头颈肿瘤组织中Epstein-Barr病毒编码的RNAs原位杂交检测

采用地高辛标记的 Epstein-Barr(EB)病毒编码的 RNAs(EBERs)检测了127例头颈肿瘤组织标本。结果显示35例低分化鼻咽癌 EBERs 阳性检出率为94%,5例高分化鼻咽癌组织中2例 EBERs阳性,3例未分化鼻咽癌中2例 EBERs 阳性,证明 EBV 不仅与低分化和未分化鼻咽癌有关,也与高分化鼻咽癌有关。在慢性鼻咽炎及声带息肉的上皮细胞中未能检测到 EBERs。检测的69例其他头颈恶性肿瘤组织标本中有35例存在 EBERs,阳性率为51%,其中喉癌、下咽癌和恶性淋巴瘤组织中 EBERs 阳性率比其他头颈肿瘤高,分别为65%,42%和47%。研究证明,EBV 不仅存在于鼻咽癌组织细胞中,也存在于其他头颈肿瘤组织中;EBV 不仅感染淋巴细胞,而且也能感染上皮细胞。

鼻咽癌细胞株中Epstein-Barr病毒编码的RNAs的检测

采用地高辛标记探针对高分化和低分化鼻咽癌细胞中由EB病毒编码的RNAs(Epstein-Barrvirus encoded RNA,EBERs)进行了检测。结果显示,在高分化鼻咽癌细胞株CNE-1和低分化鼻咽癌细胞株CNE-2,CNE-3细胞中均有EBERs,EBERs位于细胞核中,且含量丰富,用原位杂交技术检测EBERs可望作为鼻咽癌早期诊断工具。

定量和定位检测EB病毒在鼻咽癌组织中的感染状态

背景与目的EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)与鼻咽癌密切相关,但EBV是鼻咽癌的致瘤因素还是仅仅是伴随关系有待进一步研究,而且EBV在鼻咽癌发生过程中的潜伏状态也不明确,本研究通过检测EBV在不同鼻咽组织中的表达变化,为进一步阐明EBV与鼻咽癌发生的关系提供线索。方法应用荧光定量PCR(real-timePCR)技术定量检测47例鼻咽低分化鳞癌患者癌、癌旁及相对正常鼻咽粘膜组织中的平均EBV拷贝数;并采用原位杂交技术(地高辛标记的EBER-1探针)对鼻咽癌、癌旁、对侧正常鼻咽粘膜中的EBV进行定位检测。以10例正常人鼻咽粘膜组织作对照。结果正常人鼻咽粘膜EBV检出率为80%(8/10),平均拷贝数为6.7×102/滋gDNA;100%(47/47)鼻咽癌和癌旁组织以及72.3%(34/47)的对侧正常鼻咽粘膜组织检出EBV,平均拷贝数分别为6.9×105/滋gDNA、1.5×105/滋gDNA、9.8×103/滋gDNA。正常人鼻咽粘膜、鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜之间感染EBV的几率、潜伏感染EBV的数量没有显著性差异(P>0.05);鼻咽癌及其癌旁、对侧正常粘膜组织三者之间,鼻咽癌与癌旁组织之间,癌旁和对侧正常粘膜组织之间EBV拷贝数存在显著性差异(P<0.01)。EBER-1原位分子杂交发现,对侧正常粘膜上皮细胞未检测到EBER-1的表达信号,癌旁靠近癌一侧的部分不典型增生细胞检测到EBER-1弱阳性信号,而在癌组织中的所有癌细胞均有EBER-1强阳性信号。结论无论是鼻咽癌患者还是健康人,EBV在鼻咽组织中的潜伏感染是一种普遍现象,但从鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜到癌旁再到癌组织EBV感染的量发生了改变,说明鼻咽上皮细胞中EBV感染量和表达信号的改变很可能是EBV致鼻咽癌的重要环节。

Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

目的探讨Ig/TCR基因重排分析联合EBER原位杂交检测在原发性胃肠道淋巴瘤(gastrointestinal lymphomas,GIL)中的诊断价值。方法选取常规石蜡包埋的GIL病理标本35例(包括成熟B淋巴细胞肿瘤29例,成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤6例),淋巴结反应性增生病变10例,提取DNA,应用BIOMED-2引物系统进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析,并采用原位杂交方法检测EB病毒编码的小RNA(EBER)。结果 35例GIL中,共检测出34例克隆性重排。其中29例成熟B细胞淋巴瘤均扩增出Ig克隆性重排,敏感性为100%,且联合应用IgH与IgK引物Ig单克隆性重排的检出率最高;6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中5例扩增出TCR克隆性重排,敏感性为83.3%;10例淋巴结反应性增生病例均未检测到Ig及TCR克隆性重排条带,其检测特异性为100%。29例成熟B细胞淋巴瘤及10例淋巴结反应性增生组织经EBER原位杂交检测均为阴性,6例成熟T淋巴细胞和NK细胞肿瘤中2例EBER原位杂交检测阳性,且均为鼻型NK/T细胞淋巴瘤。结论 BIOMED-2标准化的基因重排分析系统检测石蜡包埋组织中Ig基因和TCR基因克隆性重排的敏感性和特异性均很高,对GIL的诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值,EBER原位杂交检测对基因克隆性重排阴性的淋巴瘤也具有一定的辅助诊断作用。

福建肝癌细胞EBV感染与HBV及P53蛋白表达的关系

目的探讨肝细胞癌（ＨＣＣ）中ＥＢＶ与ＨＢＶ感染的相关性及ＥＢＶ与Ｐ５３蛋白表达的关系．方法采用原位杂交技术以地高辛标记的单链ｃＤＮＡ探针、生物素标记的双链ｃＤＮＡ探针及免疫组化ＳＰ法检测ＨＣＣ５９例（含癌旁肝组织）和９例肝硬变组织中高拷贝数ＥＢＥＲ１（ＥＢＶ编码的小ＲＮＡ）、ＨＢＶＤＮＡ和Ｐ５３蛋白．结果肝癌细胞核内ＥＢＥＲ１阳性率为２０３％，显著高于癌旁肝组织（Ｐ＜００１）．肝癌组织内ＨＢＶＤＮＡ阳性率为５９３％，ＥＢＶ存在与ＨＢＶ感染无明显相关性（Ｐ＞００５）．肝癌组织内Ｐ５３蛋白表达率为３３９％，Ｐ５３表达与ＥＢＥＲ１无显著关系（Ｐ＞００５）．结论肝癌细胞内ＥＢＶ感染与ＨＢＶ存在无明显关系。

肠道淋巴瘤与EB病毒相关性研究

目的 :探讨EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)感染在肠道淋巴瘤发病中的意义。 方法 :采用EBV的DNA原位杂交及S P法免疫组化技术 (第一抗体为EBV、CD3、CD2 0、CD43、CD45、CD45RO、CD74等 ) ,观察 2 4例肠道淋巴瘤患者 (8例肠病相关T细胞淋巴瘤、1 6例黏膜相关淋巴组织B细胞淋巴瘤 )EBV感染情况。以 2 0例慢性结肠炎作为对照。结果 :患者年龄 2 1～ 92岁 (平均 52 8岁 ) ,男女之比 3 8∶1。临床上均以腹痛、腹胀或便血就诊。组织病理学 :T细胞淋巴瘤细胞多形性 ,核大 ,不规则 ,嗜血管性及大片坏死 ;B细胞淋巴瘤细胞中等大小 ,多呈圆形、椭圆形 ,胞质较少淡染 ,核稍大 ,核分裂象多见 ,可见“淋巴上皮病变”。 2 4例淋巴瘤中检出 (原位杂交及免疫组化 )EBV DNA 1 4例 (检出率为 58.3 % ) ,其中T细胞淋巴瘤EBV的检出率为 75 % ,B细胞淋巴瘤EBV的检出率为 50 % (P <0 0 1 )。结论

中国四川地区涎腺淋巴上皮癌的EB病毒原位杂交研究

目的 探讨在中国四川地区 EB病毒感染和涎腺淋巴上皮癌发病的关系。方法 采用一个针对 EB病毒编码的小分子 RNA(EBER- 1 )的寡核苷酸探针对 1 6例涎腺淋巴上皮癌 (L EC)、4例良性淋巴上皮病损(BL EL)、4例非特异性慢性涎腺炎石蜡包埋组织进行了原位杂交检测。结果 本组病例中 1 6例 L EC的癌细胞核均见 EBER- 1强阳性信号 ,4例 BL EL、4例非特异性慢性涎腺炎及 2例瘤旁正常涎腺组织均为阴性。结论 本结果提示

鼻咽刷片细胞学检查和EB病毒检测在鼻咽癌诊断中的意义

目的 :探讨鼻咽细胞学检查结合DNA核型判断和细胞EB病毒检测在可疑鼻咽癌病人筛查中的作用。方法 :分别对 6 6例可疑鼻咽癌就诊病人作鼻咽刷片细胞学诊断和应用CAS2 0 0图像分析仪测定涂片细胞DNA含量 ,细胞学癌阳性病例同时作EB病毒编码RNA(EBERs)原位杂交。结果 :与组织学诊断相比 ,细胞学诊断和DNA非二倍体诊断癌的敏感性分别为6 6 %和 5 5 % ,两者结合判断不能提高敏感性 ,并且假阴性率高 ;细胞学癌阳性病例的癌细胞核EBERs阳性率 92 .1% ,其中 6例DNA二倍体核型病例均呈EBERs阳性 ,可诊断为鼻咽癌。结论 :鼻咽细胞学检查结合DNA核型判断不能提高可疑鼻咽癌病人的诊断率 ,不适用于鼻咽癌筛查。细胞涂片的EB病毒原位杂交方法 ,在鼻咽癌可疑病人的诊断和鉴别诊断上具有重大实用价值 。

涎腺良、恶性淋巴上皮病变的临床病理特征及其与EB病毒的关系

目的 了解涎腺良、恶性淋巴上皮病变的临床病理特征及其与EB病毒的关系。方法 采用光镜、免疫组化染色、原位杂交、聚合酶链反应(PCR),对14例涎腺恶性淋巴上皮病变(MLEL)和5例涎腺良性淋巴上皮病变(BLEL)进行观察,同时复习临床相关资料,并进行随访。结果 涎腺MLEL好发于腮腺、颌下腺,以女性为主,平均年龄47岁。组织学:大量增生的淋巴组织中见成簇或条索状分布的肿瘤细胞,瘤细胞界限不清,呈合体状,胞质嗜酸或淡染,核呈空泡状,核仁大而明显,核分裂象多见。免疫组化:瘤细胞表达CK;EBV阳性检出率92.9％,BLEL仅1例阳性。原位杂交:4例MLEL检出EBV EBERs;2例BLEL均为阴性。PCR:4例MLEL检出EBV/IR3,1例BLEL未检出。结论 涎腺MLEL是一类较少见、好发于腮腺、女性多见的未分化癌,组织学类似于鼻咽部的淋巴上皮癌。肿瘤的发生与EBV感染密切相关。

胃癌组织中EB病毒编码的RNA原位杂交检测

目的研究胃癌组织中ＥＢ病毒感染情况，初步探讨ＥＢ病毒感染与胃癌的关系。方法采用ＲＮＡ原位杂交法观察５８例胃腺癌，２７例胃癌癌前病变及１５例正常胃粘膜组织中ＥＢ病毒感染发生率和分布情况。结果胃癌组织ＥＢ病毒感染阳性率为１０．３％，阳性标本多属低分化腺癌；胃癌癌前病变、正常胃粘膜及癌旁粘膜ＥＢ病毒检测均阴性。结论ＥＢ病毒在胃癌发病中的作用可能是有限的。

EB病毒与乳腺癌的相关性

目的探讨EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)与乳腺癌发生、发展的相关性。方法随机选取不同发展阶段的乳腺病变组织246例,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、原位杂交(in situ hybridization,ISH)、激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)、免疫组化染色En Vision法检测EBV DNA、RNA、蛋白质水平,分析EBV与乳腺癌发生、发展的关系。结果免疫组化标记246例乳腺病变均未检测到EBV潜伏膜蛋白LMP1的表达。PCR法在乳腺癌(12/23)、原位癌(0/10)以及乳腺良性病变(0/15)中检测到EBV DNA,但用地高辛标记的EBV DNA探针对48例乳腺良、恶性病变组织(包括PCR扩增阳性的12例乳腺癌标本)进行ISH检测,在癌细胞、乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞内均未检测到阳性杂交信号。采用LCM PCR检测12例PCR扩增阳性和12例阴性乳腺标本的乳腺上皮细胞和间质淋巴细胞,在12例PCR阳性标本的间质细胞中扩增出EBV DNA,癌组织中未检出EBV DNA。用EBV RNA探针和ISH方法在75例乳腺良恶性病变组织中均未检测到EBER表达。结论在该文选择的标本中,乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。

肺癌中EB病毒的原位杂交检测

为观察EB病毒在肺癌组织中的分布并探讨EB病毒感染与肺癌的关系，对87例肺癌组织中经多聚酶链反应（PCR）检测52例EB病毒阳性的石蜡包埋组织，用原位杂交技术进行定位检测。癌组织及癌旁肺组织原位杂交EB病毒阳性率分别为37．9％（33／87）和11．5％（IO／87）；中、低分化癌与高分化癌EB病毒阳性率有显著差异，强阳性病例均为分化较差的肿瘤；累及胸膜、肋骨、隔肌的肺癌，其EB病毒阳性率明显高于未侵及者；随着EB病毒感染的加重，淋巴细胞浸润增多。结果表明：EB病毒感染与肺癌细胞的生物学特性及肺癌的发展有关。

用原位PCR方法检测鼻咽癌组织中的EB病毒

目的 探讨在鼻咽癌组织石蜡切片标本中原位检测EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)的更灵敏的方法。方法 用地高辛标记的EBVDNA的BamHI W片段为探针 ,分别用原位杂交、原位PCR的方法检测鼻咽癌组织切片中EBV的分布情况。结果 原位PCR比原位杂交检测EB病毒的方法更灵敏。结论 用原位PCR检测鼻咽癌组织切片中EB病毒不失为一种灵敏的方法。

唐山地区EBV及HPV感染与口咽鳞癌预后相关性分析

目的检测唐山地区口咽鳞癌(oropharyngeal squamous cell carcinoma,OPC)组织中EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)和人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染情况及其对疾病预后判断的价值。方法选取2003-01-01-2010-12-31唐山市协和医院明确诊断的OPC手术切除标本98例,分别采用原位杂交及PCR-反向点杂交方法检测蜡块组织中EB病毒编码的小RNA(EBV-encoded small RNA,EBER)及HPV感染情况,同时对所有患者进行电话随访。应用SPSS 18.0进行统计分析,Kaplan-Meier模型分析中位生存期,Log-rank检验比较生存曲线,Cox回归模型进行多因素分析。结果 98例OPC组织中29.6%(29/98)检测出HPV感染,4.1%(4/98)检测出EBER阳性;HPV感染与口咽癌患者的性别、年龄、饮酒状态、肿瘤部位、临床分期及分级均无明显相关性;HPV阳性病例以非吸烟者居多,明显高于吸烟者,P<0.001。Kaplan-Meier生存曲线显示,随访>30个月OPC患者中Ⅰ和Ⅱ期中位生存期为29个月,明显高于Ⅲ和Ⅳ期19个月,χ2=36.602,P<0.001;HPV阳性患者的中位生存期为35个月,高于HPV阴性患者23个月,χ2=34.413,P<0.001;病理分级为高、中分化患者的中位生存期分别为39和27个月,明显高于低分化的患者19个月,P<0.001。EBER表达与患者的各临床特征均无明显相关性;EBER阳性的OPC患者总体生存率与阴性患者比较差异无统计学意义,P=0.200。结论唐山地区OPC组织中存在一定程度的HPV及EBV感染情况,HPV阳性、临床分期早及分化程度高的OPC患者具有较好的预后。EBV感染对OPC患者的预后并无明显的判断价值。

肺癌组织中EB病毒感染的检测

目的探讨原发性肺癌中EB病毒（Epstein—Barr virus，EBV）的存在情况及EBV与原发性肺癌的关系。方法唐山市人民医院和开滦医院病理科储存的2001--2006年肺癌手术切除石蜡包埋肺癌组织108份，癌旁组织22份，以EBV阳性鼻咽癌组织为阳性对照，用原位杂交法（ISH）检测肺癌患者石蜡包埋组织标本中EBV编码的小RNA（EBERl），并采用图像分析法进行形态学定量。结果癌组织及癌旁组织EBERl的阳性率分别为33．3％（36／108）和4．5％（1／22），二者间差异有统计学意义（P〈0．01）。鳞癌、腺癌、小细胞癌及大细胞癌中EBV感染率分别是35．9％（14／39）、31．6％（12／38）、31．0％（9／29）和1／2。EBV感染与患者年龄、性别和组织学类型无关，但与肺癌的部位、癌组织分化程度有关，右肺明显高于左肺，中低分化癌明显高于高中分化癌。结论唐山地区原发性肺癌组织中EBV感染率为33．3％，EBV感染可能是肺癌的潜在病因之一，在癌组织分化的不同阶段有不同的作用。