Epsilon-变形菌趋化信号通路中偶联蛋白CheV与趋化受体蛋白的CZB结构域的功能研究

细菌通过趋化系统感知和响应外界环境变化并进行趋利避害,因此很多细菌进化出了非常复杂多样的趋化系统以适应不同的生态位。Epsilon-变形菌广泛存在于自然界中,能适应不同的生态环境,特别是深海Epsilon-变形菌能适应深海热液口和冷泉等极端环境,其趋化系统可能有其独特之处。通过BlastP和MIST数据库分析,我们发现大部分深海Epsilon-变形菌拥有F3类型趋化系统且具有单拷贝的双功能域融合蛋白CheV。此外,一种特殊结构域CZB(C-terminal Zinc-Binding)存在于深海Epsilon-变形菌的趋化受体蛋白中,而且在部分深海Epsilon-变形菌的趋化受体中还发现并鉴定了一种新的结构域CZB-like结构域。文章以Epsilon-变形菌的模式菌株空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni 81-176)为研究对象,用细菌双杂交试验证实了CheV能与所有含MA结构域的趋化受体相互作用。用电感耦合等离子体质谱(ICP-Mass)技术证实了CZB-like结构域不能结合Zn离子,但细菌双杂交试验证实它能介导趋化受体Tlp9与CheV的互作。

2015—2021年CHINET临床分离变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌耐药性变迁

目的了解2015年1月1日—2021年12月31日CHINET耐药监测网变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌分布及耐药性变化。方法按CHINET统一方案进行药物敏感性试验。按CLSI M10031st 2021年版折点标准判断结果。结果7年间共监测收集到肠杆菌目摩根菌科细菌32433株,其中变形杆菌属24160株,摩根菌属6704株,普罗威登菌属1569株,细菌数量呈增长趋势。标本分布前三位依次为尿液、下呼吸道和伤口分泌物。三种菌属细菌对阿米卡星、美罗培南、头孢西丁、头孢吡肟、头孢哌酮-舒巴坦和哌拉西林-他唑巴坦的耐药率均较低,其中变形杆菌属和摩根菌属对受测试抗菌药物的耐药率大多<10%,普罗威登菌属的耐药率大多<20%。变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属中的碳青霉烯类耐药菌株检出率分别为1.4%、1.9%和15.6%。结论变形杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属临床分离菌株近年有明显增加趋势;这些菌株中碳青霉烯类耐药菌株的检出亦有明显增多。应加强关注,重视细菌耐药监测,合理用药,防止耐药细菌的发生和耐药率上升。

20味中药体外抑制奇异变形杆菌的研究

为探讨诃子、薄荷、黄连等20味中药提取物对犊牛腹泻粪便样本中分离鉴定的奇异变形杆菌的抑制效果。用水煮法分别提取中药有效成分,通过微量二倍稀释法分别测定各中药提取物对奇异变形杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),用棋盘法、时间杀菌-曲线绘制法测定中药提取物对奇异变形杆菌的联合抑菌效果。结果显示,诃子、薄荷、黄连、艾叶、金银花、知母、五倍子的抑菌效果明显,MIC值为3.9~62.5 mg/mL,MBC值为3.9~125 mg/mL;其中诃子与薄荷联用,表现协同作用;诃子和黄连、金银花、艾叶、五倍子联用,均表现相加作用;诃子和知母联用,表现无关作用。结果提示,诃子与不同中药组合能起到不同抑菌效果,为临床奇异变形杆菌引发的疾病治疗用药提供了参考。

浅析大黄鱼源变形假单胞菌的流行与防控

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是一类重要的鱼类条件致病菌,可感染多种海、淡水养殖鱼类。变形假单胞菌引起的内脏白点病是网箱养殖大黄鱼最重要的病害之一,在海水网箱养殖中,患病大黄鱼没有明显的外观症状,给疾病的诊断和防治工作带来了更大的挑战。从病原入侵大黄鱼的部位、发病症状、流行季节、发病地域、防治措施等方面综述变形假单胞菌的相关内容,并从养殖管理、药物防治和疫苗开发3个方面提出防治大黄鱼内脏白点病的策略,提出降低养殖密度、做好养殖管理是目前防治该病最主要的手段,期望为这一疾病的防治提供参考,推动大黄鱼养殖产业健康发展。

抑制变形杆菌的干酪乳杆菌LDJ主要抑菌物质分析

干酪乳杆菌LDJ是一株能抑制变形杆菌生长的优良菌株。为了探究干酪乳杆菌LDJ无细胞上清液的抑菌效果,采用牛津杯法测定了不同培养时间的无细胞上清液对变形杆菌的抑菌能力,发酵时间在0~4 h时无细胞上清液无抑菌能力,发酵至8 h时抑菌能力逐步上升,发酵时间在24~48 h时无细胞上清液抑菌能力趋于平稳;其中,发酵时间在36 h时,抑菌圈直径最大,为20.48 mm。干酪乳杆菌LDJ无细胞上清液中抑菌物质的理化特性研究结果表明:该抑菌物质对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌和李斯特菌都有不同程度的抑制作用;无细胞上清液经40~100℃处理30 min,仍有良好的抑菌活性;pH值在3~6范围内抑菌物质有良好的抑菌效果,在中性及碱性条件下则没有抑菌作用;不同酶处理对无细胞上清液的抑菌效果有不同程度的影响。因此,推测其抑菌有效成分可能为肽类及有机酸。

深海热液口Epsilon-变形菌的物种多样性与环境适应机理

Epsilon-变形菌是近年来宏基因组调查发现的深海极端环境如热液喷口富集的重要微生物类群,在海洋碳、氮、氢、硫循环中发挥重要作用。目前对这个纲的研究较少,主要来自于16S rRNA的分类鉴定以及深度测序拼接的基因组序列分析。本文总结了目前对Epsilon-变形菌纲的生态分布及多样性调查研究结果,并对深海热液喷口的Epsilon-变形菌的多种能量代谢方式、强大的趋化运动系统以及与底栖生物的共生关系进行了阐述。这些结果初步揭示了Epsilon-变形菌对深海极端环境的适应机制,并推动对这个极端环境富集的细菌分支的生物学特征认知与资源利用。

硒化甘草多糖联合抗生素对奇异变形杆菌体内外抑菌效果以及抑菌机制研究

试验旨在探究硒化甘草多糖(SeGUP)和甘草多糖(GUP)联合抗生素对奇异变形杆菌(PM)的体内外抑菌效果以及抑菌机制。体内外抑菌效果通过药敏试验、最小抑菌浓度(MIC)、生长曲线、体外协同作用以及SeGUP、GUP对PM感染小鼠的死亡率进行分析。抑菌机制通过PM细胞壁、细胞膜、生物膜、抗氧化酶活性的变化进行分析。结果显示,同浓度SeGUP比GUP抑菌圈大,MIC值小,对PM生长抑制更强;SeGUP与环丙沙星(CI)联合表现为协同,GUP与CI表现为相加;SeGUP能够极显著降低PM感染小鼠死亡率(P<0.01)。与对照组相比,SeGUP、GUP、CI可极显著升高培养液中碱性磷酸酶(AKP)、β-半乳糖苷酶(β-gal)的活性和蛋白含量(P<0.01),极显著降低菌体DNA含量,抑制生物膜形成,降低过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.01)。结果表明,SeGUP体内外抑菌效果以及抑菌机制能力均优于GUP。

三七总皂苷对大黄鱼抗变形假单胞菌感染能力的影响

为研究三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)对大黄鱼(Larimichthys crocea)抗变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)感染能力的影响,首先通过体外试验测定PNS对变形假单胞菌的抑制效果,然后将PNS溶液腹腔注射体质量为20~30 g的大黄鱼,3 d后用浓度为1.02×10^(9)CFU/L的变形假单胞菌浸泡感染2 h,并测定感染前后全脾和后肾组织中的相对含菌量及TNF-α等免疫相关因子的表达水平。结果表明:质量浓度为50、25 mg/mL的PNS体外抑菌效果显著(P<0.05);PNS注射给药的大黄鱼(PNS组)在变形假单胞菌感染后8 d时的存活率较生理盐水注射组(对照组)高18.46%(P>0.05);变形假单胞菌感染后第4、8天,PNS组大黄鱼脾、后肾组织中的相对含菌量略低于对照组(P>0.05);PNS组脾组织TNF-α蛋白表达水平在感染变形假单胞菌前后均显著低于对照组(P<0.05),但其mRNA转录水平在感染后显著高于对照组(P<0.05)。研究表明,PNS在体外对变形假单胞菌具有抑制效果,注射PNS能在一定程度上增强大黄鱼抗变形假单胞菌感染的能力,降低感染后脾和后肾组织中的菌量,调控TNF-α等炎症因子的表达,提高感染后的存活率。

大熊猫源奇异变形杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌多重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速鉴别检测大熊猫3种病原菌的多重PCR方法,本研究根据NCBI登录的奇异变形杆菌(PM)ureR基因、肺炎克雷伯菌(KPN)phoE基因、大肠杆菌(E.coli)phoA基因,设计3对引物,并对各反应条件优化,初步建立检测大熊猫源PM、KPN和E.coli的多重PCR方法。特异性结果显示,本研究建立的多重PCR方法对PM、KPN和E.coli能够分别扩增到308 bp、456 bp和666 bp的目的条带,而对大熊猫常见的其它20种病原菌均无扩增;敏感性试验结果显示,该方法对PM、KPN和E.coli DNA的检测限分别为2.8×10^(7)拷贝/μL(ureR)、3×10^(7)拷贝/μL(phoE)、6×10^(7)拷贝/μL(phoA)。利用本研究建立的多重PCR方法对100份大熊猫临床样品检测,结果显示:PM、KPN和E.coli的检出率分别为30%(30/100)、90%(90/100)和100%(100/100),均与研究报道的单一PCR检出率相同,对PM和KPN的检出率均高于传统病原分离方法(25%、83%)。本研究建立的大熊猫源PM、KPN、E.coli多重PCR检测方法特异性较强、敏感性较高,且可以同时检测3种病原,为大熊猫细菌性疾病的诊断提供了新的检测手段,极大缩短了检测时间,对临床防控相应细菌性疾病具有重要意义。

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)核酸适配体的SELEX筛选

变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)是大黄鱼内脏白点病的主要致病菌。核酸适配体,因其亲和力高、特异性好等多个优点,在微生物检测等多个领域都有较好的应用前景。以变形假单胞菌为靶目标,采用SELEX筛选方法,从高频序列中筛选获得了变形假单胞菌的5个核酸适配体,测定了这些核酸适配体对变形假单胞菌的亲和特异性及其亲和常数(K_(d))和最大亲和力(A_(m)),并对其二级结构进行了分析研究。结果表明,这5个核酸适配体对变形假单胞菌的亲和力是其他非目标菌(嗜水气单胞菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌、大肠杆菌、迟钝爱德华氏菌、铜绿假单胞菌)的10倍以上,体现出了较好的亲和特异性。测定了5个核酸适配体(#1、#2、#3、#4、#5)的K_(d)和A_(m),相应的K_(d)值分别为(25.77±6.11)、(7.14±1.86)、(19.59±3.01)、(83.22±22.45)、(34.31±8.76) nmol/L,A_(m)值分别为(789.23±38.46)、(1392.27±58.03)、(3012.50±106.19)、(1457.99±171.32)、(1070.91±70.16) nmol/L。二级结构模拟发现核酸适配体对靶标的结合能力可能主要与其二级结构中的大中型环有关。相关研究对于变形假单胞菌的快速检测及其病害防控都具有重要意义。

鸭源奇异变形杆菌和摩氏摩根菌的分离鉴定、NDM耐药基因检测及中药体外抑菌试验

[目的]确定引起广东省某鸭场鸭群发病的细菌性病原,调查分离菌株对抗菌药物的敏感性及NDM耐药基因携带情况,并筛选出针对分离菌株具有较好体外抑制作用的单味中药。[方法]采集发病鸭只的肝脏、脾脏等病料样本进行细菌分离培养,采用16S rDNA序列PCR扩增及测序比对方法确定分离菌株的种属,利用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌株对13种抗菌药物的敏感性,应用PCR法检测10种NDM耐药基因在分离菌株中的分布情况,采用肉汤二倍稀释法测定14种单味中药对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)。[结果]经革兰染色镜检、生化鉴定及16S rDNA序列分析,从发病鸭病料中分离、鉴定出1株奇异变形杆菌(SK1株)和1株摩氏摩根菌(SK2株)。SK1株和SK2株均对新霉素、头孢他啶、头孢噻肟、头孢哌酮敏感,对多西环素、复方新诺明、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B耐药。SK1株10种NDM耐药基因均未检出,SK2株携带blaNDM-1基因,其他9种NDM耐药基因未检出。博落回对SK1株的抑菌效果最好,MIC为3.906 mg/mL;连翘对SK2株的抑菌效果最好,MIC为3.906 mg/mL。[结论]引起该鸭场鸭群发病的主要病原菌为奇异变形杆菌和摩氏摩根菌,可使用新霉素、头孢菌素类抗菌药物及中药博落回、连翘对患病鸭只进行治疗。

大黄鱼变形假单胞菌外膜蛋白OMPH和OMPW的原核表达及其多克隆抗体制备

为获取变形假单胞菌外膜蛋白OMPH和OMPW的重组蛋白,研究克隆了ompH和ompW的基因序列,构建重组表达载体并转化宿主菌,成功实现了外膜蛋白的原核表达.结果显示,ompH和ompW基因全长分别为603和690bp,对应编码200和229个氨基酸;变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,OMPH和OMPW重组蛋白相对分子质量分别为25.0和28.5ku,通过Ni+亲和层析纯化后的重组蛋白条带单一.以纯化后的重组蛋白OMPH和OMPW分别免疫小鼠制备其多克隆抗体,酶联免疫吸附试验测得鼠源OMPH和OMPW多克隆抗体的效价分别为40000和50000;免疫印迹显示了抗血清与重组蛋白结合活性良好.

2005—2014年CHINET变形杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属、摩根菌属及普罗威登菌属细菌耐药性监测

目的了解国内主要地区临床分离变形杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属、摩根菌属及普罗威登菌属细菌对常用抗菌药物的敏感性和耐药性。方法对CHINET细菌耐药性监测网临床分离菌,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一方案进行药物敏感性试验。结果 2005—2014年分离出变形杆菌属、沙雷菌属、枸橼酸杆菌属、摩根菌属、普罗威登菌属共计21 663株。10年间,变形杆菌属细菌的检出率呈上升趋势:2005年为1.41%,2014年为2.09%;沙雷菌属细菌的检出率呈上升趋势:2005年为0.99%,2014年为1.28%;枸橼酸杆菌属、摩根菌属和普罗威登菌属细菌的检出率基本无变化。变形杆菌属对头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢他啶、头孢西丁、阿米卡星、替加环素耐药率低于10%。沙雷菌属对头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、阿米卡星、替加环素耐药率低于10%。枸橼酸杆菌属对头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、替加环素耐药率低于20%。摩根菌属对头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、阿米卡星、替加环素耐药率低于10%。普罗威登菌属对头孢哌酮-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、头孢西丁、替加环素耐药率低于20%。结论 10年中细菌耐药性仍呈增长趋势,严格采取有效的感控措施及合理用药是减缓耐药性增长的有效方法。

不同干扰方式对喀斯特生态系统土壤细菌优势类群—变形菌群落的影响

以喀斯特原生林为对照,运用16S rRNA基因的PCR-RFLP和测序技术对该区不同人为干扰方式下土壤细菌的群落结构进行了分析。结果显示,4个样地中变形菌占总克隆子数的41.3%,是研究区土壤中的优势细菌类群。与原生林地相比较,受人为干扰的生态系统土壤中变形菌明显减少,自然恢复地、农耕地和放牧+冬季火烧草地减少了30.2%～47.4%。自然恢复地、放牧+冬季火烧草地与原生林地土壤中变形菌的4个亚群丰度分布关系一致,均为α->δ->β->γ-变形菌,而农耕地则为δ->α->β->γ-变形菌,说明自然恢复和放牧+冬季火烧草地对喀斯特土壤变形菌的恢复作用有限,而对变形菌4个亚群之间的分布关系有明显的正效应,尤其是自然恢复地中α-变形菌得到了很好的恢复,较农耕地增加了130%。四个样地中,占总克隆子数16.5%的克隆子被归类为根瘤菌目,且以原生林地最多,是3个干扰样地的1.6～3.7倍。基于以上研究结果,未来可考虑种植本土固氮植物结合接种相应的固氮微生物作为恢复喀斯特退化生态系统的措施之一。

一种新的对虾病原菌(普通变形菌)

1989年9月青岛崂山区上马镇养虾场部分虾池中流行红腿病。自垂死病虾体内分离出多株细菌,其中二株经感染健康成虾得到与病虾相同症状,证明所分离菌是对虾红腿病病原菌。经 63项形态及生理生化特性鉴定为普通变形菌(Protetus oulgaris Hauser)。中国对虾养成期红腿病系由条件致病菌所致,其作用部位在对虾血淋巴并引起血淋巴混浊、变稀、凝固能力下降。该病的实质是由于细菌侵入对虾循环系统而导致的败血症。

变形菌属引发导尿管相关尿路感染的研究

目的 通过导尿管相关尿路感染 (UTIs)患者尿道口、导尿管生物被膜和尿液中分离的变形菌属的耐药性和同源性的研究 ,探索变形菌属引发UTIs的机制。方法 对 1999年 12月～ 2 0 0 1年 3月收集的 16 5例UTIs患者尿道口、导尿管和尿液标本变形菌属分离株 ,进行快速鉴定生物被膜 ,药敏实验和脉冲电场凝胶电泳 (PFGE)分析。结果 16 5例UTIs患者中尿道口、尿液和导尿管生物被膜中分别分离出变形菌属 32株 (19.4 % )、18株(10 9% )和 15株 (9.0 9% ) ;12例患者在尿道口、尿液和导尿管生物被膜中均分离到变形菌属 ,且药敏结果相似 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;PFGE结果显示 7例患者的 3部位变形菌属分离株分别为同一菌株或不同亚型菌株。结论 变形菌属生物被膜的形成和逆行感染是引发UTIs的原因。

变形菌多重耐药性与整合子相关性分析

目的了解变形菌多重耐药与敏感菌株中Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类整合子的分布情况,初步分析整合子与变形菌多重耐药(multidrug resistance,MDR)形成的关系。方法 PCR方法检测临床分离的50株MDR变形菌和同期分离的46株敏感菌中3类整合子的分布情况,并扩增可变区,以了解基因盒的存在情况。用SPSS17.0软件分析实验数据。结果 MDR菌株和敏感菌株中整合子的携带率分别为26.0%(13/50)和2.2%(1/46);耐药种数在5种以上的菌株中整合子检出率为44.4%(8/18),5种以下的为15.6%(5/32)。结论 MDR菌株的整合子携带率高于敏感菌株,且耐药种数越多的菌株中整合子的检出率越高,整合子与变形菌多重耐药的产生有一定的相关性。

葡萄籽和苹果原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌的抑制作用

研究苹果原花青素和葡萄籽原花青素对变形链球菌(Streptococcus mutans)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的抑制作用,采用试管液体稀释法和琼脂稀释法抑菌实验测定其最低抑菌质量浓度(MIC)和质量最低杀菌质量浓度(MBC),并通过测定培养基pH值的变化,研究葡萄籽原花青素对变形链球菌产酸能力的影响。结果表明:苹果原花青素、葡萄籽原花青素对变形链球菌和金黄色葡萄球菌生长都有抑制作用;苹果原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.25、4.00mg/mL,葡萄籽原花青素对变形链球菌的MIC和MBC分别为1.75、2.00mg/mL;苹果原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为4.00、9.00mg/mL,葡萄籽原花青素对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为2.00、6.50mg/mL。葡萄籽原花青素质量浓度大于1.00mg/mL对变形链球菌的产酸能力有显著抑制效果。

蜂胶对变形链球菌的抑菌及粘附抑制实验

目的 测定蜂胶对变形链球菌的抑菌及粘附抑制作用效果 ,以探讨蜂胶防龋的机制。方法 ①用不同浓度的蜂胶溶液 ,采用杯碟法检测蜂胶溶液抑菌活性 ,并测出其最小抑菌浓度 ;②用 0 .0 4 %、0 .0 1 %蜂胶溶液采用毛细管法检测蜂胶对变形链球菌粘附抑制效果 ,设置空白对照及 2 %氟化钠阳性对照。结果 ①蜂胶溶液对变形链球菌有较强的抑菌作用 ,最小抑菌浓度为 0 .0 2 5 % ;② 0 .0 4 %、0 .0 1 %两个浓度的蜂胶溶液对变形链球菌的粘附抑制作用明显高于对照组。结论 蜂胶对变形链球菌有明显的抑菌及抑制变形链球菌粘附作用 。

云南4处酸性热泉中的变形菌门细菌多样性

选择云南腾冲和龙陵地区的4处酸性热泉（pH：2．3—6．0，温度：47～96℃），通过Barcoded pyrosequencing技术及统计学分析，详细阐述了这些样点中变形菌门的物种和遗传多样性。本研究共获得了2489条变形菌门16SrRNA基因序列，可划分为234个可操作分类单元（OTUs）。分类结果显示，热泉内涵盖了大量已知的目、科和属。而41％的OTUs可能代表了变形菌门的未知物种。系统发育分析显示，样点中存在着若干全新遗传类群，这些样点和美国黄石地区的热泉各自呈现不同的变形菌门遗传多样性。此外，本次调查的热泉彼此间存在着变形菌门群落结构的显著差异。