灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸调控PI3K/Akt/FoxO3a通路延缓衰老的作用机制研究

研究灯盏细辛总咖啡酰奎宁酸(caffeoylquinic acid from Erigeron breviscapus,EBCQA)的抗衰老作用,并探讨其潜在作用机制。以线虫为模型,观察EBCQA对其寿命、氧化抗性、热抗性、运动能力、DAF-16入核、以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响。腹腔注射D-半乳糖构建衰老大鼠模型,检测EBCQA对大鼠学习记忆能力、胸腺和脾脏系数、肝脏中磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(Akt/protein kinase B,Akt)、磷酸化Akt(phosphp-Akt,p-Akt)、叉头框蛋白O3a(forkhead box class O3a,FOXO3a)、磷酸化FOXO3a(phosphp-FOXO3a,p-FOXO3a)表达,以及肝脏和血清中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA含量的影响。结果显示,EBCQA能够延长野生型线虫寿命,并提升其氧化抗性、热抗性和运动能力,但对线虫PI3K、Akt、FoxO3a同源体突变株寿命没有显著影响;EBCQA能促进DAF-16入核,通过DAF-16提升线虫的SOD、GSH-Px、CAT活性,降低MDA水平。在D-半乳糖诱导衰老大鼠中,EBCQA给药显著改善大鼠的学习记忆功能,提升胸腺和脾脏系数,降低PI3K、Akt、p-Akt、p-FoxO3a表达和MDA含量,增强SOD、GSH-Px、CAT活性。以上结果表明,EBCQA具有延缓衰老的作用,其机制可能与抑制PI3K和Akt激活、降低FOXO3a磷酸化、促进FOXO3a入核和转录活性、提升抗氧化酶活性和抑制氧化应激相关。

灯盏花最佳采收期研究

目的:为确定灯盏花的最佳采收期。方法:观测了灯盏花植株的生长发育进程,全草及各部位的干物质积累规律和全草主要有效成分灯盏乙素和咖啡酸酯含量的积累规律。结果:生育期130 d时,灯盏花单株叶数和单叶干重达到最大,全草及叶、茎和花的干物质积累也较高;灯盏花灯盏乙素含量随生育期推移,而逐渐下降,出苗120 d以后,急剧下降;不同生育时期灯盏花咖啡酸酯含量变化较小,无规律,与灯盏乙素含量无相关关系。结论:灯盏花出苗后130 d,处于初花期,是灯盏花的最佳采收期。

灯盏细辛药代动力学研究概况

本文从分析成分、测定方法、体内过程、药代动力学特点等4个方面概述了近年对灯盏细辛的药代动力学研究并进行了分析和探讨。

云南栽培灯盏花指纹图谱建立及4个成分测定

目的采用HPLC法建立云南(大理、红河、曲靖)栽培灯盏花Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz.的指纹图谱,并测定绿原酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、飞蓬酯乙、灯盏乙素的含有量。方法分析采用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.3%磷酸(A)-甲醇(B),梯度洗脱;体积流量1.0 m L/min;检测波长335 nm;柱温20℃。结果 HPLC指纹图谱中有17个共有峰,相似度大于0.971。红河栽培灯盏花中灯盏乙素和4个成分的总含有量明显高于大理,但3,5-二咖啡酰奎宁酸显著低于大理,两地绿原酸和飞蓬酯乙相近。结论红河栽培灯盏花质量更稳定,更有利于质量控制。

灯盏花化妆品原料的抗氧化活性及质量控制研究

对灯盏花化妆品原料(EBCI)的抗氧化活性进行研究,同时建立其中两种指标成分的含量测定方法。采用DPPH、ABTS、·OH清除法考察EBCI的自由基清除活性,同时用H_(2)O_(2)诱导HHF-1细胞氧化损伤模型考察EBCI对细胞存活率和细胞中谷胱甘肽(GSH)含量的影响;建立了HPLC法同时测定EBCI中野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸的含量测定方法。结果显示EBCI具有DPPH、ABTS和·OH自由基清除能力,IC_(50)分别为46.93、91.36和89.37μg/mL,在4、20μg/mL质量浓度下能显著提高氧化损伤HFF-1细胞的存活率且能显著提高细胞中GSH含量。野黄芩苷和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸分别在0.0093~0.3722、0.0085~0.3409 mg/mL范围内呈现良好线性关系,加样回收率分别为103.47%、103.38%(RSD均小于2%)。结果表明EBCI具有抗氧化作用;所建立的含量测定方法简便、稳定、准确可靠,可用于EBCI质量控制。

高效液相色谱法测定灯盏细辛提取物中两种有效成分的含量

目的：探讨灯盏细辛提取物中野黄芩苷、3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸2种有效成分含量的高效液相色谱测定方法。方法：色谱柱选择Dikma Kromasil C18（250mm×4.6mm,5.0μm）,流动相选择乙腈：0.2%磷酸溶液=30∶70,检测波长为332nm,柱温为35℃。结果：野黄芩苷的线性回归方程为Y=1.554×103-0.201×102（r=0.9997）;3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸的线性回归方程为Y=1.724×103-0.081×102（r=0.9996）;野黄芩苷在0.0341~1.3121μg范围内,3,4-二-O-咖啡酰奎宁酸在0.0592~2.3426μg范围内呈良好的线性关系。结论：采用高效液相色谱法同时测定灯盏细辛提取物中2种有效成分的含量,操作简单,精密度高,重现性好,可以作为灯盏细辛提取物中这2种有效成分的定量分析方法。

HPLC测定灯盏花不同部位绿原酸、灯盏乙素、3,5-二咖啡酰奎宁酸和4,5-二咖啡酰奎宁酸含量

目的:建立同时测定灯盏花不同部位中绿原酸、灯盏乙素、3,5-二咖啡酰奎宁酸及4,5-二咖啡酰奎宁酸4种有效成分含量的高效液相色谱方法。方法:采用Agilent Zorbax SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(A)-0.3%磷酸水溶液(B),梯度洗脱(0～10 min,12%～15%A,10～32 min,15%～15%A,32～33 min,15%～20%A,33～50 min,20%～22%A),流速1 mL.min-1,检测波长335 nm与327 nm,柱温30℃。结果:绿原酸(1)、灯盏乙素(2)、3,5-二咖啡酰奎宁酸(3)及4,5-二咖啡酰奎宁酸(4)分别在0.050 1～1.002,0.165 9～3.318,0.049 7～0.994,0.048 7～0.974μg呈良好线性关系(r>0.999 6);灯盏花药材中4种有效成分的平均回收率(n=6)分别为98.53%,99.68%,98.78%,99.06%,RSD分别为0.94%,0.49%,1.1%,0.81%。结论:该方法简便、准确,分离效果好,可用于灯盏花药材的质量评价。

灯盏细辛中多酚类成分定性、定量的分析

目的:建立灯盏细辛中多酚类成分的定性、定量分析方法。方法:色谱分离采用AlltimaTMC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水体系,梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1,检测波长为330 nm;质谱定性采用离子阱多级质谱(Trap-MSn)结合飞行时间质谱(TOF-MS),负离子模式扫描;应用HPLC法建立不同产地、不同药用部位灯盏细辛药材中绿原酸、灯盏乙素、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、1,5-O-双咖啡酰基奎宁酸、4,5-O-双咖啡酰基奎宁酸5个多酚类化合物的含量测定方法,应用紫外-可见分光光度法建立灯盏细辛总多酚含量测定方法。结果:通过应用2种质谱信息组合分析策略鉴定了灯盏细辛中14个主要色谱峰的结构;含量测定结果表明,不同产地及不同药用部位灯盏细辛药材中有效成分含量存在明显的差异。结论:本实验所建立的分析方法,简单易行,为灯盏细辛药材质量控制提供可行的方法。

灯盏花化学成分研究

目的:研究灯盏花Erigeron breviscapus的化学成分。方法:利用各种色谱方法进行成分分离纯化,根据理化性质和波谱分析鉴定化合物结构。结果:分离得到12个化合物,分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(1)、5,7-二羟基色原酮(2)、3-O-咖啡酰-γ-奎尼内酯(3)、柚皮素(4)、3,5-二-O-咖啡酰奎尼酸(5)、3,4-二-O-咖啡酰奎尼酸(6)、4,5-二-O-咖啡酰奎尼酸(7)、1,3-二-O-咖啡酰奎尼酸(8)、1,5-二-O-咖啡酰奎尼酸(9)、3-O-咖啡酰奎尼酸(10)、4-O-咖啡酰奎尼酸(11)和绿原酸(12)。结论:化合物1～4为首次从灯盏花中分离得到。

基于谱效关系的灯盏细辛体外抗血小板聚集活性成分研究

目的通过生物活性检测结合化学指纹图谱分析,探索灯盏细辛抗血小板聚集的活性成分。方法采用UPLC-UV分析技术建立不同批次灯盏细辛药材化学指纹图谱,对不同批次灯盏细辛进行抗血小板聚集活性效价检测,基于谱效关系推测可能的活性物质,并对5个高相关性成分进行体外抗血小板聚集作用的验证,根据5种单体化合物在灯盏细辛中的含量差异,计算5个单体化合物的相对活性贡献度。结果通过化学指纹图谱与抗血小板聚集生物效价的谱效相关分析,筛选并鉴定出与生物活性相关系数大于0.5的5个色谱峰,分别鉴定为绿原酸、咖啡酸、野黄芩苷、异绿原酸A、异绿原酸C。进一步体外实验表明5个化合物在相同质量浓度下均有不同程度的抗血小板聚集作用(抑制率16.5%~85.5%),相对活性强度顺序:野黄芩苷>异绿原酸C>咖啡酸>异绿原酸A>绿原酸;而5种成分从相对活性贡献度来看,异绿原酸C与野黄芩苷的活性贡献度大于另外3种成分。结论建立了灯盏细辛体外抗血小板聚集生物效价的检测方法;且野黄芩苷和异绿原酸C是灯盏细辛体外抗血小板聚集的主要活性成分。

灯盏细辛中咖啡酰奎宁酸防治缺血性脑卒中的研究进展

灯盏花制剂广泛地应用于脑卒中的治疗,以灯盏细辛提取物制备的药物中,咖啡酰奎宁酸类成分的数目、量都不容忽视。因此,对灯盏细辛中咖啡酰奎宁酸类成分的结构、含量、治疗缺血性脑卒中的临床报道以及对相关靶点的药理作用及其机制进行综述。灯盏细辛中已发现22个咖啡酰奎宁酸类化合物,占所有报道的灯盏细辛中化合物的29%;总多酚平均量为36.93%,灯盏细辛注射液中该类成分约占95%以上,高于灯盏乙素;临床研究证实灯盏细辛注射液能提高缺血性脑卒中急性期治疗的有效率,改善神经功能缺损,安全性好;药理研究显示咖啡酰奎宁酸类化合物具有抗氧化、抗自由基、抗凝血、抗炎和抗纤维化等作用,可以保护神经细胞、血管内皮细胞、神经胶质细胞、星形细胞等,抑制炎症因子白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等,提升超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,可以在缺血性脑卒中的不同治疗阶段发挥作用,是灯盏细辛中一类值得重视的化学成分。

灯盏细辛及其活性成分防治阿尔茨海默病的药理作用研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一种尚无有效治疗药物的神经退行性疾病。在多个AD模型中的研究表明,灯盏细辛及其活性成分(灯盏乙素和咖啡酰奎宁酸)能够改善/提升学习记忆能力,其作用机制主要涉及抑制β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)生成、聚集、纤维化和神经毒性、调节胆碱能神经系统、抑制氧化应激和炎症、抑制tau蛋白过度磷酸化、改善线粒体功能、抗神经细胞凋亡等。该文对灯盏细辛及其活性成分在防治AD方面的研究结果进行系统综述,以期为进一步开发灯盏细辛药用潜能提供参考资料。