siRNA抑制Cyclophilin A基因对喉鳞癌细胞Hep-2增殖和转移的影响

目的:研究小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)抑制亲环素A(cyclopilin A,CypA)的表达对喉癌细胞株Hep-2增殖和侵袭迁移的影响及相关机制。方法:实验分为3组:化学合成的靶向CypA的si RNA转染喉癌细胞Hep-2(CypA si RNA组),转染阴性对照NC si RNA的细胞(NC si RNA组)和对照组(control组)。运用real-time PCR(RT-PCR)检测CypA及CD147m RNA的表达,Western blot检测CypA、CD147的蛋白表达。MTT法检测CypA对细胞生长曲线的影响;平板克隆形成实验检测CypA在喉癌细胞增殖中的作用;Transwell法检测CypA在喉癌细胞侵袭迁移中的作用。结果:CypA si RNA转染后的喉癌细胞株Hep-2中CypA、CD147的m RNA和蛋白表达水平均明显降低(P=0.000)。CypA si RNA转染后的Hep-2细胞生长缓慢,克隆形成被抑制,control组克隆数为(235.00±23.90)、NC si RNA组为(240.67±10.07)、CypA si RNA组为(129.33±14.22)(F=40.460,P=0.000);转染后Hep-2细胞的迁移(F=497.124,P=0.000)、侵袭(F=129.787,P=0.000)能力明显降低。结论:CypA表达下调后可抑制喉癌细胞株Hep-2的增殖和侵袭迁移能力,其机制可能与抑制CD147的表达有关。

转染IGF2BP3基因siRNA和真核表达质粒的神经母细胞瘤细胞侵袭凋亡变化观察

目的观察转染胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)基因siRNA和真核表达质粒的神经母细胞瘤(NB)细胞侵袭凋亡变化,以探讨IGF2BP3基因对NB细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取NB细胞株IMR-32、SK-N-BE(2)、BE(2)-C、SH-SY-5Y,采用qRT-PCR检测IGF2BP3 mRNA、Western blotting法检测IGF2BP3蛋白、Transwell实验观察NB细胞的体外侵袭能力。根据上述实验结果,选择IGF2BP3表达水平最高的SK-N-BE(2)细胞及IGF2BP3表达水平最低的IMR-32细胞作为后续实验细胞。SK-N-BE(2)细胞转染针对IGF2BP3基因的小干扰RNA(siRNA)(SK-siIGF2BP3组),并设立细胞对照组(SK-Control组,只含有脂质体)和siRNA对照组(SK-siNC组,转染阴性对照序列)。IMR-32细胞转染IGF2BP3真核表达质粒(IMR-IGF2BP3组),并设立细胞对照组(IMR-Control组,只含有脂质体)和空载体对照组(IMR-Vector组,转染空载体)。转染成功后,采用qRT-PCR、Western blotting法和细胞免疫荧光染色法检测各组IGF2BP3 mRNA及蛋白,Transwell实验观察各组细胞侵袭能力,流式细胞术测算各组NB细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞侵袭相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Vimentin。结果与SKControl组和SK-siNC组相比,SK-siIGF2BP3组IGF2BP3 mRNA、蛋白相对表达量降低,穿越Transwell小室膜细胞数减少,凋亡率升高(P均<0.05);与IMR-Control组和IMR-Vector组相比,IMR-IGF2BP3组IGF2BP3 mRNA、蛋白相对表达量升高,穿越Transwell小室膜细胞数增加,凋亡率降低(P均<0.05)。在SK-N-BE(2)细胞中,与SK-siNC组及SK-Control组比较,SK-siIGF2BP3组中N-cadherin、Vimentin蛋白相对表达量下降,E-cadherin蛋白相对表达量上升(P均<0.05);在IMR-32细胞中,与IMR-Vector组、IMR-Control组比较,IMR-IGF2BP3组N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量升高,E-cadherin蛋白相对表达量下降(P均<0.05)。结论转染IGF2BP3基因siRNA的NB细胞侵袭能力减弱、凋亡率增加,转染IGF2BP3真核表达质粒的NB细胞侵袭能力增强、凋亡率降低。

GSK-3β对子宫内膜样腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)对子宫内膜样腺癌已分化细胞株Ishikawa、HEC-1-A及未分化细胞株KLE增殖和侵袭能力的影响。方法:用GSK-3β小分子干扰RNA(GSK-3βsiRNA)转染上述3种细胞株,采用Western印迹法检测GSK-3β蛋白及凋亡相关蛋白caspase-3的表达;Brdu掺入实验检测细胞增殖率;FCM法检测细胞周期及凋亡率;Transwell侵袭试验检测对细胞侵袭、运动能力的影响;明胶酶谱法检测细胞分泌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的情况。结果:转染GSK-3βsiRNA后,3种细胞株中GSK-3β蛋白的表达均低于对照组(P<0.05);Ishikawa、HEC-1-A细胞Brdu掺入率降低,S期细胞数比例减少,凋亡率增加,caspase-3表达上调;细胞侵袭能力降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。但是KLE细胞株与对照组相比,增殖和侵袭能力均无明显差异(均为P>0.05)。结论:GSK-3β能促进已分化的子宫内膜样腺癌细胞株Ishikawa、HEC-1-A的增殖和侵袭;但是对未分化的KLE细胞株的增殖和侵袭能力无明显影响。