缺氧/放射活化Epo/e9增强子调控Layilin siRNA表达以抑制人肺腺癌A549细胞侵袭的研究

背景与目的:Layilin是一种新发现与肺腺癌侵袭转移有密切联系的特异性透明质酸受体。本研究旨在观察缺氧/放射条件下活化缺氧/放射双敏感性增强子(Epo/e9),调控针对layilin的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达,探讨其对人肺腺癌A549细胞受透明质酸诱导侵袭的影响。方法:构建携带Epo/e9增强子和U6启动子且表达针对layilin的siRNA的RNA干扰载体(Epoo/e9-siLay plasmid)和阴性对照RNA干扰载体(Epo/e9-siCtrl plasmid),分别转染A549细胞,新霉素抗性筛选得到layilin表达受抑制的A549_(Epo/e9-siLay)细胞和layilin表达未受影响的A549_(Epo/e9-siCtrl)细胞。针对非转染A549(A549_(untransfected))、A549_(Epo/e9siLay)、A549_(Epo/e9-siCtrl)三组细胞,在缺氧/放射处理下,分别采用RT-PCR和和Western blot检测layilin mRNA和和蛋白表达,用Transwell模型检测细胞侵袭能力。结果:与A549_(untransfected)组相比,A549_(Epo/e9-siLay)组layilin表达显著减弱(P<0.01),Transwell穿膜细胞数显著减少(P<0.01);A549_(Epo/e9-siCtrl)组layilin表达、Transwell穿膜细胞数皆和A549_(untransfected)组无显著差异(P>0.05)。缺氧/放射处理能进一步增加和RNA干扰的上述效应(P<0.01)。结论:在缺氧/放射条件下,Epo/e9增强子调控layilin siRNA表达能明显抑制A549细胞侵袭行为。