二妙散化裁同病异治蜀地痰湿瘀滞型甲状腺结节

同病异治体现了中医学的独特治疗理念,甲状腺结节是内分泌系统常见病及多发病,古人很早就认识到瘿病与地理位置、水土环境等因素息息相关,而蜀地多湿、痰瘀易滞,故治疗蜀地积聚类疾病强调利湿化痰祛瘀,本文通过深入分析二妙散及其衍生方剂在临床的应用,结合蜀地甲状腺结节的辨证论治经验,提出针对痰湿瘀滞型甲状腺结节的治疗方案,并对治疗经验进行总结,以期为同类型疾病的治疗提供参考。

中药经方二妙散对Gnαq表达的影响及改善CIA模型大鼠炎症反应研究

目的:探讨经方二妙散(EMS)对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠脾脏和关节中免疫调控基因Gnαq表达的影响。方法:建立CIA大鼠模型,并随机分为模型组(CIA组)、1.5、3.0和4.5 g/kg二妙散组(L-EMS、M-EMS和H-EMS组)、阳性对照组(MTX,氨甲蝶呤),各组给予相应药物进行治疗,同时设立健康对照组(Control组)与模型组给予等量生理盐水灌胃。ELISA技术检测各组炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,使用qRT-PCR和Western blot分析Gnαq mRNA和蛋白的表达,免疫组化技术对脾脏和关节中的Gnαq进行定位。结果:CIA组大鼠关节出现明显组织受损、组织增生与炎症浸润等特征改变;MTX组和EMS组关节组织破坏及增生减轻;CIA组IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著升高(P<0.01);MTX组和EMS组IL-1β(除H-EMS组)、IL-6和TNF-α的表达显著低于CIA组(P<0.05)。L-EMS组IL-1β、IL-6和TNF-α的表达显著低于M-EMS和H-EMS组(P<0.05,P<0.01)。CIA组大鼠脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白表达显著高于Control组(P<0.01);EMS和MTX组脾脏和关节中Gnαq mRNA和蛋白表达显著低于CIA组(P<0.05);1.5 g/kg EMS组Gnαq mRNA和蛋白的表达量明显低于其他组(P<0.01,P<0.05)。不同实验组大鼠脾脏和关节中均检测到不同程度的阳性信号。结论:CIA大鼠关节和脾脏组织中Gnαq表达增强可能导致炎症反应,可能通过下调Gnαq减轻CIA大鼠炎症反应。

反相高效液相色谱法测定二妙散中生物碱的含量

采用反相高效液相色谱法，以盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱、黄柏碱、ＨＢ－１为定量指标，测定二妙散中上述各成分的含量。色谱柱Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ－ＯＤＳ；流动相为甲醇－磷酸盐缓冲液－十二烷基硫酸钠（６０∶４０∶０．１）；流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２６４ｎｍ。盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和ＨＢ－１的加样回收率分别为９９．１２％，９８．３５％，９９．８２％，ＲＳＤ分别为３．４２％，３．１５％，３．７４％。测得二妙散中各生物碱含量分别为：小檗碱０．９１４％，巴马汀０．６０９％，药根碱０．０２４７％，黄柏碱０．０８３９％，ＨＢ－１０．３１３％。

三妙丸抗急性痛风关节炎配伍机制研究

目的:探讨三妙丸中二妙丸配伍牛膝的合理性。方法:首次采用高尿酸血症致尿酸盐结晶沉积于关节的急性痛风关节炎大鼠模型,观察三妙及缺牛膝三妙丸对血尿酸值、炎症因子IL-1β和IL-6及关节病理组织的影响;HPLC-ESI-MS/MS分析给药模型大鼠血清和关节中移行成分及其离子峰强度的相对变化。结果:三妙及缺牛膝三妙丸均有显著的抗急性痛风炎症及降血尿酸作用,而三妙丸抑制痛风大鼠足肿胀、保护关节组织的炎症损伤及抑制炎症因子IL-1β水平优于缺牛膝三妙丸;三妙及缺牛膝三妙丸给药血清均检测出5个移行成分,关节中1个移行成分,其中2个为黄柏生物碱代谢物、2个为苍术糖苷类成分代谢物,且三妙方血清及关节中移行成分离子强度均高于缺牛膝三妙方。结论:牛膝有促进二妙丸中黄柏生物碱及苍术倍半类成分在血液及关节中的分布,增强抗急性痛风关节炎药作用。

二妙散对类风湿关节炎调控基因Toll样受体4和重组牛磷酸肌醇3激酶A表达的影响

目的研究二妙散对类风湿关节炎(RA)调控基因Toll样受体(TLR4)和重组牛磷酸肌醇3激酶A(PI3KA)表达的影响。方法通过构建Wistar大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,不同浓度二妙散灌胃治疗,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中炎症因子的表达,苏木精-伊红(HE)染色进行病理学分析,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分析TLR4和PI3KA的表达特性。结果二妙散组与CIA模型组相比,脾脏指数差异无统计学意义(P>0.05);CIA模型组与对照组相比,脾脏指数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);二妙散组滑膜组织炎性细胞较少;较正常组白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量极显著降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05),较模型组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);随二妙散浓度增加IL-37表达量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。模型组大鼠关节中IL-6、TLR4和PI3KA mRNA水平表达量极显著高于对照组和甲氨蝶呤组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论本实验成功构建CIA大鼠模型,TLR4和PI3KA在不同实验组大鼠关节组织中均有不同程度的表达,说明TLR4和PI3KA参与CIA大鼠炎性反应的形成,介导RA炎性因子的形成和发展,二妙散对于减少炎症因子和增加抑炎因子的表达具有重要作用,具体作用机制需进一步研究证实。

经方二妙散对胶原诱发关节炎大鼠脾和关节中CHRNA7表达的影响

目的 研究不同浓度二妙散对胶原诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏和关节中CHRNA7表达的影响。方法 建立雌性Wistar大鼠CIA模型,不同浓度二妙散对CIA大鼠灌胃治疗,研究二妙散对CIA大鼠脾脏和关节CHRNA7表达的影响。通过反转录聚合酶链反应(qRT?鄄PCR)和蛋白质印迹法分析不同实验组大鼠脾脏和关节中CHRNA7的表达特性。结果 CHRNA7 mRNA在关节中的表达量显著高于脾脏(P<0.05);在CIA大鼠脾脏中的表达量显著高于其他处理组(P<0.05);CHRNA7 mRNA在CIA大鼠关节中的表达量显著高于其他处理组(P<0.05);1.5 g/kg二妙散药物组CIA大鼠关节中CHRNA7的蛋白表达量显著低于其他处理组(P<0.05)。结论 不同实验组关节和脾脏中CHRNA7均有不同程度的表达,二妙散治疗CIA最适药物浓度为1.5 g/kg,CHRNA7参与CIA大鼠炎性反应的形成,介导CIA炎性因子的形成和发展。

基于尿液代谢组学技术的二妙散抗类风湿关节炎作用机制研究

目的采用高通量尿液代谢组学技术研究二妙散抗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)的作用机制。方法将大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、给药组,每组8只。模型组与给药组皮内注射完全弗氏佐剂制备RA大鼠模型。给药组大鼠灌胃0.108 g/ml二妙散溶液,空白组与模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续给药14 d。分别于造模后第1、2、14天测定大鼠足跖肿胀度。采集大鼠尿液样本,并进行代谢组学分析。采用无监督和有监督的模式识别技术对获取到的高通量生物学信息数据进行全谱分析和降维处理,筛选和聚焦与RA相关的代谢信息,用以阐明RA的发病机制及二妙散抗炎的作用机制。结果造模后14 d,给药组大鼠足肿胀程度[(1.93±0.11)分比(2.36±0.19)分]较模型组减轻(P<0.01)。代谢轮廓结果显示,空白组大鼠与模型组大鼠代谢分布显著分离,且给药组处于二者之间。通过数据库匹配鉴定了13个与RA相关的生物标记物,分别为亚麻酸、花生四烯酸、5,6-EET、a-乳糖、蔗糖、海藻糖、前列腺素类、白三烯C4等。涉及亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、淀粉和半乳糖代谢、鞘脂类代谢等代谢通路。结论二妙散可减轻RA大鼠炎症反应,通过调节亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、淀粉和半乳糖代谢等发挥抗炎作用。

基于网络药理学探讨二妙散干预特应性皮炎的分子靶点和机制

目的通过网络药理学方法研究二妙散干预特应性皮炎的药理机制,分析其作用的活性成分、分子靶点和信号通路。方法通过TCMSP和Drugbank数据库获得二妙散活性成分和靶点。通过GEO数据库分析差异表达基因,获得特应性皮炎疾病靶点。通过Cytoscape的Bisogenet和CytoNCA插件获得二妙散治疗特应性皮炎的靶基因。通过DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析。结果经筛选获得二妙散12种活性成分和107个靶点;鉴定出274个特应性皮炎差异表达基因(矫正P值<0.005和|log2(差异倍数)|>1.5)。得到187个二妙散治疗特应性皮炎的靶基因。靶基因的功能注释与端粒组织、蛋白异四聚体化、基因表达调控等相关。PI3K-Akt、MAPK、HIF-1信号通路等20条通路显著性富集。MAPK1、AKT、RELA、和TP53等多个基因为二妙散基因通路网络中干预特应性皮炎的关键基因。结论二妙散中槲皮素、四氢小檗碱、豆甾醇等核心成分可能通过参与PI3K-Akt、MAPK、HIF-1等信号通路,调控MAPK1、AKT、RELA和TP53等基因靶点,治疗特应性皮炎。