人α-干扰素基因在转基因草鱼中的表达

为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .从 6 72尾转基因草鱼中检测出 15 8尾有 α-干扰素的表达 ,阳性率为 2 3.5 1% ,其中表达水平最高个体血浆中α-干扰素质量浓度为 145 0 pg/ m L .

三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。

IL-17和CRP在慢性阻塞性肺疾病中的作用及相关性

目的:探讨白细胞介素(IL)-17和C反应白蛋白(CRP)在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用。方法:取100例健康体检者(健康对照组)、100例COPD急性加重期及100例稳定期患者空腹静脉血,采用双抗体酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定血清中IL-17及CRP水平。并对全部研究对象进行肺功能检查,计算出第1秒用力呼气容积占预计值百分率(FEV1%)。结果:COPD急性加重期患者血清IL-17、CRP明显高于稳定期患者和健康对照组(P<0.05)。COPD急性加重期患者血清IL-17与FEV1%呈负相关,与血清CRP呈正相关(r分别为-0.437和0.582,均P<0.05);COPD稳定期患者血清IL-17与CRP呈正相关(r=0.481,P<0.05)。结论:IL-17可能参与COPD的发病,IL-17与CRP可作为监测COPD的病情活动的相关性指标之一。

弓形虫-IgM诊断试剂的研制

目的 对间接酶联免疫吸附法 (EL ISA)法检测人弓形虫 (TOXO) - Ig M的试剂进行优化改良。方法 以自制原材料采用间接 EL ISA法研制 TOXO- Ig M检测试剂 ,对试剂的特异性、精密性、灵敏度以及稳定性进行鉴定。结果 质量检定结果表明 ,该试剂特异性强、本底低 ,能有效消除类风湿因子等干扰因素的影响 ;灵敏度>1∶ 16 0 ;精密性好 ,变异系数 (C.V )均 <15 % ;试剂稳定 ,37℃存放 6天 ,各项指标的变化率不超过 15 %。结论 本试剂盒有较好的特异性、敏感性和稳定性 。

关节液中IL-6、IL-8及IFNγ与TMJ病变的关系

目的 探讨TMD患者关节液中IL - 6、IL - 8及IFNγ的水平与关节病变的关系。方法 在关节造影或关节冲洗时 ,抽取 5 1名TMD患者 5 6侧关节的关节液 ,依据临床和影像学检查结果 ,将患者分为①关节炎症性疾病组 :滑膜炎 /关节囊炎 (n =11侧 ) ;②结构紊乱 (ID)组 :包括各种关节盘移位 (可复性盘前移位、不可复性盘前移位、关节盘旋转移位及关节盘内、外移位 ) ,关节囊扩张及关节盘各附着松弛或撕裂 (n =2 6侧 ) ;③骨关节病组 :包括原发性和继发性骨关节病 ,盘穿孔 (n =19侧 )。健康志愿者 15名关节液设为对照组 (n =15 ) ;采用双抗体夹心酶联免疫法 (ABC -ELISA)检测所得关节液标本中的IL - 6、IL - 8及IFNγ水平。结果 关节液中IL - 6水平 ,C/S组 (12 .2 0± 7.5 2pg/mgpro .)、ID组 (12 .18± 9.2 2pg/mgpro .)及OA组 (14 .30± 11.92pg/mgpro .)均显著高于对照组 (3.80± 3.85 pg/mgpro.) (P =0 .0 2 8、P =0 .0 16、P =0 .0 0 8) ,患者三组间无差异 ;IL - 8仅在患者关节液中 (15 3.78± 174 .4 5 pg/mgpro.)有检出 ,IFNγ在患者组及对照组中均未检出。结论 IL - 6及IL - 8参与了TMD关节组织的病理破坏过程 ,IFNγ在TMD患者关节液中是否存在需进一步研究证实。

吸烟对慢性阻塞性肺病患者血清IL-1β和IL-1Ra的影响

为了了解吸烟对慢性阻塞性肺病患者血清IL-1β和IL-1Ra的影响,为吸烟介导慢性阻塞性肺病系统性炎症反应的机制提供新的证据,将38例慢性阻塞性肺病患者分为吸烟组与非吸烟组,用酶联免疫吸附试验方法检测患者血清IL-1β、IL-1Ra和IL-1β/IL-1Ra比值,并比较在两组间的差异。结果显示两组之间血清IL-1β、IL-1Ra和IL-1β/IL-1Ra比值的差异均有统计学意义(P<0.05),吸烟组血清IL-1β和IL-1β/IL-1Ra比值明显高于非吸烟组,IL-1Ra明显低于非吸烟组。提示吸烟不但明显增强COPD患者血清炎症细胞因子IL-1β的分泌,而且,还显著抑制了COPD患者分泌IL-1β的抑制因子IL-1Ra,从而进一步加重其系统性炎症反应。

血清VEGF-C、VEGFR-2、3表达水平在急性白血病疗效监测及预后判断中的应用

目的观察AL患者血清中VEGF-C及VEGFR-2、VEGFR-3表达水平,探讨其临床意义.方法采用酶联免疫吸附法对51例确诊为AL患者、接受治疗观察的43例及16例健康献血者血清中VEGF-C、VEGFR-2、3进行检测.结果 (1)AL患者VEGF-C、VEGFR-2及VEGFR-3水平,较正常对照组高,差异有统计学意义(P<0.01);(2)治疗后完全缓解(CR)组患者VEGF-C和VEGFR-2水平较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.01);治疗后未完全缓解(NR)组患者VEGF-C和VEGFR-2水平较治疗前降低,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)治疗后CR组和NR组VEGFR-3水平较治疗前无明显变化(P>0.05);(4)治疗前NR组VEGFR-2、VEGFR-3水平明显高于CR组,具有统计学意义(P<0.01).结论观察AL患者治疗前后VEGF-C及VEGFR-2、3表达水平,对预后判断、疗效评估和病情监测具有重要临床意义.

兔煤工尘肺模型各期HRCT表现与血清TNF-α、PDGF表达水平相关研究

目的 :探讨兔煤工尘肺模型在HRCT上的影像表现与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血小板源性生长因子(PDGF)表达水平的相关性。方法:复制兔煤工尘肺模型,分别于2周、1、2、3、5个月时对兔行HRCT扫描,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测兔血清TNF-α、PDGF含量。结果:煤工尘肺模型兔肺HRCT早期主要表现为磨玻璃影及小叶间隔增厚,中期主要表现为局限性肺间质纤维化及小蜂窝状影像,晚期主要表现为结节影、广泛环状影及实变影;试验组兔血清TNF-α含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),PDGF含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且随时间的延长,TNF-α、PDGF水平均逐渐降低;两变量相关性分析显示TNF-α与PDGF呈正相关(P<0.05),TNF-α、PDGF含量变化与兔煤尘肺模型HRCT表现严重程度之间呈负相关(P<0.05)。结论:煤工尘肺高分辨力CT表现与TNF-α、PDGF表达水平密切相关,TNF-α、PDGF在肺组织不可逆纤维化过程中均发挥重要作用。

用单克隆Anti-Id代替HBsAg检测抗-HBs的探讨

根据Jerne的独特型-抗独特型网络理论,本文研究用单克隆Anti-Id代替常规检测中的HBsAg,建立一种新的检测抗-HBs的方法。该法用Anti-Id作为包被抗体,HRP标记的羊抗人IgG检测被检血清中被结合的抗-HBs。实验结果表明,本法具有良好的敏感性(0.5μg/ml)和特异性,而且安全、简便,试剂来源丰富,尤其适用于检测那些抗原不易获得,不易纯化或抗原传染性强的疾病。

类风湿关节炎患者IL-17水平的变化

目的探讨稳定期和活动期类风湿关节炎(RA)患者白细胞介素-17(IL-17)水平的变化。方法应用酶联免疫吸附技术(ELSIA)检测40例健康体检者和120例稳定期和活动期RA患者的IL-17水平,同时检测白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、血沉(ESR)、类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)等实验室指标。结果IL-17,PLT,ESR,RF,CRP等指标RA患者组均高于健康对照组(P<0.05)。RA患者活动期PLT,ESR,RF,CRP,IL-17水平均显著高于稳定期(P<0.05)。结论IL-17与RA免疫炎症有关,其水平高低可反映病情活动变化。

海南地区Zeta链蛋白检测在东南亚型α-地中海贫血筛查中的应用价值

目的以α-地中海贫血基因检测结果为标准,探讨Zeta链蛋白检测在α-地中海贫血东南亚缺失型临床筛查中的应用价值。方法随机收集634例EDTA-K2抗凝全血标本,采用酶联免疫法检测人外周血细胞中Zeta链蛋白,同时提取全血DNA,采用多重PCR结合电泳法检测标本α-地中海贫血基因。结果634例全血标本经酶联免疫法检测Zeta链蛋白阳性113例,阴性521例;Zeta链蛋白阳性标本中经基因检测全部确诊为α-地中海贫血东南亚缺失型,阴性中无α-地中海贫血东南亚缺失型。Zeta链蛋白检测α-地中海贫血东南亚缺失型灵敏度为100%,特异度为100%,假阳性率0%,假阴性率0%,阳性试验的预示值100%,阴性试验的预示值100%。结论酶联免疫法检测Zeta链蛋白是一种简便、快速检测α-地中海贫血东南亚缺失型的方法,可用于临床大规模筛查。

TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对上气道咳嗽综合征的诊断价值

目的:探讨瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)及免疫组化方法检测对儿科上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)的诊断价值。方法:94例UACS患儿作为试验组,另选择同一时期的92例腺体样肥大,但无UACS的患儿作为对照组。采集两组患儿血清进行TRPV1及TGF-β2的ELISA测定,采集患儿腺样体组织进行TRPV1及TGF-β2的免疫组化检测,对检测结果进行对照分析。结果:UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.001);UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.018,0.001);TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著干预ELASA,差异具有统计学意义(均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测,差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:TRPV1及TGF-β2的升高与UACS的发病可能有关,TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测对UACS诊断的敏感性较高,而TRPV1和TGF-β2的ELASA检测对UACS诊断的特异性较高,联合应用ELISA及免疫组化检测UACS可疑病例,有助于提高UACS患者诊断的准确性,降低漏诊、误诊率。

甲状旁腺激素对大鼠血清中转化生长因子-β_1的影响

目的:研究去势及甲状旁腺激素间歇注射对大鼠转化生长因子-β1(TGF-13,)表达的影响。方法:3月龄雌性SD大鼠行卵巢切除术(OVX)或假手术(Sham),手术组于2周后分别皮下注射甲状腺激素1-34片段(FFH1-34)或溶剂,10天后处死;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中TGF-β1含量。结果:雌性大鼠卵巢切除2周后血清中TGF-β1含量明显升高(P<0.05),甲状旁腺激素注射组与去势对照组无明显差异。结论:甲状旁腺激素短期注射并不影响血清中TGF-β1含量。

IL-17在幽门螺杆菌不同亚型菌株感染AGS细胞中的表达

目的探讨人白介素-17(IL-17)在幽门螺杆菌(HP)不同亚型菌株感染AGS细胞中的表达情况,并探讨可能的作用机制。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)法检测IL-17的表达,并分析其与HP不同亚型间的关系。结果 HP I型与II型分别感染AGS细胞24 h、48 h后较空白对照组差异具有统计学意义(P<0.05),HP I型与II型感染AGS细胞24 h后比较差异具有统计学意义(P<0.05),HP I型与II型感染AGS细胞48 h后比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HP不同亚型均可诱导IL-17的表达,且HP I型更易诱导IL-17的表达。

两种方法测量抗菌肽s-thanatin大鼠体内血药浓度的结果比较

目的:分别用间接竞争ELISA法和放射性同位素标记法测定不同时间点抗菌肽s-thanatin(Ts)在动物体内的血药浓度变化,比较两种方法测量结果的差异并分析原因。方法:制备Ts的多克隆抗体,分离纯化多克隆抗体并建立间接竞争ELISA方法的标准曲线。用125I对Ts进行标记,制作同位素标记法的标准曲线。18只SD大鼠随机分为3组,分别按20、10和5 mg.kg-1的剂量尾静脉注射给药(放射性同位素标记法中注射Ts为125I-Ts),于给药后不同时间点眼眶取血,分别用两种方法测定动物体内血药浓度,计算药物半衰期。最后,比较两种方法测量结果的差异,并对其进行分析。结果:间接竞争ELISA法测得Ts在动物体内的半衰期为1.5 h左右,而用放射性同位素标记法测得的半衰期为6 h左右。放射性同位素法测得的生物利用度大约为间接竞争ELISA法的20倍。结论:同位素示踪法测得的药物浓度为动物体内药物代谢物的总量,因此需要借助其它分析仪器才能进行准确的定量试验。

人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶的ELISA及用于肝癌的诊断

从人体胎盘提纯GST-π,制备兔抗GST-π血清,纯化其IgG,并降解成Fab’片断,通过SMCC与HRP交联成Fab’-HRP,用于夹心ELISA以测定GST-π,灵敏度可达11pg,超过国外的放射免疫法。用此法测定正常人血清GST-π为1.06±0.94ng/ml,原发性肝癌血清较正常高20倍以上。阳性率达90％左右。

肺癌患者血清VEGF-D、VEGFR-2水平及临床意义

目的探讨血管内皮生长因子D(VEGF-D)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)在肺癌患者血清中的水平及其临床意义。方法血清中VEGF-D和VEGFR-2浓度的测定均采用ELISA法。结果①小细胞肺癌组、非小细胞肺癌组及健康对照组血清VEGF-D及VEGFR-2浓度差异有统计学意义,由秩和检验得出P<0.05。②肺癌患者按照肿瘤分化程度、临床分期、TNM分期及胸膜侵犯分组后血清中VEGF-D及VEGFR-2浓度比较差异有统计学意义,P<0.05。结论检测血清VEGF-D及VEGFR-2水平对研究肺癌的早期诊断、临床分期、预后判断有一定的参考价值。

TP-ELISA法检测心脏病患者易产生假阳性的原因分析

目的探讨应用梅毒酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)检测心脏病患者易产生假阳性结果的原因。方法采用TP-ELISA法分别检测本院1350例心脏病患者和2780例非心脏病患者的血清,结果阳性者再用TPPA法进行确诊,并对两组患者的梅毒特异性抗体假阳性率进行对比分析。结果 TP-ELISA法检测心脏病患者假阳性率明显高于非心脏病患者组,两组差异有统计学意义(P<0.01)。结论脂质异常和年龄因素是造成TP-ELISA法检测梅毒抗体易发生假阳性的原因。

炎症标志物白细胞介素-13在多囊卵巢综合征患者外周血的表达水平及临床意义

目的:观察白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者外周血中的表达水平,并分析其与患者体质指数(body mass index,BMI)、生殖相关激素、血糖及血脂的相关性。方法:临床对照试验。研究对象分为3组:PCOS肥胖组(40例)、PCOS非肥胖组(35例)和对照组(39例)。测量各组研究对象的体质量、身高、腰围及臀围,并计算BMI及腰臀比(waist/hip ratio,WHR)。分别用酶联免疫吸附试验测定血清IL-13水平;应用化学发光法检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、空腹胰岛素(fasting insulin,Ins)、胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglycerides,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)水平;放射免疫测定:卵泡刺激素(follicle-stimu-lating hormone,FSH)、黄体生成素(luteum erythropoietin,LH)、雌二醇(estradiol,E2)、孕酮(progesterone,P)、催乳素(prolactin,PRL)、睾酮(testosterone,T)。结果:PCOS肥胖组外周血IL-13的表达高于非肥胖组(P=0.000),且二者均高于对照组(P=0.000;P=0.019)。Ins、LDL、HDL、TG、TC、IR、E2、FSH、P等指标的血清水平无统计学差异;而WHR、BMI、FBG、LH、T等指标血清值在PCOS肥胖组、非肥胖组均高于对照组。简单相关回归分析显示IL-13与BMI(R=0.527,P=0.000)、FBG(R=0.449,P=0.000)及T(R=0.452,P=0.000)、WHR(R=0.272,P=0.021)及LH(R=0.247,P=0.037)有相关性,多元线性回归方程表示为IL-13=90.814+1.255BMI+0.755WHR+1.696FBG+0.146LH+0.738T。结论:炎症标志物IL-13在PCOS患者外周血中表达明显升高,并与BMI、WHR、FBG、LH及T等指标存在线性依存关系。

大肠癌患者血清可溶性P-选择素和细胞间黏附分子-1的表达及意义

目的探讨大肠癌患者手术前后血清可溶性P-选择素(sP-selectin)、细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的表达及临床意义。方法采用ELISA检测30例大肠癌患者术前、术后15日、术后30日及20例对照组血清sP-selectin、sICAM-1的表达水平。结果①大肠癌患者血清sP-selectin、sICAM-1的表达水平均显著高于对照组,P<0.05;术后15日下降,仍高于对照组水平,P<0.05;术后30日降至对照组水平,P>0.05;②大肠癌患者血清sP-selectin、sICAM-1的表达水平与淋巴结转移和临床分期相关,P<0.05,与年龄、性别、肿瘤大小及组织学分级无明显相关,P>0.05。结论sP-selectin、sICAM-1参与了大肠癌侵袭转移过程,是反映大肠癌的发生、发展及预后的一个重要指标。