喉鳞状细胞癌中EphB4基因突变与表达的研究

目的研究EphB4基因在喉鳞状细胞癌(喉癌)发生、发展中的生物学功能。方法应用RT-PCR和Westernblot的方法,以癌旁组织为参照检测EphB4基因在喉癌组织中的表达情况;应用差异聚合酶链反应(PCR)方法检测肿瘤组织中EphB4基因的扩增情况,聚合酶链反应-低离子浓度-单链构象多态性(PCR-LIS-SSCP)技术结合DNA测序筛查喉癌患者EphB4基因第13、14外显子的突变情况。结果EphB4基因mRNA和蛋白质在喉癌中的表达水平均明显高于癌旁组织(分别为0.738±0.137对0.450±0.173和0.757±0.174对0.509±0.168,均P<0.01),且EphB4基因的高表达与肿瘤的临床分期、分级、肿瘤的直径大小以及肿瘤的转移密切相关,40对配对样本中未检测出基因的扩增和突变。结论EphB4基因的过表达可能与喉癌的发生、发展有关,可能作为喉癌诊断和治疗的一个靶点。

新生儿门体静脉分流伴多发性血管瘤合并EPHB4基因变异1例

门体静脉分流是一种罕见的门静脉与体静脉之间存在异常吻合的血管异常,临床表现多样,可累及多系统,常在产前明确诊断或偶然发现。本文报道1例以多发性血管瘤为主要表现伴EPHB4基因变异的新生儿门体静脉分流病例,以提高临床医生对该病的认识。

Ephb4基因多态性与非小细胞肺癌的关系

目前，人类功能基因组学及疾病基因组学已进入多基因疾病研究领域，而肿瘤被认为是多基因疾病，病因及发病机制尚不完全清楚。单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要指由基因组核苷酸水平上的变异引起的DNA序列的多样性，是受到高度重视的新一代遗传标志，将构成今后基因组学研究的主要工具。

RNAi抑制人前列腺癌PC3细胞EphB4基因表达的实验研究

目的观察RNAi对人前列腺癌PC3细胞EphB4基因表达的抑制效应,寻求高效率的干扰片段。方法设计并化学合成特异性针对EphB4基因的siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)为实验组,另设一无意义siRNA为对照组,脂质体转染PC3细胞。荧光显微镜观察siRNA的转染效率;分别应用RT-PCR以及Western Blot、免疫荧光组织化学染色方法检测EphB4 mRNA和蛋白的表达,以及应用MTT法检测siRNA对PC3细胞生长的影响,比较实验组与对照组的差异及评估siRNA阻抑效应。结果实验组siRNA对PC3细胞EphB4 mRNA和蛋白的表达较对照组均有不同程度的下降,统计学分析其差异具有统计学意义(P<0.05)。siRNA对PC3细胞的生长具有抑制作用。结论RNAi可以有效地抑制人前列腺癌PC3细胞EphB4的表达,找到了具有较高抑制效率的siRNA,为进一步探究EphB4的生物学功能、体内实验和临床抗肿瘤药物研究打下基础。

甲基化抑制剂对CEM细胞EphB4基因表达及细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对人急性淋巴细胞白血病细胞株CEM中抑癌基因EphB4的转录调控作用及对CEM细胞增殖凋亡的生物学影响,为寻找肿瘤治疗新靶点提供实验依据。方法采用亚硫酸氢盐修饰后测序法检测EphB4基因甲基化水平,荧光定量PCR法(Q-PCR)和Western blot方法检测5-aza-CdR处理前后EphB4基因mRNA及蛋白表达水平;MTS法检测不同剂量(1.0、2.5、5.0μmol/L)的5-aza-CdR作用于CEM细胞0 h、24 h、48 h、72 h、96 h对CEM细胞存活率的影响,流式细胞仪分析5-aza-CdR作用96 h对CEM细胞周期及凋亡的影响。结果 CEM细胞中存在EphB4基因的甲基化,甲基化水平为31.4%;不同浓度5-aza-CdR作用后CEM细胞甲基化水平均下降。5-aza-CdR作用使CEM细胞中EphB4基因的mRNA和蛋白表达上升;5-aza-CdR明显抑制CEM细胞增殖,并与药物浓度及作用时间呈正相关。5-aza-CdR处理96 h后,早期凋亡由4.1%上升为24.8%。用药96 h后,CEM细胞G1期由62.4%降至46.8%,G2期由2.1%升至16.2%,细胞阻滞于G2期。结论特异性甲基化转移酶抑制剂5-aza-CdR能使CEM细胞中沉默的EphB4基因重新表达,并可抑制白血病细胞增殖和诱导其凋亡。

Ephb4启动子区域甲基化与肺腺癌的关系

目的研究肺腺癌患者外周血中Ephb4启动子区域甲基化状态，发现Ephb4甲基化与肺腺癌之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）方法检测肺腺癌样本、及对照正常人血样本中Ephb4基因启动子区甲基化表型状态。结果证明Ephb4基因启动子区域在肺腺癌血样本中呈现高甲基化状态23．8％，正常人血样本中为O％。结论Ephb4基因启动子区域呈现高甲基化状态，表明Ephb4基因可能是肺腺癌的发生的早期事件，在肺腺癌的发生发展过程中起重要作用。

Expression of EphB4 and HIF-1α in lung cancer and its clinical significance

Objective： To investigate the relationship between the expression of EphB4 and HIF-la in lung cancer and their biological significance. Methods： The expression of EphB4 and HIF-1α was detected in 54 specimens of lung cancer by using streptavidin-peroxidase （SP）immunohistochemical method, and 10 normal lung tissues as control. Results： Among the 54 cases of lung cancer, the positive rate of EphB4 was 50.0%; 42.6% of the tumors were positive for HIF-1α. The expression of these two kinds of proteins was related to gross types, differentiation and clinical stages （P〈0.05）, but not to histological classification, age, sex and lymphoid metastasis （P〉0.05）. A highly positive correlation was observed between the expression of EphB4 and HIF-1α （P〈0.01）. Conclusion： Overexpression of EphB4 and HIF-1α may play an important role in the pathogenesis, progression and malignant degree of lung cancer. Detection of EphB4 and HIF-1α expression might be helpful to predict prognosis of patients with lung cancer.

新生儿淋巴管畸形7型1例

新生儿淋巴管畸形7型是一种常染色体显性遗传病,以淋巴水肿为主要表现,严重者可出现非免疫性胎儿水肿、导致围产期死亡。本文报道1例淋巴管畸形7型新生儿,以生后呼吸困难、双侧胸腔积液、全身水肿为主要表现,基因检测发现EPHB4基因变异,经保守治疗后好转出院,1岁7月龄随访时生长发育与同龄儿相仿。