小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化

目的：将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化，以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法以重组质粒GV287－EphB2作为模板，经PCR扩增，得到FN结构域的cDNA片段，并将其克隆至pET－28a载体中。将重组质粒pET－28a－FN转化至大肠杆菌BL21（ DE3）感受态细胞，经IPTG诱导后，利用SDS－PAGE检测FN－His6融合蛋白的表达。最后采用Ni－NTA亲和层析法对该蛋白进行纯化。结果本研究成功地构建了FN结构域的原核表达载体。经鉴定，FN－His6融合蛋白能够在大肠杆菌中表达。纯化后，得到少量可溶性FN－His6融合蛋白。结论小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域可以在大肠杆菌中表达并纯化，为研究与FN结构域相互作用的蛋白奠定了实验基础。