epoxomicin可诱发前列腺癌细胞内质网应激蛋白GADD153促进细胞凋亡

目的探讨蛋白酶体抑制剂(epoxomicin,EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡及其与GADD153/CHOP的关系。方法不同浓度的EPO处理DU145不同时间,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率情况;Real-time PCR检测内质网应激的相关分子GADD153、GRP78 mRNA以及Western blot方法检测GADD153、GRP78蛋白表达情况;转染GADD153siRNA从而沉默基因GADD153,通过基因转录水平及蛋白水平检测GADD153证实转染是否成功;转染GADD153后,通过MTS法及流式细胞仪技术检测细胞增殖情况及凋亡情况。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并呈现剂量、时间依赖。处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后GADD153,GRP78基因转录水平随时间逐渐升高,72 h最为明显。GADD153、GRP78蛋白在EPO处理后不断增加,均在72 h增加到最高,且低剂量与高剂量组在72 h差异有统计学意义(P<0.05)。转染GADD153siRNA后,GADD153基因转录水平及蛋白表达水平明显降低,其中GADD153siRNA 50 nmol/L最为明显。沉默基因GADD153后,EPO处理DU145细胞,其细胞数目的减少部分被阻断,细胞凋亡部分被阻断。结论蛋白酶体抑制剂epoxomicin能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活内质网应激,诱发内质网的相关分子GADD153表达有关。

蛋白酶体抑制剂对前列腺癌细胞生长的影响及其与雄激素受体的关系

目的:研究蛋白酶体抑制剂epoxomicin(EPO)对前列腺癌细胞的影响及其与雄激素受体(AR)的关系。方法:采用MTS法检测不同浓度EPO在不同时间对前列腺癌细胞DU145及LAPC4的抑制作用以及沉默基因AR后对LAPC4细胞的抑制作用。转染AR沉默LAPC4细胞AR基因表达,实时荧光定量PCR检测细胞中AR m RNA的含量;Western-blot法检测细胞中AR蛋白表达的情况。结果:蛋白酶体抑制剂EPO对前列腺癌两组不同细胞系LAPC4及DU145的抑制作用呈现浓度依赖及时间依赖。LAPC4细胞沉默基因AR后发现AR m RNA及AR蛋白的表达均明显下降;但沉默AR基因后EPO对于LAPC4的细胞抑制作用并没有明显变化。结论:蛋白酶体抑制剂EPO对前列腺癌细胞株DU145及LAPC4细胞均具有抑制作用,且抑制作用并不受AR受体的影响。

蛋白酶体抑制剂通过内质网应激诱导DU145细胞凋亡机制的探讨

目的探讨蛋白酶体抑制剂(EPO)诱导前列腺癌DU145细胞凋亡机制是否与内质网应激(Er-stress)有关。方法用不同浓度的EPO处理DU145细胞,MTS检测细胞生长情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Er-stress相关分子同源蛋白质(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、X盒结合蛋白1(XBP-1)、剪接型X盒结合蛋白1信使核糖核酸(XBP-1s m RNA);Western blot检测CHOP和GRP78的表达。结果 EPO抑制DU145细胞生长,并且呈现浓度梯度依赖性,处理组细胞凋亡率高于未处理组,高剂量组凋亡率高于低剂量组。EPO处理后,CHOP、剪接型X盒结合蛋白1(XBP-1s)、GRP78 m RNA明显升高,72 h最明显。低剂量组与高剂量组48 h CHOP和XBP-1s的表达比较差异均有统计学意义,两组48和72 h GRP78比较差异均有统计学意义。EPO处理后,XBP-1和XBP-1s基因转录水平升高,而XBP-1s随处理时间增长基因转录水平变化不明显。EPO处理后,CHOP和GRP78不断增加,72 h两种蛋白质均达到最高值,并且低剂量组与高剂量组在72 h比较差异有统计学意义。结论 EPO能抑制DU145细胞生长,诱导凋亡,其机制可能与激活Er-stress,诱发内质网的相关分子CHOP、XBP-1s、XBP-1、GRP78的表达有关。

Carfilzomib:从天然产物到药物的研发历程

天然产物及其衍生物是药物的重要来源。Carfilzomib是一个以天然产物为先导通过结构优化得到的用于治疗多发性骨髓瘤的药物,其先导化合物Epoxomicin是从微生物中发现的具有抗癌活性的环氧酮肽类天然产物,能够选择性地抑制蛋白酶体,其环氧酮结构以独特的两步反应和蛋白酶体共价结合,因此克服了同类药物的脱靶缺点。以Epoxomicin为先导,通过结构优化得到活性更强、成药性性更好的Carfilzomib,作为新一代蛋白酶体抑制剂于2012年上市。