HaCaT表皮模型作为皮肤刺激性体外替代实验的可行性研究

目的采用人永生化上皮角质形成细胞系HaCaT构建表皮模型,探讨其作为皮肤刺激性替代实验的可行性。方法取HaCaT细胞采用气-液面培养的方式构建表皮模型,同法以采用人原代上皮角质形成细胞构建的表皮模型EpiKutis~?作为对照。HE染色观察两种模型的组织形态;采用快速渗透实验方法检测两种模型屏障功能(ET_(50)值);取20种化学标准品分别于两种模型表面受试30 min,孵育42 h后MTT法测定组织相对活力百分比,判断化学品刺激性,并与联合国-化学品分类及标记全球协调制度(UN GHS)体内测试结果分类和经济合作与发展组织(OECD)TG439(2013版)中采用的体外替代方法(validated reference method,VRM)体外测试结果分类进行比较。结果 HE染色示,构建的HaCaT模型无完整复层化结构;屏障功能检测结果示,ET_(50)值为0.99 h;通过20种化学品检测,HaCaT模型的灵敏度为100%,特异性为50%,准确率为75%;EpiKutis~?模型灵敏度为100%,特异性为70%,准确率为85%。结论 HaCaT细胞构建的表皮模型不具备完整的表皮皮肤生理结构特征,屏障功能较低,化学品体外皮肤刺激性测试结果不能完全满足OECD关于刺激物的正确判定标准,不适宜作为化学品皮肤刺激性体外替代检测的工具。

含苯扎氯铵消毒液体内外皮肤刺激性的对比研究

目的 比较几种含苯扎氯铵消毒液对EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型和传统动物模型的皮肤刺激性实验结果。判断EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型是否适用于评定含苯扎氯铵消毒液皮肤刺激性。方法 参照国家食品药品监督管理局《药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》2014年版进行含苯扎氯铵消毒液皮肤刺激性实验,应用EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型检测含苯扎氯铵消毒液体外皮肤刺激性。结果 动物实验结果显示,完整皮肤组刺激性强度:苯扎氯铵D溶液>B溶液>A溶液>E溶液>C溶液;破损皮肤组:苯扎氯铵A溶液>B溶液>D溶液>E溶液>C溶液。消毒液刺激EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型实验结果显示,苯扎氯铵A溶液>D溶液>E溶液>B溶液>C溶液。结论 几种含苯扎氯铵消毒液在EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型与传统动物模型的皮肤刺激性实验结果基本一致,表明EpiKutis^(■) RHE表皮皮肤模型可以用于判断含苯扎氯铵消毒液的皮肤刺激性。