因序列,采用在线软件ProtParam、Prot Scale、DNASTAR、SOPMA、SWISS MODEL、SOSUI、TMHMM2.0、Signal 4.1、Bepipred Linear Epitope Prediction、PROSITE SCAN、PSOTR分析预测env蛋白的理化性质、亲疏水性、二级结构、三级结构、跨膜区、信号肽、B细胞表位、结构域、亚细胞定位。结果 env蛋白由615个氨基酸组成,分子式为C_(3144)H_(4924)N_(840)O_(879)S_(29),相对分子质量为69.5×10^(3),理论等电点为8.48,不稳定系数为37.04(为稳定蛋白),脂肪系数平均为99.56,总平均亲水性为-0.048。二级结构以α-螺旋为主,占42.76%,无规卷曲占38.7%,延伸链占16.59%,β-转角占1.59%。三级结构env蛋白序列与同源模板的序列在408~540区域存在21%的同源性,只能进行部分同源建模。env蛋白存在2个跨膜区,无信号肽。env蛋白包含有20个线性表位,其中356-442、490-555、104-131、206-230、448-469区段是env蛋白的优势抗原表位区段。env蛋白包含9个N-糖基化位点,4个蛋白激酶C磷酸化作用位点,4个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点,4个N-豆蔻酰基化位点,1个酰胺化位点,1个细胞附着序列位点。亚细胞定位分析预测env蛋白为细胞膜蛋白,env蛋白绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白。结论外源性绵羊肺腺瘤病毒新疆株env囊膜蛋白存在多个B细胞抗原表位及1个细胞附着序列位点,可作为潜在抗原用于env蛋白绵羊肺腺瘤病毒感染疫苗的研制。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤 env蛋白 生物信息学 B细胞表位 免疫原性
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HIV-1 Gag和Env蛋白特异性ADCC反应与AIDS病程进展的关系
17
作者 冯晏萌 梁华 邵一鸣 《中国艾滋病性病》 CAS 2014年第6期386-388,共3页
目的了解艾滋病病毒I型(HIV-1)Gag和Env蛋白特异性抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)反应,与艾滋病(AIDS)疾病进展的相关性。方法采集58份未经抗病毒治疗的、感染时间1年以内的男男性行为人群(MSM)标本,利用HIV-1特异性肽库刺激和... 目的了解艾滋病病毒I型(HIV-1)Gag和Env蛋白特异性抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)反应,与艾滋病(AIDS)疾病进展的相关性。方法采集58份未经抗病毒治疗的、感染时间1年以内的男男性行为人群(MSM)标本,利用HIV-1特异性肽库刺激和流式细胞染色技术进行ADCC检测。结果病毒载量与HIV-1Gag特异性CD+2IFN-γ+细胞占CD-3细胞的比例呈显著的正相关(r=0.2919,P=0.0339);而01_AE亚型感染者的病毒载量与HIV-1Env特异性CD+2CD107a+细胞占CD-3细胞的比例呈显著负相关(r=-0.3454,P=0.0454)。结论在HIV-1感染早期,感染者体内可以产生Gag蛋白特异性的ADCC反应,其中Env蛋白特异性的ADCC反应具有控制疾病进展的作用。 展开更多
关键词 艾滋病病毒 GAG蛋白 env蛋白 病毒载量 抗体依赖的细胞毒作用
原文传递
阜新市HIV-1 env基因C2-V4区序列特征分析
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作者 李贺 杜波 +2 位作者 田晓东 刘文新 姚文清 《预防医学》 2020年第10期983-986,共4页
目的分析阜新市艾滋病病毒1型(HIV-1) env基因C2-V4区序列及代表性广谱单克隆中和抗体的表位变异,为HIV-1变异趋势研究及阐明V3环与病毒生物学特征提供依据。方法采集2018—2019年在阜新市卫生健康服务中心确证阳性的112例HIV-1感染者... 目的分析阜新市艾滋病病毒1型(HIV-1) env基因C2-V4区序列及代表性广谱单克隆中和抗体的表位变异,为HIV-1变异趋势研究及阐明V3环与病毒生物学特征提供依据。方法采集2018—2019年在阜新市卫生健康服务中心确证阳性的112例HIV-1感染者全血标本,采用巢式PCR扩增env基因C2-V4区核苷酸序列并测序,采用MEGA软件鉴定分型,采用HIV Database等软件分析V3环顶端四肽、辅助受体、净电荷和特征性氨基酸。结果获得101条有效基因序列,发现5种V3环顶端四肽类型,其中GPGQ 77条,占76.24%,存在于CRF01_AE、CRF07_BC、CRF65_cpx和G亚型;GPGR 19条,占18.81%,存在于CRF01_AE、CRF07_BC和B亚型;GPGH 3条,GPGK和GPGA各1条,均只存在于CRF01_AE亚型。辅助受体主要使用CCR5,84条占83.17%。CRF01_AE、CRF07_BC、B、CRF65_cpx和G亚型V3环净电荷数分别为3.28±1.17、3.22±0.92、4.25±0.83、2.50±0.50和3。结合b12和VRC01中和抗体表位氨基酸位点突变率为0-9.90%;295位和332位氨基酸N-糖基化位点缺失率分别为18.81%和14.85%,未发现两者同时缺失的情况。结论 2018—2019年阜新市HIV-1毒株主要是以CCR5为辅助受体的巨噬细胞嗜性非合胞体诱导型病毒,V3环顶端四肽以GPGQ为主,复制速度较慢,逃逸中和抗体能力较低。 展开更多
关键词 艾滋病病毒1型 env基因 变异 包膜蛋白 V3环
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不同HIV抗体检测试剂检测抗HIV-1膜蛋白抗体的敏感性 被引量:2
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作者 李秀华 许四宏 +1 位作者 宋爱京 王佑春 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期69-71,共3页
目的分析不同HIV抗体检测试剂检测HIV-1B’和BC重组型膜蛋白抗体的敏感性。方法选择HIV-1B’和BC重组型感染者血浆,用gp41抗原和gp160抗原分别进行亲和层析纯化。将各纯化产物进行系列稀释,用15种HIV抗体ELISA检测试剂以及3种HIV抗原/... 目的分析不同HIV抗体检测试剂检测HIV-1B’和BC重组型膜蛋白抗体的敏感性。方法选择HIV-1B’和BC重组型感染者血浆,用gp41抗原和gp160抗原分别进行亲和层析纯化。将各纯化产物进行系列稀释,用15种HIV抗体ELISA检测试剂以及3种HIV抗原/抗体联合检测试剂进行检测。结果用gp41抗原纯化后的样品只含有抗gp160和gp41的抗体带型,而用gp160抗原纯化后的样品含有抗gp160、gp120和gp41的抗体带型。进口试剂检测不同基因型样品的敏感性低于大部分国产试剂,国产试剂检测不同基因型的样品的敏感性无明显差异,而进口试剂检测B’亚型抗体的能力低于检测BC重组型抗体的能力。结论不同基因型的抗体对HIV抗体检测试剂的敏感性可能有一定的影响。 展开更多
关键词 HIV 膜蛋白抗体 基因型 检测试剂 敏感性
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REV囊膜糖蛋白的表达、纯化及单克隆抗体的制备和初步鉴定 被引量:1
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作者 张文娟 裴宗飞 牛钟相 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期180-182,187,共4页
以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变... 以禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的cDNA为模板,用PCR技术获得囊膜糖蛋白(env)基因的部分片段并构建了pGEX-4T-3-env表达质粒,进而在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白GST-env,SDS-PAGE证明表达的融合蛋白以包涵体的形式存在。融合蛋白经过变性、复性以及牛凝血酶酶切后得到纯化的目的蛋白env,免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体(mAb),并通过间接ELISA、间接免疫荧光和Western blotting等方法对mAb做初步鉴定。结果表明,试验成功表达了env蛋白,并获得了4株稳定分泌针对env蛋白的杂交瘤细胞(3-2A11,1-2B3,1-2D11,3D2),其分泌的mAb的Ig亚类(型)分别为IgG2b,IgG2b,IgG2b,IgG1。ELISA检测,对应腹水的效价分别为1∶105,1∶2.1×105,1∶2.2×105,1∶105。Western blotting结果显示4株抗env的mAb均能特异性识别env蛋白,间接免疫荧光分析则表明只有3-2A11和3D2这2株mAb能与REV全病毒特异性反应。 展开更多
关键词 REV 囊膜糖蛋白 单克隆抗体
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