抗EphA4多肽单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗EphA4羧基端多肽的单克隆抗体,研究其免疫学特性。方法:体外合成EphA4羧基端多肽免疫小鼠,运用杂交瘤技术建立抗EphA4多肽单克隆抗体细胞株。通过免疫化学方法分析单抗的免疫学特性。结果:获得1株抗EphA4单克隆细胞,所分泌的抗体具有EphA4特异性,能识别人类、鸡与小鼠EphA4;可用于EphA4的ELISA、免疫沉淀、免疫印迹与免疫组织化学染色。结论:抗EphA4多肽单抗具备优良的免疫学特性,适用于多种免疫化学技术,是EphA4及其配体研究的重要工具。

受体酪氨酸激酶EphA4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨Eph A4蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法收集未经治疗的乳腺浸润性导管癌手术标本77例,用Eph A4抗体进行免疫组化En Vision法染色,分析乳腺癌细胞染色强度与临床病理特征的相关性。结果 Eph A4在正常乳腺细胞中66.2%呈强阳性(■),19.5%呈中度阳性(■),14.3%呈弱阳性(-^+)。Eph A4蛋白在浸润性导管癌中20.8%呈强阳性(■),24.7%呈中度阳性(■),54.5%呈弱阳性(-^+)。Eph A4蛋白在正常乳腺细胞和浸润性导管癌细胞之间的表达差异有显著性(P<0.001)。Eph A4蛋白表达丢失与肿瘤高分级(P=0.029)、TNM病理分期(P=0.034)和Ki-67高增殖指数(P<0.001)呈正相关;与患者年龄(P=0.940)、淋巴结转移(P=0.329)、分子分型(P=0.945)和HER-2表达(P=0.431)无相关性。结论 Eph A4蛋白在浸润性导管癌中表达下调,提示Eph A4基因在乳腺癌中具有抑癌的作用,是潜在的诊断和治疗新靶标。

抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞发育影响的研究

目的探讨抑制EphA4受体活性对少突胶质前体细胞(OPC)发育的影响。方法将分离纯化的OPC随机分为正常组、EphA4受体抑制剂处理组(EphA4-FC组)。EphA4-FC组加入250 nmol/L EphA4-FC,培养至第2天。免疫细胞化学染色法观察正常组OPC特异性标志物NG2与EphA4受体的共表达情况;通过细胞计数观察两组OPC数量变化情况;通过Western blot检测两组细胞蛋白样品中OPC特异性蛋白血小板源性生长因子α受体(PDGFαR)的表达变化情况。结果免疫细胞化学染色显示,正常体外培养OPC高表达EphA4受体;与正常组比较,EphA4-FC组的NG^(2+)阳性细胞数量明显增多(P<0.05)。Western blot显示,与正常组比较,EphA4-FC组细胞蛋白中PDGFαR的表达显著增高(P<0.05)。结论培养的OPC上高表达EphA4受体,通过抑制EphA4受体可以促进OPC的增殖。

全脑缺血再灌注后海马EphA受体基因表达的变化特点

目的:观察EphA受体在海马全脑缺血再灌注后基因表达的改变。方法:SD大鼠50只随机分为假手术组10只及全脑缺血再灌注组40只,Pulsinelli四血管阻断法建立全脑缺血再灌注模型,采用半定量RT-PCR观察假手术组及缺血组在缺血后不同时间点(6 h、1 d、3 d、7d)EphA受体m RNA含量变化的情况,免疫荧光双标法检测EphA4受体在海马的细胞定位。结果:EphA1-A8及EphA10 RNA在正常海马组织均有表达,EphA4受体含量多。在缺血状态下,EphA1、EphA2、EphA3、EphA6、EphA7及EphA8的mRNA表达水平一过性上调,EphA4、EphA5和EphA10的m RNA表达水平逐步上调;EphA4受体亦是缺血后变化最显著的EphA受体。免疫荧光双标显示EphA4主要分布于海马CA1-CA3区及DG区Neu N阳性锥体神经元。结论:在海马不同的EphA受体对缺血呈现出不同的应答模式,EphA4是海马正常条件下表达最为丰富的EphA受体并且在缺血条件下出现最为显著地表达变化。EphA4受体主要分布于海马CA1-CA3区以及DG区NeuN阳性锥体神经元。

Eph受体在卵巢癌中的研究进展

促红细胞生成素肝细胞(erythropoietin-producing hepatocellular,Eph)受体是酪氨酸受体家族中的一员,广泛表达于人类多种组织或细胞中,具有调节细胞生长、迁移及血管形成的潜在作用。近年来研究发现,EphA2、EphB2、EphB4在卵巢癌中呈现高表达,这种高表达与肿瘤的增殖、转移、血管形成和侵袭性相关,与患者预后负相关,有可能成为卵巢癌患者的预后指标或治疗靶点。

EphA4基因在K562细胞野生株与耐药株中的表达差异

目的观察EphA4基因在K562细胞野生株与耐药株中的表达情况，为研究EphA4在白血病发生发展中的作用奠定基础。方法以荧光实时定量PCR方法检测K562细胞野生株与耐药株中EphA4基因表达。结果E—phA4基因在K562细胞野生株中的表达明显高于K562细胞耐药株，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论根据EphA4在K562细胞野生株与K562细胞耐药株中的表达差异显著，推论EphA4这种差异的存在对于研究K562细胞所代表的慢性粒髓系白血病的作用机制、病理演变、临床表现及预后具有一定意义。

EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子蛋白质和转录本表达的影响

目的探讨EphA4受体对大鼠海马脑区神经元脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)蛋白质和转录本表达的影响。方法将原代培养的大鼠海马脑区神经元随机分为正常对照组和EphA4-Fc组,EphA4-Fc组给予EphA4受体拮抗剂EphA4-Fc,培养7 d后,Western blot法检测大鼠海马脑区BDNF蛋白的表达,qPCR检测BDNF mRNA的表达。结果与正常对照组相比,EphA4-Fc组大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白表达明显升高(P<0.01),mRNA转录本Ⅱc的表达明显升高(P<0.001)。结论给予EphA4-Fc后,大鼠海马脑区神经元BDNF蛋白翻译增加与mRNA转录本Ⅱc表达升高相关。本研究为临床上脑卒中的治疗以及神经元保护提供了新的思路。

阳和汤含药血清对乳腺癌干细胞增殖的影响

目的观察阳和汤含药血清对乳腺癌干细胞HMLER90hi增殖的影响,探讨其作用机制。方法将20只雌性SD大鼠按随机数字表法分为阳和汤低、中、高剂量组和对照组,制备阳和汤含药血清和空白血清。采用MTT法检测各组在24、48、72 h对HMLER90hi细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR检测各组细胞EphA4、NF-κB p50 mRNA表达水平。结果与对照组比较,阳和汤低、中、高剂量组细胞24 h[(0.818±0.061)、(0.706±0.073)、(0.587±0.052)比(0.928±0.075)]、48 h[(0.760±0.047)、(0.638±0.056)、(0.510±0.059)比(0.973±0.095)]、72 h[(0.672±0.102)、(0.508±0.092)、(0.448±0.048)比(1.023±0.099)]增殖活性均降低(P<0.05或P<0.01)。药物干预24 h后,与对照组比较,阳和汤低、中、高剂量组EphA4 mRNA[(0.54±0.07)、(0.54±0.07)、(0.33±0.04)比(0.68±0.09)]、NF-κB p50 mRNA[(0.69±0.10)、(0.54±0.08)、(0.41±0.06)比(0.85±0.13)]表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论阳和汤可抑制乳腺癌干细胞HMLER90hi增殖,其作用机制可能与抑制单核巨噬细胞近分泌通路的传导有关。