核糖核酸酶A家族成员2基因与胶质瘤免疫浸润水平及临床预后的关系分析

目的通过生物信息学分析核糖核酸酶A家族成员2(RNASE2)基因与胶质瘤免疫浸润水平及临床预后的关系。方法通过生物信息分析获取癌症基因组图谱(TCGA)及中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中RNASE2基因在胶质瘤中的表达情况,并分析RNASE2基因与胶质瘤预后、免疫浸润的关系及相应的信号通路。结果RNASE2基因在胶质瘤中的表达水平高于癌旁组织(P﹤0.05)。RNASE2基因表达水平在世界卫生组织(WHO)Ⅱ级、WHOⅢ级、WHOⅣ级胶质瘤中依次递增,且在复发胶质瘤中的表达水平明显高于原位胶质瘤,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。RNASE2低表达的胶质瘤患者生存情况明显优于RNASE2高表达患者,差异有统计学意义(P﹤0.01)。RNASE2 mRNA表达水平与CD8+T细胞呈负相关,与调节性T细胞呈正相关(P﹤0.05)。富集分析显示,RNASE2与免疫、炎症调控的信号通路相关。结论RNASE2基因在胶质瘤中表达上调,影响胶质瘤免疫浸润水平,导致免疫微环境失衡,进而造成不良预后。表明RNASE2的转录水平可作为预测胶质瘤预后和免疫浸润的生物标志物。

嗜酸性粒细胞相关核糖核酸酶A家族成员2参与狼疮小鼠肾脏损害的机制研究

目的通过嗜酸性粒细胞相关核糖核酸酶A家族成员2(Ear2)髓系细胞条件性敲除小鼠探讨其在狼疮发病中的作用及参与肾脏损害的可能机制。方法利用规律间隔成簇短回文重复序列关联基因9(CRISP/Cas9)技术构建Ear2髓系细胞条件性敲除小鼠模型,应用PCR鉴定小鼠基因型。实验分为3组:CKO+R848组,对照+R848组,对照组。R848处理敲除鼠和同型对照鼠,评估小鼠狼疮样病变发生情况。荧光实时定量PCR法检测小鼠肾脏中Toll样受体(TLR)7/8和炎症因子的表达。流式细胞术检测狼疮小鼠肾脏中巡逻单核细胞(PMOs)的比例,免疫荧光法分析Ear2和PMOs在肾组织中的空间分布。R848体外刺激条件性敲除(CKO)和对照小鼠的骨髓细胞,流式细胞术检测PMOs比例变化。采用单因素方差分析对3组进行比较。结果髓系细胞条件敲除Ear2小鼠构建后PCR显示基因型为Lyz2^(ki/wt)Ear2^(fl/fl),敲除鼠骨髓细胞中Ear2 mRNA水平显著下调[(1.03±0.26)与(0.22±0.15),t=6.65,P<0.001]。与对照+R848组相比,CKO+R848组小鼠狼疮表型得到改善,生存率有上升趋势(6/10与7/8,χ^(2)=1.51,P=0.220),病理结果提示CKO+R848组小鼠肾脏病变减轻。CKO+R848小鼠肾脏组织中TLR7表达水平降低[(1.02±0.09)与(0.53±0.04),t=5.13,P=0.003],同时PMOs浸润减少[(62.00±3.38)%与(52.36±0.68)%,t=2.80,P=0.023],免疫荧光结果显示Ear2和PMOs在肾组织共定位。体外R848刺激引起对照组PMOs比例的增多[(3.99±0.59)%与(33.48±1.38)%,t=-33.84,P<0.001],敲除Ear2可以抑制TLR7引起的PMOs的增多[(14.33±1.72)%与(16.10±1.44)%,t=-1.37,P=0.220]。结论Ear2条件性敲除可减轻狼疮小鼠发病,尤其是肾脏损害。其机制与抑制TLR7通路激活、减少PMOs局部浸润有关。