间接ELISA法用于流行性出血热(EHF)病毒IgG抗体的检测

本文报告应用间接ELISA法检测60份经IFAT检测确诊的EHF病人血清,结果全部阳性;检测21份临床诊断的病人血清(IFAT均阴性),有5份阳性(23.8％);检测17份其它病人血清和40份正常人血清均为阴性。经ELISA抑制和阻断试验证实本法是特异的,比IFAT法有更高的敏感性,可推广应用于流行病学监测和临床诊断。

猪流行性腹泻病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立检测猪血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)IgG抗体的间接ELISA方法,以PEDV重组N蛋白和纯化全病毒为包被抗原,采用方阵滴定法优化反应条件,建立了2种检测猪血清中PEDV IgG抗体的间接ELISA方法。结果显示,纯化全病毒和重组N蛋白抗原的最佳包被浓度分别为1.00和4.92μg/mL,检测样品最佳稀释度分别为1∶100和1∶50,重复性试验的变异系数均小于10%,PEDV阳性血清的最低检测稀释倍数分别为1∶1 600和1∶800,对猪传染性胃肠炎病毒、猪伪狂犬病毒等阳性血清均无交叉反应性,2种方法对临床样品检测符合率为95.92%。这表明2种方法均具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于检测和评价血清中特异性PEDV IgG抗体。

改良抗体捕获ELISA方法检测流行性出血热特异性IgE、IgA、IgG抗体的初步研究

初步报道建立了一种检测流行性出血热(EHF)特异性IgE、IgA、IgG抗体的改良抗体捕获ELISA方法(EacELISA,AacELISA,GacELISA)。该法以抗人IgE、IgA或IgG单克隆抗体作包被抗体;酶标记物系两株组特异性较强的EHF·McAb(A_(35),A_(25-1)株);在实验中采用EHF病毒抗原与酶标记物混合后一次加入,而不是分别依次加入的方式,使操作步骤简化,实验时间缩短,又适当提高了试验敏感性。该法具有简便,特异性高,灵敏度较高(检测EHF·IgE,EHF·IgA>1:100;EHF·IgG>1:2560),重复性较好(CV:EHF·IgE 2.51％,EHF·IgA 11.80％,EHF·IgG 10.85％)等优点。检测39份EHF病人血清,急性期病人(3～7病日)血清三种抗体的检出率分别为84.21％(16/19,EHF·IgG),89.47％(17/19,EHF·IgA)和100％(19/19,EHF·IgG);而发病3～6月后患者血清三种抗体检出率分别为10.00％(2/20),45.00％(9/20)和100.00％。在急性期与恢复期病人之间,EHF·IgE和EHF·IgA两种抗体的检出率差异较显著(P<0.01)。70价其他人群血清三种抗体检出率均为阴性。

应用抗体捕捉ELISA法检测流行性出血热患者血浆特异性IgE抗体

本文应用抗体捕捉ELISA法检测了流行性出血热患者血浆中特异性IgE抗体。结果表明,部分EHF患者在各病日、各病期均可检出特异性IgE抗体。133例EHF患者中有113例患者血浆特异性IgE抗体阳性,阳性率为85%。特异性IgE抗体可能与EHF发病机理有关。

流行性出血热病毒单克隆抗体的制备及其IgM捕获ELISA的建立

用灭活的流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ） 免疫小鼠获得４ 株能分泌ＥＨＦＶ 特异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ） 的杂交瘤细胞．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明４ 株ＭｃＡｂ 能专一地识别ＥＨＦ 病毒的分子量为５６ｋＤ的囊膜糖蛋白Ｇ２ ．交叉实验结果表明４ 株ＭｃＡｂ 与野鼠型病毒株７６１１８ 和家鼠型病毒株Ｌ９９ ，Ｒ２２ 等均有反应，而与流感病毒、轮状病毒等均无交叉反应，表明４ 株ＭｃＡｂ 具有较高的特异性．用６Ｂ１１ ＭｃＡｂ 组建ＩｇＭ 抗体捕获ＥＬＩＳＡ 试剂盒，试测临床标本．２５ 例临床确诊ＥＨＦ病人血清中特异性ＩｇＭ 抗体全部阳性．７０ 例正常献血员血清全部阴性．ＥＬＩＳＡ 试验方法简单，敏感性好，可建立试剂盒应用于临床．

EHF患者特异性IgG动态变化及其与病型的关系

用间接免疫荧光法对32例流行性出血热(EHF)患者病程中血清特异性IgG(SIgG)抗体变化作了动态检测,分析了SIgG的变化与病型的关系。结果表明,SIgG可于第3病日检出,此后其阳性率和滴度随病日的延长而增高,至第11～12病日,阳性率达100%,滴度趋于稳定的高水平。不同病型EHF有不同的SIgG反应,于第7～8病日,不同病型的SIgG滴度出现显著差异(F=4.004,P<0.05)。提示SIgG在EHF的免疫病理损伤中起一定作用。

间接法ELISA检测流行性出血热抗体

用间接法ELISA检测流行性出血热IgG抗体。54份EHF病人血清全部阳性,32份正常人、19份发热病人和18份误诊为EHF病人的血清全部阴性,与IFA检测结果相同。检测EHF病人系列血清,发病3d就可检出抗EHF IgG,抗体滴度随病程升高,表明间接法ELISA可用于EHF临床诊断。将间接法ELISA与IFA、RPHI和HI平行检测30份EHF病人血清,抗体几何平均滴度(GMT)分别为1:43 211、1:413、1:253和1:143,有高度相关性,且ELISA比RPHI和HI更能检测出早期抗体。检测疫区人群血清4134份,间接法ELISA检出490份阳性,而IFA仅检出470份。结果表明间接法ELISA有较好的敏感度和特异度,尤其适用于血清流行病学研究。

免疫荧光法检测流行性出血热IgG的应用

报道免疫荧光法检测流行性出血热IgG在临床的应用。结果:临床诊断为出血热621例、可疑出血热118例、发热待查25例、肾脏疾患7例,其IgG阳性数分别是511例(阳性率82.28％)、59例(50.00％)、9例(36.00％)及5例(71.42％);患者男多于女,好发于21～40岁,幼儿亦有感染;发病5天内即可检出抗体,且随病日延长抗体滴度相应升高,至发病第11～15天抗体滴度≥1/640者占44.61％,第16～20天增到60.00％,本方法简单易行,且符合率较高,可作为早期诊断的依据之一。

EHF患者血清特异性IgG的动态观察及其与病情的关系

采用ELISA间接法对流行性出血热病程中及病后180天血清特异性IgG抗体的消长情况进行了系统的动态观察,并按病情轻重进行了对比分折。特异性抗体IgG在病后1～5天即出现,第20天下降,病后180天仍维持在一定水平。重型患者抗体水平高于轻、中型患者(P<0.01)。提示这种特异性抗体反应可能与病情的严重程度有关。

用单克隆抗体分析流行性出血热病毒的核蛋白抗原位点

17株针对流行性出血热病毒(EHFV)L99株和C4株核蛋白(50kd)的单克隆抗体(McAb),根据抗原性分析可分为组特异性、型特异性(野鼠型或家鼠型),以及反应谱不全的亚组特异性McAb。这表明,在EHFV核蛋白上不仅有组特异性抗原决定簇,而且有型特异性抗原决定簇,采用竞争性酶联免疫吸附试验,以亲和层析纯化的核蛋白傲为抗原,用这些McAb分析L99株和C4株核蛋白的抗原位点,在两株病毒核蛋白上各发现了至少7个共有的位点,3个野鼠型和两个家鼠型病毒特有的位点,组特异性抗原位点至少分布在两个独立的区域,其构象和分布在不同毒株表现不尽相同,无论野鼠型或家鼠型病毒,其型特异性抗原位点均较集中在一个独立区域内。

MacEUSA和IFA对EHF病人血清SIgM的动态检测

用IgM抗体捕获法ELISA(MacELISA)和间接免疫荧光法(IFA)同时检测32例流行性出血热(EHF)病人血清特异性lgM抗体(SIgM)的动态反应。二法检出SIgM的总符合率为99.46%,所测抗体滴度的动态反应曲线基本平行,而MacELISA所测抗体滴度比IFA明显提高。早期EHF病人血清即有较高滴度的SIgM抗体,9病日～10病日达高峰,此后趋于下降。IFA法所测不同病日的SIgM滴度无显著差异(F=1.680,P>0.05),而MacELISA则有显著差异(F′=2.978,P<0.05)。二法所测不同病型EHF的SIgM滴度在病日相同时各型间皆无显著差异(P>0.05)。

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验检测肾综合征出血热病毒抗原和抗体

应用病毒感染细胞酶联免疫吸附试验(VIC-ELISA)检测肾综合征出血热病毒(HFRSV)感染性滴度比双抗体间接ELISA和间接免疫荧光法(IFA)分别敏感10倍和100倍。VIC-ELISA检测兔抗HFRSV抗体的滴度比双抗体间接夹心ELISA和IFA分别敏感1.6倍和8倍。VIC-ELISA能敏感、快速、有效地检测HFRSV抗原和抗体。

新疆部分地区三种重要牛羊虫媒病毒病流行情况调查

本研究采用酶联免疫吸附实验(ELISA)的方法,对新疆四个地区(哈密地区、昌吉地区、伊犁地区和和田地区)的106份牛、羊血样分别进行了蓝舌病(BT)、牛流行热(BEF)和鹿流行性出血热(EHD)的抗体检测。结果显示蓝舌病(BT)抗体仅在哈密地区血样中检出,其中牛检出率为12.90%,羊检出率为60%;牛流行热(BEF)抗体在哈密、伊犁和和田地区的牛血清样本中检出率均为100%,昌吉地区检出率为55%;鹿流行性出血热(EHD)抗体仅在哈密地区羊血清样本中检出,检出率为20%。哈密地区的牛血清样本中同时检出BEFV和BTV两种病毒的为12.9%,羊血清样本中同时检出BTV和EHDV两种病毒的为20%;以上结果说明在新疆地区有蓝舌病、牛流行热和鹿流行性出血热的流行,并且存在多种虫媒病混合感染的情况,应在实际检测、防疫工作中加以注意。

流行性出血热IgM抗体实验室检测结果分析

目的探讨IgM抗体实验室检测结果对流行性出血热患者诊治和防治的意义。方法选取我院2017年7月~2019年6月出血热患者180例,对血清标本进行流行性出血热IgM抗体酶联免疫吸附试验(ELISA),并对此试验的特异性、灵敏度、阴阳性预测值及有效率分析。结果流行性出血热抗体阳性患者56例,阳性率31.11%。此次研究ELISA试验检测流行性出血热IGM抗体的特异性、灵敏度、诊断有效率分别是99.17%、91.67%和96.67%。结论酶联免疫吸附试验(ELISA)检测流行性出血热IgM抗体,实验简单快速,灵敏度高,特异性较强,可为临床早期流行性出血热的诊断提供依据。

采用间接免疫荧光法监测流行性出血热疫苗接种3年后的人群抗体水平

目的 :研究接种疫苗 3年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法 :采用间接免疫荧光法测定特异性IgG抗体 ,并对 2 6 6例血清样本进行分析。结果 :全程接种与未加强者抗体阳性率分别为 70 6 3% ,5 9 79% ,并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论 :全程接种疫苗 3年后人群抗体保持较高水平 ,加强接种后免疫效果更佳。

克里米亚刚果出血热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

目的原核表达并纯化克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)M基因编码的包膜糖蛋白片段Gn1和Gc1,以两段目的蛋白为包被抗原分别建立检测CCHFV抗体的间接ELISA方法。方法 PCR扩增CCHFV M基因的抗原保守区胞外域Gn1和Gc1基因片段,分别克隆至pET-30a(+)载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3),并对不同诱导条件(温度、IPTG浓度、时间)进行优化,使用His-Ni柱纯化目的蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,分别以纯化的Gn1和Gc1蛋白作为包被抗原建立抗体ELISA检测方法。结果表达并纯化了CCHFV糖蛋白片段Gn1、Gc1,分子质量分别为35 ku和23 ku;Western blot检测两种重组蛋白均能被抗Gn1,Gc1抗体识别。以纯化蛋白为抗原建立的间接ELISA方法检测已知阳性血清CCHFV抗体滴度为1∶10 240,检测RVFV、WNV、JEV感染者血清均阴性,变异系数<8%。结论表达纯化的Gn1和Gc1蛋白纯度均在90%以上,两种蛋白均表现出良好的免疫原性,以两种蛋白为包被抗原建立的抗体间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性。重组蛋白的制备为克里米亚刚果出血热疫苗免疫效果评价、疫病监测和新型疫苗研发奠定了基础。