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小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化
1
作者
石小东
胡蕊
高灿
《徐州医学院学报》
CAS
2015年第10期690-692,共3页
目的:将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化,以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法以重组质粒GV287-EphB2作为模板,经PCR扩增,得到FN结构域的cDNA片段,并将其克隆至pET-28a载体中。将重组质...
目的:将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化,以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法以重组质粒GV287-EphB2作为模板,经PCR扩增,得到FN结构域的cDNA片段,并将其克隆至pET-28a载体中。将重组质粒pET-28a-FN转化至大肠杆菌BL21( DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测FN-His6融合蛋白的表达。最后采用Ni-NTA亲和层析法对该蛋白进行纯化。结果本研究成功地构建了FN结构域的原核表达载体。经鉴定,FN-His6融合蛋白能够在大肠杆菌中表达。纯化后,得到少量可溶性FN-His6融合蛋白。结论小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域可以在大肠杆菌中表达并纯化,为研究与FN结构域相互作用的蛋白奠定了实验基础。
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关键词
ephb2
fn
结构域
原核表达
亲和层析
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题名
小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化
1
作者
石小东
胡蕊
高灿
机构
徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室
出处
《徐州医学院学报》
CAS
2015年第10期690-692,共3页
基金
国家自然科学基金(81300930,81273489)
江苏省自然科学基金(BK20130232,BK2012582)
江苏省高校自然科学研究重大项目(12KJA180008)
文摘
目的:将小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌细胞中进行表达与纯化,以便于研究与FN结构域相互作用的蛋白质。方法以重组质粒GV287-EphB2作为模板,经PCR扩增,得到FN结构域的cDNA片段,并将其克隆至pET-28a载体中。将重组质粒pET-28a-FN转化至大肠杆菌BL21( DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后,利用SDS-PAGE检测FN-His6融合蛋白的表达。最后采用Ni-NTA亲和层析法对该蛋白进行纯化。结果本研究成功地构建了FN结构域的原核表达载体。经鉴定,FN-His6融合蛋白能够在大肠杆菌中表达。纯化后,得到少量可溶性FN-His6融合蛋白。结论小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域可以在大肠杆菌中表达并纯化,为研究与FN结构域相互作用的蛋白奠定了实验基础。
关键词
ephb2
fn
结构域
原核表达
亲和层析
Keywords
ephb2 fn domain
prokaryotic expression
affinity chromatography
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠受体酪氨酸激酶EphB2 FN结构域在大肠杆菌中的表达与纯化
石小东
胡蕊
高灿
《徐州医学院学报》
CAS
2015
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