单核细胞和内皮细胞上的Eph家族在动脉粥样硬化中的研究进展

动脉粥样硬化是一种全身性炎症性疾病,其中单核细胞与内皮细胞的粘附和单核细胞迁移到内皮下层是形成动脉粥样硬化斑块的关键事件。Eph家族参与了与动脉粥样硬化相关的过程,包括单核细胞的趋化、粘附、迁移以及动脉粥样硬化炎症的调节等。Eph家族在单核细胞与内皮细胞之间构建了复杂的网络。本文将对这些关键事件进行综合概括,为未来的研究方向和寻找针对动脉粥样硬化的新治疗靶点提供新的见解。

Eph家族蛋白研究进展

Eph家族蛋白包括Eph受体和Ephrin配体,是蛋白酪氨酸激酶家族中的最大成员。由于其具有独特的受体-配体复合物的结构特点及其受体与配体间特有的相互作用模式,所以它们极有可能成为疾病治疗的药物靶标,故该蛋白家族的相关领域研究日益受到重视。该文首先从Eph家族蛋白的分类、表达特点、结构和受体-配体相互作用特点以及其在神经系统中的功能等几个方面简要综述了其相关领域的最新研究进展,进而从结构、作用模式、功能几方面对Eph家族蛋白在神经系统疾患防治中的潜在价值和未来的研究方向进行了探讨和展望。

Eph家族蛋白的神经生物学功能研究进展

Eph家族蛋白在发育胚胎和成年个体的神经系统中均发挥着极其重要的生物学功能。在发育个体中,Eph家族蛋白在神经元网络形成、轴突路径导引、皮质细胞迁移、嗅觉和听觉等诸多个体发育过程中均起着关键作用。而在成年个体中,Eph家族蛋白的正向和反向信号途径能够调节不同类型的神经突触可塑性并且干扰部分Eph家族蛋白,能够影响到模型动物的学习与记忆能力,因而Eph家族蛋白参与了学习与记忆过程。Eph家族蛋白能在某些细胞株上调节Tau蛋白的磷酸化,并且还以趋化因子的形式在成体中继续发挥着重要的功能,它们的异常可能参与了多种脑疾病的机制。而磷酸化Tau等蛋白沉积与部分中枢神经系统退行性病变(如阿尔茨海默病)发生密切相关,其最严重后果之一就是患者认知功能障碍。这提示,Eph家族蛋白可能通过参与学习与记忆功能、影响Tau蛋白沉积并可能以趋化因子的形式等机制参与中枢神经系统退行性病变,因而对该类疾病防治研究可能具有潜在价值。

Eph受体家族在肺癌中的研究进展及作为肺癌治疗靶点的可能

为评估Eph受体家族在肺癌中作用机制,及其作为肺癌治疗靶点的可能,该文结合各学者的研究成果,及本身的临床经验,阐述了肺癌的症状及其危害,并分析了Eph受体家族的表达特征。基于此,重点从血管生成、细胞生长,以及肿瘤迁移3个方面,探讨了Eph受体家族对肺癌的影响,并对Eph受体家族作为疾病治疗靶点的可能性进行了分析,仅供相关人员参考。

基于EphrinBs/EphBs通路探讨桃红四物汤治疗带状疱疹后遗神经痛大鼠模型的作用机制

目的观察桃红四物汤对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠模型的影响,探讨EphrinBs/EphBs通路在其中的作用机制。方法60只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组(采用水痘-带状疱疹病毒慢性感染法构建PHN模型)、阳性组[建模后以普瑞巴林27 mg/(kg·d)灌胃]、治疗组[建模后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃],治疗+EphB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃]和治疗+EphrinB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphrinB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃]。采用行为学法分别在给药后1 d、7 d和14 d时检测大鼠的机械痛阈值,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测脊髓神经细胞凋亡,荧光法检测脊髓组织的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EphrinBs/EphBs通路相关蛋白EphrinB2和EphB2的表达。结果与空白组比较,建模后大鼠机械痛阈值明显降低,而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,给予桃红四物汤治疗的大鼠在给药后7 d和14 d时机械痛阈值均明显升高(P<0.05),而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。给予EphBs阻滞剂EphB2-Fc后大鼠脊髓组织中EphB2蛋白表达水平明显低于治疗组(P<0.05)。以EphBs激动剂EphrinB2-Fc作用后大鼠脊髓组织中EphrinB2蛋白表达水平明显低于治疗组,而EphB2蛋白表达水平明显高于治疗组(P<0.05)。结论桃红四物汤可能通过抑制EphrinBs/EphBs通路减少炎性因子的释放和脊髓神经细胞凋亡,对PHN大鼠发挥镇痛作用。

EphA2和EphrinA1、EphrinB1在喉癌组织中的表达及其意义

目的从蛋白水平探讨促红细胞生成素产生肝细胞(erythropozetin-prohucing hepatocyte,Eph)受体中EphA2和EphrinA1、EphrinB1与喉癌发生发展的关系,试从分子生物学角度探讨喉癌的发病机制。方法应用流式细胞术检测喉癌组织、癌旁组织及正常喉黏膜组织的EphA2和EphrinA1、EphrinB1蛋白表达的含量。基因蛋白以荧光指数(fluorescence index,FI)>1.0为阳性表达,FI≤1.0为阴性表达。结果 EphA2、EphrinA1、EphrinB1蛋白在喉癌组织中的阳性表达率分别高于癌旁组织和正常喉黏膜组织(P<0.05)。在喉癌组织中,EphA2、EphrinA1、EphrinB1蛋白在淋巴结转移组的阳性表达率分别高于无淋巴结转移组;临床Ⅲ、Ⅳ期组的阳性表达率分别高于临床Ⅰ、Ⅱ期组。喉癌组织中EphA2与EphrinA1、EphrinB1蛋白有多元线性回归关系,且均为正相关。结论 EphA2和EphrinA1、EphrinB1蛋白高表达可能与喉癌的发生、发展有关。

Eph/Ephrin信号通路在血管新生中作用的研究进展

酪氨酸激酶受体Eph亚族及其配体Ephrin是一条重要的信号通路,参与机体的多种生理和病理生理过程.研究显示,Eph/Ephrin通路在血管的发育和出生后的血管新生中具有重要作用.讨论Eph/ Ephrin蛋白激酶家族在血管新生中作用机制及其在潜在的应用价值,有利于为心脑血管疾病的治疗提供新的策略.

Eph/ephrin信号通路与神经干细胞的增殖和分化

背景:研究表明,移植入宿主体内的神经干细胞可分化为神经元或神经胶质细胞。Eph/Ephrin信号通路与神经干细胞的增殖分化密切相关。通过调节Eph/Ephrin信号通路可控制神经干细胞的定向增殖分化。目的:对神经干细胞增殖、分化与Eph/Ephrin信号通路的关系进行综述。方法:应用计算机检索2000年1月至2018年11月Medline数据库、Ovid数据库、CNKI数据库、万方数据库,中文检索词为"Eph/ephrin信号通路,神经干细胞,分化,增殖",英文检索词为"Eph/ephrin signalingpathway,neural stem cells,differentiation,proliferation"。纳入与神经干细胞增殖、分化及Eph/Ephrin信号系统相关的文献,排除重复性研究,保留51篇文献进行综述。结果与结论:神经干细胞是一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞,能分化形成中枢神经系统几乎所有类型的细胞。Eph/Ephrin信号通路在神经干细胞的增殖分化中起重要作用。文章从神经干细胞、Eph/Ephrin信号通路、Eph/Ephrin信号通路与神经干细胞的增殖分化等方面分别进行了叙述。然而,Eph/Ephrin信号通路控制神经干细胞分化的具体机制还不是很清楚。

乳腺癌组织EphA7蛋白和膜联蛋白A5的水平研究

目的探讨乳腺癌组织中Eph基因家族A 7蛋白(EphA 7)和膜联蛋白A 5(ANXA 5)的表达水平及临床意义。方法采用免疫印迹法检测84例乳腺癌组织及对应癌旁组织的EphA 7和ANXA 5蛋白水平,分析两者的相关性及与乳腺癌不同临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平均高于癌旁组织(P<0.05),且乳腺癌组织中两者的蛋白水平在瘤体直径、临床分期及脉管癌栓上的分布均有统计学差异,且"瘤体直径>2 cm"、"临床分期为Ⅲ+Ⅳ"、及"伴有脉管癌栓"的水平较高(P<0.05);不同淋巴结转移情况的EphA 7蛋白水平差异有统计学意义;乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平呈正相关(r=0.715,P<0.05)。结论乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平较高,且与肿瘤的发生发展密切相关,有可能成为乳腺癌诊断、治疗及预后预测的重要指标。

EphrinA2和EphA7在前列腺癌中的表达及临床意义

目的观察EphrinA2和EphA7在前列腺癌中的表达情况及其与临床病理特征、预后的相关性。方法选取我院2010年5月—2012年12月收治的68例前列腺癌标本(观察组)及68例癌旁正常前列腺组织(对照组),检测EphrinA2和EphA7的表达情况,记录所有患者的性别、年龄、肿瘤及预后等情况。结果观察组EphrinA2和EphA7表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤分化程度、临床分期及是否出现骨转移和淋巴结转移的前列腺癌患者EphrinA2和EphA7的表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。EphrinA2表达阳性和非阳性的5年总生存率分别为27.03%(10/37)、45.16%(14/31),EphA7表达阳性和非阳性的5年总生存率分别为25.00%(8/32)、44.44%(16/36),差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型分析显示,肿瘤分化程度、临床分期、出现骨转移和淋巴结转移及EphrinA2和EphA7表达阳性均为影响前列腺癌预后的独立危险因素(P<0.05)。结论肿瘤分化程度、临床分期、出现骨转移和淋巴结转移及EphrinA2和EphA7表达阳性均为影响前列腺癌预后的独立危险因素,且EphrinA2和EphA7表达情况可作为评估病情进展和预后的有效指标。

Eph/Ephrin信号转导途径介导的生物学功能及其相关疾病的研究进展

促红细胞生成素诱导肝细胞(Eph)受体是已知的酪氨酸蛋白激酶受体(RTKs)家族中最大的一类受体,在个体发育过程和多种疾病进程中发挥重要作用。一方面,Eph受体与其膜结合配体(Ephrin)的相互作用介导了胚胎发育到成人的一系列生理和病理过程;另一方面,Eph受体在与病原相关模式分子结合后,可参与机体感染与免疫,促进相关疾病的发生与发展。笔者就近年来Eph/Ephrin信号转导途径介导的生物学功能及相关疾病的最新研究进展进行综述,并总结Eph受体和Ephrin配体在神经系统、血管生成、肿瘤生成以及机体感染与免疫中的作用。

慢病毒介导酪氨酸激酶受体A过表达载体促进神经干细胞增殖和分化的实验研究

目的探究酪氨酸激酶受体A(Trk A)过表达载体对神经干细胞增殖和分化能力的影响。方法取SD大鼠海马组织进行提取神经干细胞,采用免疫荧光的方法对神经球进行鉴定,利用siRNA技术构建Trk A过表达载体,将培养的神经干细胞分成三组,空白对照组为未做任何处理的细胞组,阴性对照组是经空白载体的慢病毒转染的细胞组,实验组是由Trk A的过表达载体构建的慢病毒转染细胞组。逆转录PCR(RT⁃PCR)检测Trk A和神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达,CCK⁃8试剂盒检测各组细胞的增殖率。结果免疫荧光染色显示神经干细胞细胞球Nestin(红色荧光),Brud染色(绿色荧光)阳性,且占细胞量的90%以上;荧光双标染色(棕色荧光)显示双染细胞量占总细胞量的90%以上,说明培养的细胞是神经干细胞。慢病毒滴度的检测结果:Trk A过表达慢病毒载体转染滴度为3×10^8 TU/mL。RT⁃PCR结果表明,空白对照组(1.09±0.09)和阴性对照组(1.11±0.05)的Trk A的mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的Trk A的mRNA相对表达量(7.12±1.32)要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);神经干细胞分化标志基因Tuj1,GFAP和CNPase的表达与Trk A相同。CCK⁃8试剂盒检测结果表明,空白对照组、阴性对照组及实验组的细胞增殖率分别为(87.92±9.21)%、(88.22±9.37)%、(176.01±11.33)%(F=18.082,P<0.05),其中空白对照组和阴性对照组的细胞增殖率比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组的细胞增殖率要明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)。结论Trk A过表达载体可以促进神经元干细胞向神经元细胞,星型胶质细胞和少突胶质细胞的分化,并且可以促进神经元干细胞的增殖。

EphA2与VEGF-C在胃癌中的表达及其与淋巴管生成的关系

目的:探讨胃癌组织中EphA2与VEGF-C的表达及临床意义。方法:用免疫组化法检测82例胃癌组织及其癌旁组织中EphA2与VEGF-C蛋白的表达,以及淋巴管密度(LVD);用real-timePCR检测20例胃癌组织及其癌旁组织中EphA2与VEGF-Cm RNA的表达。分析EphA2与VEGF-C表达与患者临床病理特点及淋巴管生成的关系。结果:EphA2与VEGF-C在胃癌组织中的阳性表达率均明显高于癌旁正常组织(65.8%vs.42.6%;71.9%vs.39.0%,均P<0.05)。EphA2与VEGF-C的高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期有关(均P<0.001)。EphA2蛋白与VEGF-C蛋白高表达的胃癌组织中LVD计数分别明显高于两者低表达胃癌组织(15.25±5.41vs.10.95±5.41,P=0.001;14.87±5.71vs.11.00±5.01,P=0.006)。胃癌组织中EphA2与VEGF-C蛋白以及m RNA表达均呈正相关(r=0.375,P=0.001;r=0.559,P=0.01)。结论:EphA2与VEGF-C在胃癌组织中均呈高表达,且可能共同促进淋巴管生成与胃癌淋巴结转移。

PI3K／Akt信号转导通路在EphB受体介导大鼠神经病理性痛中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）／丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）信号转导通路在EphB受体介导大鼠神经病理性痛中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠48只，体重150～180g，2～3月龄，采用随机数字表法，将大鼠随机分为6组（n=8），C1组、E1组、C2组和E2组采用坐骨神经慢性压迫法（CCI）建立大鼠神经病理性痛模型，S1组和S2仅暴露坐骨神经。S1组和C1组分别于术前1h、术后1、2d时鞘内注射生理盐水5ul，E1组给予EphB受体拮抗剂EphB1与IgG的重组体（EphB1-Fc）0．5／ug；s2组和C2组于术后5d时鞘内注射生理盐水5ul，E2组给予EphB1-Fc0．5ug。各组分别于术前、术后1、3、5d时测定双侧热缩足潜伏期（PWL）和机械缩足阈值（PWT），计算非术侧与术侧PWL和PWT的差值（△PWL和△PWT）。于术后5d测定痛阈结束后，取术侧L4～6节段脊髓，采用免疫组织化学法检测c—Fos、P13K及磷酸化Akt（p-Akt）的表达水平。结果与S1组或S2组比较，C1组或C2组术后△PWL延长，△PWT增加，c—Fos、PI3K和p-Akt表达上调（P〈0．05）；与C1组或C2组比较，E组或E2组／xPWL缩短，△PWT降低，c—Fos、P13K和p-Akt表达下调（P〈0．05）。结论EphB受体通过P13K／Akt信号转导通路介导大鼠神经病理性痛的形成和维持。

Eph受体及其配体Ephrin与肿瘤的关系

肿瘤的发生、发展和转移离不开肿瘤血管的生成。EPh受体及其配体Ephrin参与消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤、造血系统肿瘤和骨肉瘤的发生以及肿瘤血管生成、肿瘤复发和转移等过程。Eph受体及其配体Ephrin有望成为新的分子标志和肿瘤治疗的新靶点。

氙气对脑白质损伤新生大鼠脑组织EphB4和EphrinB2mRNA表达的影响

目的 探讨脑白质损伤（white matter damage,WMD）的发病机制及氙气干预对新生大鼠脑组织EphB4和EphrinB2 mRNA表达的影响.方法 将96只3日龄SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氙气干预1组和氙气干预2组各24只.模型组和2个氙气干预组采用腹腔注射脂多糖0.05 mg/kg联合右侧颈动脉结扎低氧处理1h建立WMD模型.氙气干预1组于建模后即刻、氙气干预2组于建模后2h吸入50％氙气3h.氙气干预完成后,各组均于0、24、48h和72h各取6只大鼠处死,进行脑室周围白质组织苏木精-伊红染色,采用实时定量聚合酶链反应法测定脑组织EphB4和EphrinB2 mRNA表达水平并进行统计学分析.结果 （1）模型组脑白质结构疏松,呈网状,可见较多细胞核固缩;氙气干预1组与2组24、48h和72h脑组织病理损伤程度均较模型组减轻,可见部分核固缩.（2）与假手术组比较,除72 h氙气干预1组EphB4 mRNA表达量未显著增加外,模型组、氙气干预1组和2组在各时间点EphB4及EphrinB2 mRNA表达量均显著增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,除72 h氙气干预2组EphB4 mRNA表达量未显著减少外,氙气干预1组和2组各时间点EphB4及EphrinB2 mRNA表达量均显著减少,差异有统计学意义（P＜0.05）;氙气干预1组与2组比较,各时间点两指标差异均无统计学意义（P＞0.05）.结论 新生大鼠WMD后脑组织EphB4和EphrinB2 mRNA表达明显增加,提示可能有反应性新生血管生成;氙气干预可发挥神经保护作用,减少EphB4和EphrinB2 mRNA表达及血管新生,早期干预可能效果更佳.

miR-7856-5p通过靶向作用3对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-7856-5p对EPH受体A3(EPHA3)基因表达的调控作用及对结直肠癌细胞SW480迁移和增殖的影响。方法实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测结直肠癌组织和细胞系中miR-7856-5p的表达。脂质体转染法分别将miR-7856-5p模拟物和miR-NC转入结直肠癌细胞SW480,分别定义为miR-7856-5p组和miR-NC组。Real-time PCR检测转染效果。Transwell实验和CCK-8实验检测转染后细胞迁移和增殖能力。生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因系统验证miR-7856-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blot检测转染后细胞中EPHA3的表达。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-7856-5p在结直肠癌组织的表达明显低于癌旁组织(P<0.01)。miR-7856-5p在结直肠癌细胞系的表达明显低于正常肠黏膜上皮细胞(P<0.05),在SW480细胞中表达最低(P<0.01)。miR-7856-5p组miR-7856-5p的表达明显高于miR-NC组,差异有统计学意义[(9.49±1.09)比(1.06±0.18),P<0.01]。miR-NC组和miR-7856-5p组迁移细胞数量分别为(125.70±14.05)个和(42.01±8.98)个,miR-7856-5p组细胞迁移能力明显下降(P<0.01)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组细胞增殖能力明显降低(P<0.05)。生物信息学软件显示miR-7856-5p的靶基因是EPHA3。双荧光素酶报告基因系统证实miR-7856-5p可靶向结合EPHA3基因(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-7856-5p组SW480细胞中EPHA3的表达明显降低(P<0.05)。结论miR-7856-5p可通过靶向调控EPHA3的表达,抑制结直肠癌细胞SW480的迁移和增殖能力。

动静脉特异性内膜增生信号通路的研究现状

动脉与静脉不仅仅存在结构与功能的区别,两者更具有基因水平上的差异,分子指纹EphrinB2/EphB4在血管生成和重构中均发挥着重要作用,选择性干预EphrinB2/EphB4信号通路上的某一环节可能有助于治疗动静脉特异性内膜增生,因此,对EphrinB2/EphB4的表达调控以及相关信号通路的研究尤为重要。