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A Review: Interactions of Equine Herpesvirus-1 with Immune System and Equine Lymphocyte 被引量:2
1
作者 Nor Dini Rusli Khairiyah Binti Mat Hasnita Che Harun 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2014年第12期294-307,共14页
Equine herpesvirus-1 (EHV-1) remains one of the most common viral pathogens affecting horses worldwide presenting as a persistent infection which can establish latency in nerve ganglia (trigeminal ganglion), lymphoid ... Equine herpesvirus-1 (EHV-1) remains one of the most common viral pathogens affecting horses worldwide presenting as a persistent infection which can establish latency in nerve ganglia (trigeminal ganglion), lymphoid tissues of the respiratory tract and peripheral blood lymphocytes. EHV-1 infection induces both humoral and cellular immune responses in horses. Virus neutralising antibody, particularly in the nasopharynx, is to kill free virus shed from infected epithelial cells. Hence this antibody has important functions in reducing virus shedding and spreading infection to cohorts. Cellular immune responses, particularly those carried out by cytotoxic T lymphocyte (CTL), have been shown to be effective in killing virus-infected cells in vitro. This review underlines the state of knowledge regarding immunity to EHV-1 and also its interaction with equine lymphocyte. Finally, the review also includes the importance of the viral immediate early (IE) protein in the pathogenesis of EHV-1. This information can be used as the basis for future research. 展开更多
关键词 equine herpesvirus-1 (ehv-1) LYMPHOCYTE CYTOTOXIC T LYMPHOCYTE (CTL) Immune Response Peripheral Blood MONONUCLEAR cell (PBMC)
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Development of a sandwich ELISA for the detection of bovine herpesvirus type 1
2
作者 Shanaz Bashir Rashmi Singh +1 位作者 Barkha Sharma Sharad K Yadav 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2011年第5期363-366,共4页
Objective:To develop a standard enzyme-linked immunosorbent assay(ELJSA) for the detection of bovine herpesvirus type 1(BHV-1).Methods:The assay was based on hyperimmune rabbit and guinea pig antisera raised again... Objective:To develop a standard enzyme-linked immunosorbent assay(ELJSA) for the detection of bovine herpesvirus type 1(BHV-1).Methods:The assay was based on hyperimmune rabbit and guinea pig antisera raised against purified BHV-1.Polyethylene glycol precipitation and sucrose density gradient methods were adopted for viral concentration and purification.Antisera were raised using Freund’s adjuvant followed by extraction of IgG of high purity.Results: Optimum antisera dilutions as determined by titrations were chosen as 14 000,whereas the conjugate was used at 1:2 000 dilution.Using 95 clinical specimens,the ELISA test showed a sensitivity and specificity of 91.90%and 93.10%,respectively when compared to PCR.The cutoff value was fixed at 0.15<sub>490</sub>) and a P/N ratio of】1.30 indicated a significant positive reaction. Conclusions:The results have demonstrated that this ELISA could efficiently detect BHV-1 and can be used as an important diagnostic tool. 展开更多
关键词 BOVINE herpesvirus type 1 ANTISERA Enzyme-linked IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA)
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马疱疹病毒1型ORF2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
3
作者 杨贤斌 吴桂灵 +5 位作者 撒瑞雪 杨凯舒 张嗣玉 齐晋卫 李银涛 刘建华 《现代畜牧兽医》 2024年第6期1-5,共5页
研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体。根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)... 研究旨在克隆马疱疹病毒1型(EHV-1)ORF2基因,通过大肠杆菌原核表达系统获得ORF2蛋白,制备多克隆抗体。根据EHV-1 YM2019株全基因组序列(GenBank:MT063054)设计1对引物,将ORF2基因克隆至pET-28a-ORF2原核表达载体中,通过Transetta(DE3)感受态细胞,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达ORF2蛋白,使用Ni-NTA琼脂糖纯化树脂纯化,免疫BALB/c小鼠,检测多克隆抗体的效价和特异性。结果显示:ORF2基因成功克隆至原核表达载体pET-28a中,并通过大肠杆菌表达系统得到ORF2蛋白,大小约为38 ku,以包涵体的形式存在。通过Ni-NTA纯化树脂获得纯度较高的重组蛋白,能够与EHV-1阳性血清特异性结合;间接ELISA方法检测多克隆抗体的效价为1∶64000,RK-13表达的ORF2蛋白可被多克隆抗体能特异性识别。研究表明,大肠杆菌表达的ORF2重组蛋白具有良好反应原性,ORF2蛋白制备的多克隆抗体效价高、特异性强,可为ORF2蛋白的生物学功能和基因缺失疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 ORF2蛋白 原核表达 多克隆抗体制备
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重组牛疱疹病毒1型转移载体的构建与初步应用
4
作者 戴莎莎 马小静 +3 位作者 王景松 田兴苗 王健霖 李继东 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第10期2311-2320,共10页
为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋... 为构建一种能用于牛疱疹病毒1型(BHV-1)重组的转移载体,在真核表达载体pVAX1 CMV(cytomegalovirus)启动子的反向位点插入另一个CMV启动子,构建具有双向启动功能的表达载体prPP,在正、反向CMV启动子下游预置多克隆酶切位点;将绿色荧光蛋白标记基因置于反向启动子下,构建BHV-1重组载体prPgP;以BHV-1囊膜糖蛋白基因gE作为重组位点,将gE上下游同源臂插入prPgP载体中,牛病毒性腹泻病毒(BVDV)E 2基因置于正向CMV启动子下,构建p△gErPgP-E2载体,用重组质粒转染已感染BHV-1的牛肾细胞(MDBK),产生的重组病毒经筛选、纯化、鉴定,命名为rBHV-1-△gE/E2,所含GFP和E 2基因正常表达。结果表明,重组载体prPgP能方便地用于BHV-1的重组,为相关研究及其疫苗研制提供了便捷。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒1 同源臂 转移载体 同源重组
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新疆伊犁地区马疱疹病毒1型的分离与鉴定 被引量:13
5
作者 杨永龙 刘建华 +6 位作者 宋焕堂 李静 卢亚宾 胡月 范斌 况玲 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期550-553,共4页
为鉴定新疆伊犁地区某马场疑似感染马鼻肺炎感染的病原,本实验采集流产胎儿肺组织,通过细胞培养、PCR鉴定、毒价测定、病毒中和试验、透射电镜观察以及病毒理化特性测定等方法进行了病毒的分离与鉴定。结果表明:MDBK细胞接种病毒后出现... 为鉴定新疆伊犁地区某马场疑似感染马鼻肺炎感染的病原,本实验采集流产胎儿肺组织,通过细胞培养、PCR鉴定、毒价测定、病毒中和试验、透射电镜观察以及病毒理化特性测定等方法进行了病毒的分离与鉴定。结果表明:MDBK细胞接种病毒后出现典型的细胞圆缩、细胞融合、细胞脱落和聚堆成葡萄串状等病变特征;毒价测定为TCID50106.2/m L;选择EHV-1的g B基因经PCR扩增,得到622 bp的特异性DNA片段;经理化特性测定该病毒不耐酸、不耐热、对紫外/氯仿/乙醚处理敏感;电镜观察可见圆形、有囊膜、直径大约为130 nm的病毒颗粒。综上所述,经分离与鉴定获得的病毒株生物学性质符合马疱疹病毒1型,并命名为EHV-1-XJ2015株。本研究在新疆伊犁分离到的马疱疹病毒1型属首次报道,为我国马鼻肺炎的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 伊犁马 马疱疹病毒1 分离鉴定
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马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立 被引量:6
6
作者 杨夷平 刘建华 +3 位作者 冉多良 许全圆 李娜 加尔肯 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第9期35-40,共6页
本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进... 本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型(EHV-1)的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术(LAMP),同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B(gB)基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65℃恒温下作用50min,使EHV-1DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型(EHV-4)等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 环介导等温扩增技术 快速检测
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马疱疹病毒1型主要毒力基因分析及TK基因缺失载体的构建 被引量:4
7
作者 范斌 陈卓 +5 位作者 刘建华 鲍子磊 胡月 贾钦瑞 王雪竹 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第10期2681-2690,共10页
为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将... 为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)主要毒力基因遗传进化情况并构建TK基因缺失株,本研究以EHV-1XJ2015株DNA为模板,对其主要毒力基因TK、gI和gE全长进行克隆、测序及生物信息学分析,并扩增TK基因左右重组臂TKL和TKR,构建质粒pUC-TKLR,将扩增后的增强绿色荧光蛋白(EGFP,含有CMV+polyA)插入pUC-TKLR质粒,构建TK基因缺失打靶质粒。TK、gI和gE基因同源性分析结果显示,XJ2015株与国外EHV-1分离株TK、gI和gE基因同源性均较高,分别为99.8%~100.0%、99.6%~100.0%和99.9%~100.0%;与EHV-3分离株同源性均最低,分别为72.9%、59.4%和62.1%;遗传进化分析显示,3个基因均与国外EHV-1同属于一个遗传进化分支,与EHV-9和EHV-4进化关系较近,但与EHV-3进化关系较远,表明XJ2015毒株与国外EHV-1毒株TK、gI、gE基因核苷酸上差异不明显,没有明显的地域性特征,功能基因保守且进化缓慢,同源基因功能相同或相近;经PCR扩增、酶切、测序及转染鉴定,本试验成功构建了用于TK基因缺失的打靶质粒pUC-TKLR-EGFP。通过对EHV-1主要毒力基因的分析及TK基因缺失打靶载体的构建,为新疆地区马鼻肺炎流行病学调查分析、TK基因缺失株的构建提供理论依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 序列分析 基因缺失载体
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马疱疹病毒1型XJ2015株全基因组测序及分析 被引量:4
8
作者 胡月 刘建华 +6 位作者 鲍子磊 王世民 范斌 贾庆瑞 王雪竹 王思云 冉多良 《动物医学进展》 北大核心 2018年第11期41-47,共7页
马疱疹病毒1型(EHV-1)可引起马属动物多系统疾病,呈世界性分布并造成严重经济损失。为进一步认识EHV-1的分子特征,采用PCR分段扩增测序,利用ORF finder和Smart BLAST分析基因组结构及基因功能,用DAN Man和MEGA7.0进行基因组序列特征及... 马疱疹病毒1型(EHV-1)可引起马属动物多系统疾病,呈世界性分布并造成严重经济损失。为进一步认识EHV-1的分子特征,采用PCR分段扩增测序,利用ORF finder和Smart BLAST分析基因组结构及基因功能,用DAN Man和MEGA7.0进行基因组序列特征及核苷酸同源性分析。结果表明,XJ2015株全基因组序列长度为150 267bp。G+C含量为56.7%。结构简式为TRL-UL-IRL-IRS-US-TRS,包含80个开放阅读框,编码78个蛋白。同源性分析表明,32株病毒全基因组核苷酸同源性为86.74%,TRL/IRL高达99.49%,TRS/IRS仅为65.99%。XJ2015株与英国株Ab4同源性最高(93.58%),与美国株T-616同源性最低(76.72%)。首次获得并分析我国流行毒株EHV-1XJ2015全基因序列,为进一步研究EHV-1的遗传背景和进化关系及基因功能的挖掘提供理论依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 全基因组测序 分子特征
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上海市某马场马疱疹病毒1型感染的确诊 被引量:1
9
作者 刘健 李鑫 +8 位作者 葛菲菲 杨德全 沈海潇 鞠厚斌 葛杰 于讳茹 邓波 王建 赵洪进 《中国动物检疫》 CAS 2019年第7期86-88,共3页
采用马疱疹病毒1型和4型二重PCR分型方法,对上海市某马场临床疑似病例的鼻拭子和血浆样品进行检测,同时对扩增产物进行测序和比对,确诊为马疱疹病毒1型阳性,表明上海市马群中存在马疱疹病毒1型感染。因此,应提高上海市马匹饲养管理水平... 采用马疱疹病毒1型和4型二重PCR分型方法,对上海市某马场临床疑似病例的鼻拭子和血浆样品进行检测,同时对扩增产物进行测序和比对,确诊为马疱疹病毒1型阳性,表明上海市马群中存在马疱疹病毒1型感染。因此,应提高上海市马匹饲养管理水平,加强马疱疹病毒1型的定期免疫和检疫,及时对阳性马匹进行隔离,对马厩进行消毒。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 马疱疹病毒4型 检测 测序
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马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒免疫效果分析 被引量:1
10
作者 李静 鲍子磊 +3 位作者 范斌 胡月 宋焕堂 刘建华 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2017年第4期260-266,共7页
为了探究马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒的免疫效果。设计合成完整的抗原表位串联体B;以小鼠脾脏总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出小鼠C3d基因;以EHV-1基因组为模板扩增出gB基因;构建重组质粒B-pVAX1、gB-pVAX1、C3d-... 为了探究马疱疹病毒1型gB糖蛋白表位与小鼠C3d串联重组质粒的免疫效果。设计合成完整的抗原表位串联体B;以小鼠脾脏总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出小鼠C3d基因;以EHV-1基因组为模板扩增出gB基因;构建重组质粒B-pVAX1、gB-pVAX1、C3d-pVAX1、B-C3d-pVAX1和gB-C3d-pVAX1;转染BHK-21细胞后能正常表达;将重组质粒免疫BALB/c雄性小鼠。结果表明:B-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);B-C3dpVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于B-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);gB-C3d-pVAX1免疫组抗体水平、IFN-γ和IL-4相对表达量均高于gB-pVAX1免疫组、C3d-pVAX1免疫组和对照(PBS)免疫组,差异极显著(P<0.01);重组表位串联体B能够增强小鼠体液免疫和细胞免疫,同时C3d作为分子佐剂具有增强免疫的作用。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 gB糖蛋白 B细胞表位 重组质粒 免疫效果
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两种HSV-1及猴B病毒相关抗体测定方法的比较 被引量:2
11
作者 乔红伟 佟巍 +3 位作者 蒋虹 丛喆 王卫 魏强 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第3期57-60,87,共5页
目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成... 目的以人单纯疱疹病毒(HSV-1)做为抗原,利用空斑法和IFA法比较猴BV和人HSV-1阳性血清两种不同血清的中和能力的差异,建立一种实用、准确、可靠的病毒毒力的检测方法。方法首先,将HSV-1病毒悬液作连续的10倍稀释,取1 mL接种于已经长成单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数,算出病毒悬液中每毫升所含蚀斑单位,即滴定出HSV-1的TC ID50。同时,用免疫荧光方法(IFA)对猴和人疱疹阳性血清进行滴定,得到其血清的效价。其次,用滴定出的病毒液分别与两种阳性血清体外中和后,接种到单层的Vero-E6细胞上,用1%甲基纤维素覆盖,待其出现蚀斑后计数。最后,计算出其蚀斑减少率。结果用1%甲基纤维素作覆盖层的蚀斑数量平均为10-5PFU,能形成115-116个/mL蚀斑,形状呈黍米大小的规则圆形,其蚀斑边缘清晰。IFA滴定的人HSV-1阳性血清与猴BV阳性血清的中和抗体均为1∶80。人HSV-1和猴BV两种阳性血清的空斑减少率均为100%。结论确定了利用1%甲基纤维素做为覆盖层可得到清晰可靠的蚀斑,由此方法检测到用人HSV-1可以代替猴B病毒,筛查猴B病毒抗体。且为将来进行药物筛选和中和实验中利用病毒空斑法建立方便、可靠的方法。 展开更多
关键词 猕猴疱疹病毒1 人单纯疱疹病毒Ⅰ型 空斑减少 免疫荧光
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马疱疹病毒1型QuantStudio^TM 3D数字PCR检测方法的建立 被引量:7
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作者 雷程红 陈凯云 +6 位作者 徐新峰 胡都斯·艾尔肯 徐军 白梅花 史茜 肖媛媛 王科珂 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第5期1299-1306,共8页
试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探... 试验旨在建立一种高灵敏性的马疱疹病毒1(EHV-1)3D数字PCR(3D-dPCR)检测方法,对EHV-1病毒含量较低的样品能准确定量检出,实现马鼻肺炎早期诊断及预防。根据EHV-1糖蛋白B基因保守区域设计特异性引物和探针,优化3D-dPCR反应体系中引物探针浓度和退火温度,对该方法进行灵敏性、特异性、重复性分析,建立了EHV-1的3D-dPCR方法。本研究建立的3D-dPCR方法,引物和探针最佳浓度分别为0.4和0.4μmol/L,最佳退火温度为60℃,该方法绝对定量曲线的R2=0.998,线性关系良好,与实时荧光定量PCR方法相比灵敏度高10倍左右,最低检出限为5.83拷贝/μL;批内和批间重复性试验变异系数均<3.2%;与EHV-4、马泰勒虫、马病毒性动脉炎的核酸无交叉反应;通过对123份临床样品进行3D-dPCR检测,结果显示,3D-dPCR方法阳性检出率为66.7%,高于世界动物卫生组织(OIE)中EHV-1的实时荧光定量PCR方法阳性检出率64.2%。3D-dPCR方法对病毒含量较高的样品与实时荧光定量PCR结果一致,对病毒含量较低的样品敏感性更高,能有效检出可疑样品。本试验结果表明,建立的3D-dPCR方法检测低拷贝数的临床样品时灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于EHV-1的准确定量检测。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 3D数字PCR(3D-dPCR) 绝对定量
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HSV-1包膜糖蛋白G原核表达克隆的构建和表达 被引量:1
13
作者 徐翮飞 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2001年第2期89-91,共3页
①目的 构建人单纯疱疹病毒 1型Stoker株包膜糖蛋白G编码基因 (Us4)片段的原核表达克隆 ,并进行原核表达。②方法 通过PCR方法扩增HSV 1Us4基因的抗原决定簇编码区 ,目的基因与原核表达载体PGEX 4T 2分别经双酶切后连接 ,然后转化宿主... ①目的 构建人单纯疱疹病毒 1型Stoker株包膜糖蛋白G编码基因 (Us4)片段的原核表达克隆 ,并进行原核表达。②方法 通过PCR方法扩增HSV 1Us4基因的抗原决定簇编码区 ,目的基因与原核表达载体PGEX 4T 2分别经双酶切后连接 ,然后转化宿主菌Ecoli.BL2 1,IPTG诱导表达。③结果 获得了重组的原核表达质粒及重组蛋白。④结论 用限制性内切酶鉴定原核表达质粒构建成功 ,SDS 展开更多
关键词 疱疹病毒1 基因表达 聚合酶链反应 HSV-1 包膜糖蛋白G 原核表达 克隆
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马疱疹病毒1型gp2基因分子特征
14
作者 刘建华 吴桂灵 +6 位作者 胡月 加尔肯 贾钦瑞 孙文程 撒瑞雪 张嗣玉 冉多良 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2022年第6期19-24,28,共7页
为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相... 为了探索α疱疹病毒亚科的马疱疹病毒特有基因gp2的功能及分子结构,本试验以EHV-1 XJ2015株为研究对象,扩增其gp2基因并测序,继而进行遗传进化分析、氨基酸序列差异性分析和蛋白质性质分析。结果显示,30株EHV-1病毒gp2蛋白氨基酸序列相似性达90.38%;gp2蛋白预测包括1个信号肽、1个螺旋跨膜结构域和1个核外运信号;gp2蛋白二级结构以无规卷曲为主,高达88%,极性分子居多,亲水性氨基酸占52.02%,第25~130位和第273~565位氨基酸亲水性和抗原性较强,易形成潜在的抗原表位。由此可见,gp2基因属于EHV-1较保守的基因,gp2蛋白是分泌型蛋白,且具有良好的抗原性。本试验为进一步解析EHV-1 gp2基因及其编码蛋白功能、制作基因工程疫苗和诊断试剂提供了生物信息学依据。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 gp2基因 分子结构 功能 生物信息学分析
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IL-10、IL-4及其受体启动子在人类单纯疱疹病毒1型激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒复制过程中的启动活性分析
15
作者 吕志刚 卢春 +3 位作者 秦娣 曾怡 程林 陈秀英 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期139-143,193,共6页
目的:分离和鉴定人类IL-10、IL-10受体(IL-10Rα)、IL-4及其受体IL-4Rα启动子序列,并分析IL-10、IL-4以及其受体的启动子在人类单纯疱疹病毒1型(HSV-1)激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)过程中的启动活性。方法:以人类基因组DNA为模板,... 目的:分离和鉴定人类IL-10、IL-10受体(IL-10Rα)、IL-4及其受体IL-4Rα启动子序列,并分析IL-10、IL-4以及其受体的启动子在人类单纯疱疹病毒1型(HSV-1)激活卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)过程中的启动活性。方法:以人类基因组DNA为模板,PCR扩增IL-10、IL-10Rα、IL-4Rα启动子区序列,并分别克隆载入pGL-3基本载体中虫荧光素酶(Luciferase)报告基因的上游。进一步将上述构建的重组质粒与本室保存的含IL-4启动子重组质粒分别转染HSV-1感染的BCBL-1细胞,并作Luciferase活性检测。结果:分离了IL-10、IL-10Rα和IL-4Rα的启动子区域序列,并成功克隆了含启动子序列重组报告质粒;HSV-1感染的BCBL-1细胞在进一步转染了IL-10、IL-10Rα、IL-4和IL-4Rα启动子重组报告质粒后,其Luciferase值与相应的对照比较显著升高(P<0.05)。结论:在BCBL-1细胞中,HSV-1可通过直接激活IL-10、IL-4以及相应受体的启动子来上调它们的表达;在HSV-1感染的BCBL-1细胞中,IL-10和IL-4可能对KSHV的裂解复制起到促进作用。 展开更多
关键词 卡波济肉瘤相关疱疹病毒 人类单纯疱疹病毒1 白细胞介素 启动子活性
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牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)荧光定量PCR检测方法的建立及应用
16
作者 王吉 付瑞 +8 位作者 李晓波 王淑菁 王莎莎 李威 秦骁 黄宗文 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物科学》 2019年第5期35-41,46,共8页
目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 g B基因设计特异引物和Taq Man探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进... 目的 建立牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)实时荧光定量PCR检测方法,用于牛源性样本中BHV-1的快速检测。方法 根据已发表的BHV-1 g B基因设计特异引物和Taq Man探针,建立BHV-1实时荧光定量PCR方法。并对方法的特异性、敏感性、重复性稳定性等进行测定。用建立的方法对181份牛源性样本进行检测。结果 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法与牛副流感病毒Ⅲ型(BPIV3)、牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1)、猪伪狂犬病毒(PRV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)均无交叉反应;检测灵敏度可达到1×101copies/μL;批内变异系数均小于5%。应用建立的方法检测181份牛源性样本,有6份样本BHV-1核酸为阳性。结论 建立的BHV-1荧光定量PCR检测方法具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本中BHV-1污染的检测。 展开更多
关键词 牛疱疹病毒Ⅰ型 实时荧光定量PCR 牛源性样本
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含EGFP基因的马疱疹病毒1型新疆株gE基因缺失株的构建 被引量:3
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作者 范斌 鲍子磊 +3 位作者 贾钦瑞 刘建华 贺笋 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第8期2652-2659,共8页
为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CM... 为筛选马鼻肺炎(equine rhinopneumonitis,ER)基因缺失减毒活疫苗的候选毒株,本研究参考GenBank中EHV-1(登录号:KF644579.1)目的基因序列设计同源臂引物,以本地区流行株XJ2015株DNA为模板PCR扩增gE基因同源臂gEH1、gEH1,以EGFP表达盒(CMV+EGFP+polyA)为标记基因,酶切后依次连接至载体pUC-19,成功构建重组质粒pUC-gEH1H2-EGFP。将XJ2015基因组与质粒pUC-gEH1H2-EGFP共转染至RK-13细胞进行同源重组,以EGFP为标记进行gE基因缺失毒株的筛选及纯化,并测定重组毒株效价。结果显示:经5轮荧光噬斑纯化、PCR及测序鉴定,成功获取一株携带EGFP基因的重组毒株XJ2015-△gE-EGFP,且重组毒株效价(107.1TCID50/0.1 mL)较原毒株(108.8TCID50/0.1 mL)下降约101.7TCID50/0.1 mL。采用同源重组技术成功构建了1株马疱疹病毒1型流行株gE基因缺失突变株,为未来筛选马鼻肺炎基因缺失弱毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 马鼻肺炎 马疱疹病毒1型(ehv-1) gE基因缺失
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马疱疹病毒1型感染马疾病模型的建立及评价 被引量:2
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作者 车传忠 鲍子磊 +3 位作者 胡月 郑学功 刘建华 冉多良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期2196-2203,共8页
试验旨在建立马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus type1,EHV-1)人工发病模型,确定EHV-1感染马的半数感染量(ID_(50))及感染发病的判定标准,为该病的预防与治疗药物的研发奠定基础。以新疆伊犁地区某发病马场流产胎儿中分离的EHV-1 XJ201... 试验旨在建立马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus type1,EHV-1)人工发病模型,确定EHV-1感染马的半数感染量(ID_(50))及感染发病的判定标准,为该病的预防与治疗药物的研发奠定基础。以新疆伊犁地区某发病马场流产胎儿中分离的EHV-1 XJ2015株为研究对象,设立4组不同病毒剂量感染组及对照组,经鼻内喷雾感染马,5 mL/匹,每天观察试验马的临床症状和发病情况,14 d后进行剖检,观察各组织脏器病理变化并应用实时荧光定量PCR方法检测鼻腔排毒及病毒分布情况。结果显示,EHV-1 XJ2015株感染马的ID_(50)为10^(-6.67)/5 mL,其病毒含量为104.33 TCID_(50)/mL。与对照组相比,1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组马临床评分显著升高,主要表现为体温升高(高达39.5℃,一般持续2~6 d)、食欲不振、流浆液性鼻液和下颌淋巴结肿大;且1×10^(6)和1×10^(5)TCID_(50)/mL感染组试验马均表现出不同程度的排毒,肺脏及脑组织中可检测出大量病毒,与对照组相比极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);病理学检查发现,患马脑组织出现非化脓性脑炎及神经元水肿,肺脏组织出现间质性肺炎、嗜中性粒细胞、炎性细胞浸润、出血和肺泡间隔增厚。以上结果表明,EHV-1 XJ2015株对马具有较强的致病性,患病马临床症状典型,病毒主要随鼻液排出,并富集在肺脏及脑组织,通过上述指标确定EHV-1感染马发病的判定标准,本试验成功建立EHV-1感染本体动物疾病模型。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1型(ehv-1) 模型 判定标准
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猫疱疹病毒1型的分离鉴定及gD基因序列分析 被引量:9
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作者 孙春艳 钱鹏 +8 位作者 王洁 曹玉娇 崔宁宁 霍宁宁 黄柏成 习向锋 刘玉秀 林德贵 田克恭 《动物医学进展》 北大核心 2020年第3期30-35,共6页
为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴... 为研究猫疱疹病毒1型(FHV-1)的分子流行病学特征,对2016年-2017年从洛阳及天津地区多家宠物医院收集的具有上呼吸道感染症状的病猫眼鼻拭子样品,用FK-81细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察和gD基因测序分析等方法鉴定所分离的病毒,并进行病毒体外生长动力学研究。结果显示,病料在FK-81细胞上接种后24 h^36 h呈现变圆、融合、局灶性堆积聚团和脱落等细胞病变;分离毒株可被FHV-1单克隆抗体特异性识别;电镜下可观察到病毒粒子呈圆形、有囊膜、直径约130 nm,具有疱疹病毒科的典型形态特征,将所分离到的5株FHV-1分别命名为2016TJ1株、2016TJ2株、2017LY1株、2017LY2株和2017LY3株;病毒一步生长曲线测定结果显示,接种后12 h^36 h病毒快速增殖,40 h^60 h病毒滴度达到高峰,72 h病毒滴度开始下降;5株FHV-1 gD基因序列之间的同源性为100%,核酸序列高度保守且与国内外流行株及疫苗株的同源性极高。研究结果为我国宠物猫群中FHV-1的病原分离、分子流行病学调查等研究积累了资料。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒1 gD基因序列分析 分离鉴定 生长动力学
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马疱疹病毒1型gG蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 王旭蕾 胡月 +5 位作者 加尔肯 车传忠 刘建华 郑学功 王雪竹 冉多良 《动物医学进展》 北大核心 2021年第4期31-34,共4页
为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)的流行情况,需要建立一种检测抗体的间接ELISA方法。采用纯化后EHV-1 XJ2015株的gG蛋白作为检测抗原,优化反应条件后建立检测EHV-1血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验及... 为了解新疆马疱疹病毒1型(EHV-1)的流行情况,需要建立一种检测抗体的间接ELISA方法。采用纯化后EHV-1 XJ2015株的gG蛋白作为检测抗原,优化反应条件后建立检测EHV-1血清抗体的间接ELISA方法,并对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验及商品化试剂盒的应用效果对比。结果表明,该方法仅与EHV-1阳性血清发生反应,不与马疱疹病毒4型、马流感病毒和马动脉炎病毒阳性血清发生反应,血清稀释1∶1600后,仍可以检测到阳性,组内及组间变异系数均小于5%。与试剂盒进行检测结果比较,符合率为93.35%。建立了EHV-1 gG蛋白间接ELISA检测方法,可为EHV-1的快速诊断、流行病学调查及防控工作提供技术支撑。 展开更多
关键词 马疱疹病毒1 gG蛋白 间接ELISA 抗体检测
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