Ephrin A_1参与氧诱导的小鼠视网膜新生血管形成的研究

目的观察Ephrin A_1是否参与视网膜发育和氧诱导的视网膜病理性新生血管生成。方法利用氧诱导新生C57BL/6J小鼠制备小鼠视网膜新生血管模型,利用RT-PCR检测Ephrin A家族的基因在小鼠视网膜新生血管模型视网膜中的表达。结果实验发现EhphrinA_1可以在发育中的视网膜中表达,而且其表达量与视网膜的发育阶段或者氧诱导视网膜新生血管生成相关。结论Ephrin A_1参与视网膜的发育和视网膜病理性血管生成等重要的生理和病理过程。

抑制PI3K／Akt信号通路对Ephrin—A1介导的肝癌细胞运动和侵袭能力的影响

目的探讨PI3K／Akt信号传导通路在Ephrin—A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中的作用。方法Western blot法检测Ephrin-A1／Fc融合蛋白作用人肝癌细胞系Huh-7细胞前后丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）和磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）信号分子的表达，利用LY294002特异性的阻断PI3K／Akt信号通路后，检测细胞运动能力、细胞侵袭能力的变化。结果Ephrin—A1／Fc融合蛋白作用后p-Akt磷酸化蛋白的表达与对照组比较明显上升（t=4．564，P〈0．05），PI3K／Akt信号通路可能为Ephrin—A1／EphA1作用的下游信号传导通路；LY294002明显抑制Ephrin—A1／Fc融合蛋白对Huh-7细胞中PI3K／Akt信号通路的激活，p-Akt磷酸化蛋白的含量与对照组比较明显减少（P〈0．05）；Ephrin-A1介导肝癌细胞的运动能力及侵袭能力明显受到抑制（P〈0．05）。结论PI3K／Akt信号通路在Ephrin—A1介导的肝癌细胞侵袭、转移过程中起重要的作用。

肝细胞癌中Ephrin-A1及其受体的表达与血管生成的关系

目的探讨Ephrin-A1及其受体与肝细胞癌血管生成之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测52例肝细胞癌(肝癌组)和癌旁组织(癌旁组)标本中Ephrin-A1及其受体EphA1和EphA2蛋白及mRNA的表达情况,并分析其与肝细胞癌的临床病理因素及微血管密度(microvessel density,MVD)之间的关系。结果在52例肝癌组中Ephrin-A1及其受体EphA1,EphA2的蛋白阳性表达率分别为59.6%(31/52),53.8%(28/52)和17.3%(9/52),而癌旁组织中的蛋白阳性表达率分别为23.1%(12/52),28.9%(15/52)以及21.2%(11/52)。Ephrin-A1及其受体EphA1在两组中的差异有统计学意义(P<0.05),而EphA2在两组间的差异无显著性(P>0.05)。Ephrin-A1及其受体EphA1mRNA在肝癌组的阳性表达率为67.3%(35/52)和73.7%(38/52),明显高于癌旁组中的阳性表达42.3%(22/52)和48.1%(25/52)(P<0.05),而EphA2mRNA在两组间的差异无显著性(P>0.05)。Ephrin-A1蛋白的高表达与患者的甲胎蛋白(AFP)水平及有无门静脉癌栓有关(P<0.05)。Spearman等级相关分析显示,在肝癌组中Ephrin-A1的表达与EphA1的表达呈正相关(r=0.671,P<0.01);而Ephrin-A1与EphA2的表达无相关性;肝癌组中Ephrin-A1的表达与MVD呈正相关(r=0.826,P<0.01)。结论Ephrin-A1通过与其受体EphA1相结合,促进肝细胞癌的血管生成,从而促进肝细胞癌的生长、浸润和转移;Ephrin-A1及其受体EphA1有望成为肝癌抗血管生成治疗新的靶点。

Hp感染的胃癌组织中Eph A2和Ephrin A1的表达与远处转移的关系

采用蛋白印迹法和逆转录-聚合酶链反应法检测胃癌及正常胃黏膜组织中Eph A2、Ephrin A1和E-cadherin的蛋白及mRNA水平,分析其与临床资料的关系,初步探讨幽门螺杆菌(Hp)促进胃癌发展的机制。结果胃癌组Eph A2和Ephrin A1蛋白及mRNA水平显著高于正常胃黏膜组(P<0.05),且伴Hp感染组显著高于未伴Hp感染组(P<0.05);胃癌组Eph A2和Ephrin A1蛋白及mRNA水平与存在淋巴结转移呈正相关;Eph A2和Ephrin A1分别与E-cadherin蛋白表达量呈负相关。说明Hp可能通过诱导胃癌细胞合成更多的Eph A2和Ephrin A1,从而抑制E-cadherin蛋白的表达,使胃癌细胞通过淋巴系统发生转移。

Ephrin-A1、Ephrin-B1融合蛋白的构建、表达和活性测定

目的克隆并合成Eph受体的两个主要配体ephrinA1和ephrinB1的融合蛋白。方法利用RTPCR技术,分别扩增了ephrinA1、ephrinB1胞外序列和小鼠IgG2b的Fc序列,将其连接后,插入pAlterMax表达载体,得到两个重组子pAlterMaxephrinA1Fc和pAlterMaxephrinB1Fc,经序列测定,确认无突变产生后转染至293T细胞,使之表达分泌型ephrinA1Fc和ephrinB1Fc可溶性融合蛋白,并利用蛋白A琼脂糖凝胶纯化。利用免疫沉淀和Westernblot检测了ephrinA1Fc和ephrinB1Fc的相应受体的活性。结果EphrinA1和ephrinB1融合蛋白可以成功刺激其相应的Eph受体,使之发生磷酸化。结论制备得到的两个融合蛋白具有相应的生物活性,为进一步研究Eph受体酪氨酸激酶家族的功能打下了基础。

EphA2和EphrinA 1在宫颈鳞癌中的表达及其与血管生成的关系

目的探讨Eph A2和Ephrin A1在宫颈鳞状细胞癌变过程中的表达及其与临床病理因素间的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测Eph A2和Ephrin A1在15例宫颈慢性炎症、35例宫颈上皮内瘤变(CIN)和70例宫颈鳞癌组织中的表达,并采用CD 34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。分析Eph A 2和Ephrin A1的表达与MVD之间的相关性及其与宫颈鳞癌临床病理特征的关系。结果 70例宫颈鳞癌组织中,Eph A2和Ephrin A1阳性率分别高于CIN组和宫颈慢性炎症组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。Eph A2与Ephrin A1的表达与淋巴结转移和侵润深度有关(P<0.05);Eph A2与Ephrin A1的表达呈正相关(r=0.306,P<0.05)。Eph A2和Ephrin A1与年龄、FIGO分期及病理分级之间差异无统计学意义(P>0.05)。宫颈鳞癌的MVD与年龄无关,而与肿瘤分化程度、FI-GO分期、淋巴结转移及局部侵润深度有关(P<0.05)。经Spearman等级相关分析,Eph A2与Ephrin A1的表达与MVD呈显著正相关(P<0.01)。结论 Eph A2和Ephrin A1表达均与宫颈鳞癌的发生、发展密切相关,联合检测有助于宫颈鳞癌早期诊断和预后评价,可以为今后宫颈鳞癌的靶向治疗提供新的靶点。

血清CHIT1、Ephrin-A1、MSTN与糖尿病视网膜病变发生的相关性及其对患者预后的评估价值

目的研究血清几丁质酶1(CHIT1)、肝配蛋白A1(Ephrin-A1)、肌肉生长抑素(MSTN)与糖尿病视网膜病变(DR)发生的相关性及其对患者预后的评估价值。方法选取2017年1月—2019年12月琼海市人民医院诊治的2型糖尿病(T2DM)患者200例(400只眼),根据其是否发生视网膜病变及DR分期标准,分为非糖尿病视网膜病变(NDR)组84例(168只眼)、增殖期糖尿病视网膜病变(PDR)组75例(150只眼)和非增殖期糖尿病视网膜病变(NPDR)组41例(82只眼)。并选取同期同医院体检的健康者80例(160只眼)作为对照组。DR组患者依照DR临床诊疗指南治疗12个月后,根据其视力残疾情况,分为预后良好组和预后不良组。所有受试者均取静脉血用以检测血清中CHIT1、Ephrin-A1和MSTN的含量,并进行统计学分析。同时,分析其与DR发生的相关性及对DR患者视力残疾的预测价值。结果(1)CHIT1、Ephrin-A1、MSTN:对照组、NDR组、NPDR组、PDR组组间CHIT1(F=241.208,P=0.000)、Ephrin-A1(F=115.766,P=0.000)、MSTN(F=141.346,P=0.000)比较,差异均有统计学意义。各指标各组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组共36例(72只眼),预后良好组共80例(160只眼)。预后不良组血清CHIT1(t=10.870,P=0.000)、Ephrin-A1(t=12.107,P=0.000)、MSTN(t=13.005,P=0.000)水平均高于预后良好组,差异有统计学意义。(2)CHIT1、Ephrin-A1、MSTN与DR发生的相关性分析:血清CHIT1(r=0.427,P=0.000)、Ephrin-A1(r=0.508,P=0.000)、MSTN(r=0.410,P=0.000)与DR发生均呈正相关,均有统计学意义。(3)DR的危险因素分析:血清CHIT1(OR=1.854,P=0.000)、Ephrin-A1(OR=1.696,P=0.001)、MSTN(OR=1.669,P=0.006)升高均是DR发病的独立危险因素。(4)血清CHIT1、Ephrin-A1、MSTN对DR患者视力残疾的预测:血清CHIT1、Ephrin-A1、MSTN及三者联合检测预测DR患者视力残疾的受试者工作特征曲线的曲线下面积(AUC)分别为0.815、0.794、0.773及0.910。结论DR患者血清CHIT1、Ephrin-A1、MSTN水平升高,其与DR的发生发展有关,可能是导致T2DM患者发生DR的危险因素,且对DR患者视力残疾有一定参考价值。

云南大理白族地区乳腺癌EphA2和EphrinA1的表达及其意义

目的:研究云南白族地区乳腺癌EphA2、Ephrin A1的蛋白和mRNA的表达及其意义。方法:选取大理大学附属医院2012～2015年乳腺癌组织石蜡标本150例,用免疫组织化学和原位杂交方法分别针对乳腺癌组织中EphA2、Ephrin A1的蛋白及mRNA表达进行检测,分析各自蛋白和mRNA的表达与临床病理因素的关系及它们之间的相关性。结果:EphA2、Ephrin A1的蛋白和mRNA主要表达于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞质和胞膜。EphA2、Ephrin A1蛋白阳性率分别为82%和86%;mRNA阳性率分别为60.67%和65.33%。EphA2、Ephrin A1的蛋白和mRNA在乳腺癌的阳性率与病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期和组织学分级相关。浸润性导管癌EphA2和Ephrin A1的蛋白及mRNA的阳性率较导管内癌高;肿瘤较大组、淋巴结转移组、临床分期较晚者、组织学分级较高组EphA2、Ephrin A1的蛋白及mRNA的阳性率分别高于肿瘤较小组、无淋巴结转移组、临床分期较早者、组织学分级较低组的。EphA2、Ephrin A1蛋白阳性染色共同定位于大致相同的肿瘤区域和血管内皮细胞,两者的阳性率有相关性;EphA2、Ephrin A1 mRNA的表达具有与蛋白表达类似的特征,两者的阳性率也有相关性。乳腺癌中EphA2、Ephrin A1各自蛋白与其相应mRNA的阳性表达相关,但表达水平不完全一致。结论:乳腺癌中EphA2、Ephrin A1的蛋白及mRNA高表达,并与其发生发展、侵袭转移及恶性程度有关,有望作为乳腺癌早期诊断及预后判断的标志物,作为基因治疗新靶向。

微小RNA-200c靶向抑制EFNA1基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-200c靶向抑制肝配蛋白A1(EFNA1)基因对胃癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法选取胃癌细胞株SGC7901,随机分为miR-200c模拟物组、模拟物对照组、miR-200c抑制物组、抑制物对照组,分别转染miR-200c模拟物、模拟物对照寡核苷酸、miR-200c抑制物、抑制物对照寡核苷酸,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭。采用双荧光素酶实验验证miR-200c对EFNA1基因的靶向抑制作用。取本院手术切除的胃癌和相应癌旁组织标本48例份,通过免疫组化法检测EFNA1蛋白表达,分析胃癌组织中EFNA1蛋白表达与患者性别、年龄、吸烟、饮酒、病理类型、浸润深度、淋巴结及远处转移、肿瘤部位间的关系。结果与模拟物对照组相比,miR-200c模拟物组胃癌细胞SGC7901增殖活性降低(P<0.05),总凋亡率升高(P<0.05),侵袭能力降低(P<0.05)。miR-200c模拟物组的荧光素酶活性低于模拟物对照组(P<0.05),而miR-200c抑制物组的荧光素酶活性高于抑制物对照组(P<0.05)。EFNA1蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁组织,其高表达与胃癌淋巴结转移有关(P<0.05),与其他临床病理特征均不相关(P均>0.05)。结论胃癌组织中EFNA1基因呈高表达,miR-200c可通过靶向EFNA1基因抑制胃癌细胞增殖及侵袭,促进凋亡。

分泌EphrinAl-Caspase-3的T淋巴细胞对裸鼠乳腺癌组织生长的抑制作用

目的探讨分泌Ephrin Al-Caspase-3的T淋巴细胞体内移植对癌细胞的抑制作用。方法将裸鼠(n=35)接种乳腺癌细胞,构建裸鼠乳腺癌模型。待肿瘤体积达到0.1 cm3大小,选取30只具有平均大小瘤组织的裸鼠随机分为PBS组、未感染腺病毒组、感染Ad-EphrinA1-Caspase-3的T淋巴细胞组,经瘤内移植,每隔2~3 d测量肿瘤大小。另选取3组荷瘤裸鼠,经上述细胞移植后,每隔2~3 d获取裸鼠皮下肿瘤组织匀浆,ELISA检测Ephrin A1-Caspase-3的含量。实验结束后各组动物断颈处死剥离肿瘤制成切片,在荧光显微镜下观察表达绿色荧光蛋白的T淋巴细胞,免疫荧光法进行Caspase-3、Ki-67的检测。结果乳腺癌细胞接种裸鼠1周后可用手摸到皮下肿瘤,证明乳腺癌细胞荷瘤动物模型制做成功。接种后第8天各组裸鼠肿瘤体积差异变大,治疗组与PBS组/T淋巴细胞组相比差异极显著(P<0.05)。单纯T淋巴细胞移植组肿瘤体积虽较PBS对照组生长缓慢,但两者间并无明显统计学差异。Ephrin A1-Caspase-3治疗组第2天可以检测出Ephrin A1-Caspase-3的表达,第8天达到高峰,随后分泌量逐渐降低。PBS对照组和T淋巴细胞组未检测到Ephrin A1-Caspase-3的表达。在治疗组肿瘤组织中观察到分散的绿色荧光蛋白标记的Ephrin Al-Caspase-3-T淋巴细胞,而在PBS组和T淋巴细胞组中未检测到绿色荧光蛋白的存在。治疗组感染细胞中,Caspase-3阳性细胞比例上调,Ki-67阳性细胞比例下调。在PBS组和T淋巴细胞组未检测到Ephrin Al-Caspase-3的表达。结论Ephrin Al-Caspase-3可显著抑制乳腺癌细胞的生长,发挥抗肿瘤效应。

胰腺癌患者的血清Exo-EphA2、CPA1和CA19-9表达及其临床意义

目的探究胰腺癌患者血清外泌体Ephrin A型受体2(Exo-EphA2)、羧肽酶A1(CPA1)和CA19-9的表达水平及其在胰腺癌诊断中的应用价值。方法选择2018年1月至2020年1月吉首大学第一附属医院收治的82例胰腺癌患者作为研究对象,并选择同期该院的60名健康体检者设为对照组,收集所有入组者的临床资料。采用ELISA法检测血清Exo-EphA2、CPA1和CA19-9的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。采用Pearson相关系数法分析血清ExoEphA2、CPA1和CA19-9表达水平的相关性。采用单因素和多因素logistic回归法分析胰腺癌发生的危险因素。采用ROC曲线评估血清Exo-EphA2、CPA1、CA19-9单独及联合检测诊断胰腺癌的效能。结果与对照组相比,胰腺癌组血清ExoEphA2、CPA1和CA19-9的表达水平均较高,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。低分化、Ⅲ~Ⅳ期和有远处转移的胰腺癌患者的血清Exo-EphA2、CPA1和CA19-9表达水平分别高于高/中分化、Ⅰ~Ⅱ期和无远处转移者,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,血清Exo-EphA2表达水平与血清CPA1、CA19-9表达水平均呈显著正相关(r=0.572,P=0.000;r=0.610,P=0.000),血清CPA1表达水平与血清CA19-9表达水平呈显著正相关(r=0.503,P=0.000)。血清Exo-EphA2高表达、CPA1高表达、CA19-9高表达及糖尿病史是胰腺癌发生的独立危险因素。血清Exo-EphA2、CPA1和CA19-9单独及联合检测诊断胰腺癌的AUC分别为0.756(95%CI:0.721~0.836)、0.752(95%CI:0.714~0.811)、0.682(95%CI:0.634~0.732)和0.862(95%CI:0.822~0.889),联合检测的诊断效能显著高于单独检测(P均<0.05)。结论胰腺癌患者的血清Exo-EphA2、CPA1和CA19-9表达水平较高,联合检测具有较高的胰腺癌诊断价值。

EphA2及其配体在子宫内膜样腺癌中的表达及其与血管生成的关系

目的:探讨生促红素肝细胞受体A2(EphA2)及其配体ephrin-A1在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法:利用免疫组织化学法检测56例子宫内膜样腺癌、20例子宫内膜增生过长、30例正常子宫内膜增殖期和30例分泌期组织中EphA2、ephrin-A1、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达,并采用CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。分析EphA2和ephrin-A1的表达与MVD之间的相关性及其与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系。结果:子宫内膜样腺癌组织中EphA2和ephrin-A1的表达显著高于子宫内膜样增生过长及正常子宫内膜(P<0.05);EphA2和ephrin-A1表达水平及MVD值与子宫内膜样腺癌FIGO分期、肿瘤分化程度、肌层浸润深度、淋巴微血管浸润和孕激素受体表达有关(P<0.05);Spearman等级相关分析表明EphA2和ephrin-A1表达分别与MVD呈显著正相关(r=0.476,P<0.05;r=0.501,P<0.05)。结论:EphA2及其配体ephrin-A1在子宫内膜样腺癌中高表达,可能参与了肿瘤血管生成和孕激素抵抗。

宫颈癌组织Ephrin A1的表达及其临床意义

目的:探讨Ephrin A1在宫颈癌中的表达意义及其与宫颈癌缺氧微环境、血管形成的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测65例宫颈癌组织、73例宫颈上皮内瘤样变组织和49例正常宫颈组织中Ephrin A1、EphA1受体、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达及微血管密度(MVD),并分析宫颈癌临床病理参数和缺氧状态间的关系。结果:Eph A1在宫颈各种组织中的阳性表达率无显著性差异(P>0.05),而宫颈上皮内瘤样变、宫颈癌组织中Ephrin A1的表达明显高于正常宫颈(P<0.05),但Ephrin A1的表达在宫颈上皮内瘤样变、宫颈癌组织中无明显差异(P>0.05)。且Ephrin A1的表达与宫颈癌临床分期呈正相关(P<0.05),与组织学类型、淋巴结转移、病理分级及年龄无关(P>0.05)。在宫颈癌组织中,Eph A1的表达与HIF-1α的表达及MVD无关(r=-0.152、P=0.227,r=0.061,P=0.628),而Ephrin A1与HIF-1α的表达及MVD正相关(r=0.487,P=0.000;r=0.541,P=0.000)。结论:Eph A1在宫颈组织中的表达是稳定的,而宫颈癌发生过程中HIF-1α的高表达可能是通过刺激Ephrin A1表达而促进宫颈癌的血管形成。

肾积水模型小鼠肾组织中EphrinA1、血管内皮生长因子、miRNA-210的表达

目的研究肾积水(UUO)模型小鼠肾组织中Ephrin A1、血管内皮生长因子(VEGF)、miRNA-210表达的差异性及相关性,了解三者在小鼠肾组织损伤发生的调控机制。方法40只小鼠随机分为急性肾积水组(UUO组)和假手术对照组(NC组),其中UUO组随机分为四个亚组(UUO2 d组、UUO 5 d组、UUO 9 d组和UUO 14 d组),五组各8只小鼠。UUO组采用单侧输尿管结扎建立小鼠肾积水模型。HE染色观察肾组织病理形态学变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Ephrin A1、VEGF及miRNA-210的表达;Western blot检测Ephrin A1和VEGF蛋白的表达。结果NC组未显示肾积水,UUO组显示小鼠肾积水及炎症细胞浸润。与NC组相比,UUO 2、5 d组小鼠Ephrin A1mRNA、VEGF mRNA及miRNA-210的表达上调(P<0.05);随着肾积水时间的延长,9、14 d组Ephrin A1 mRNA、VEGF mRNA及miRNA-210的表达较2、5 d组均下调,在14 d时达到最低点(P<0.05);Western blot检测发现,与NC组相比,UUO 2、5 d组小鼠肾组织Ephrin A1、VEGF蛋白表达增加(P<0.05)。结论UUO小鼠模型验证了miRNA-210参与了肾积水过程,Ephrin A1、VEGF、miRNA-210表达的一致性说明了三者在UUO的发生与发展过程中发挥重要作用。

ephrin A1基因在附植后期猪繁殖组织表达变化及与表观性状的关联分析

本研究旨在明确促红细胞生成素产生肝细胞配体A1(ephrin A1)在猪附植后期的mRNA和蛋白表达规律,分析高胚胎数母猪和低胚胎数母猪之间表达差异,以及这些差异与繁殖性状的关系。选择妊娠第22天和24天(附植后期)母猪,屠宰后采集6种繁殖组织样,利用Real-time定量PCR(qPCR)和免疫印迹方法检测这些组织样品中ephrin A1基因的mRNA和蛋白表达量,并将基因表达量与繁殖性状进行关联分析。妊娠第22天,高胚猪和低胚猪的黄体数和总胚胎数均差异显著(P<0.05)。Real-time qPCR结果显示:妊娠第22天,子宫内膜附植点的表达量显著高于尿囊绒毛膜或胚胎(P<0.05),高胚猪的胚胎表达量小于低胚猪(P<0.05);妊娠第24天,ephrin A1在组织中的mRNA表达量由高到低依次为:子宫内膜附植点、子宫内膜附植点间、子宫颈、卵巢黄体和胚胎;妊娠第22天或24天,妊娠猪ephrin A1的mRNA表达量均高于空怀猪(P<0.05)。Western blot结果显示,妊娠第24天,ephrin A1蛋白在子宫内膜附植点的表达量最高,其次为子宫内膜附植点间和卵巢黄体(P<0.05)。ephrin A1的表达与胚胎长度呈正相关,相关系数为0.31~0.59;相较于胚胎重、总胚胎数、正常胚胎数和卵巢重性状,ephrin A1表达与胚胎长度之间出现最高相关系数。研究结果表明,ephrin A1表达在猪附植后期的调控过程中可能发挥重要作用,子宫内膜附着位点可能是ephrin A1基因表达的主要靶组织,ephrin A1的表达量增加可能与胚胎生长(长度和重量)和卵巢重量增加有关。