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Progress in gene transfer by germ cells in mammals 被引量:4
1
作者 Yidong Niu Shulong Liang 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第12期701-714,共14页
Use of germ cells as vectors for transgenesis in mammals has been well developed and offers exciting prospects for experimental and applied biology, agricultural and medical sciences. Such approach is referred to as e... Use of germ cells as vectors for transgenesis in mammals has been well developed and offers exciting prospects for experimental and applied biology, agricultural and medical sciences. Such approach is referred to as either male germ cell mediated gene transfer (MGCMGT) or female germ cell mediated gene transfer (FGCMGT) technique. Sperm-mediated gene transfer (SMGT), including its alternative method, testis-mediated gene transfer (TMGT), becomes an established and reliable method for transgenesis. They have been extensively used for producing transgenic animals. The newly developed approach of FGCMGT, ovary-mediated gene transfer (OMGT) is also a novel and useful tool for efficient transgenesis. This review highlights an overview of the recent progress in germ cell mediated gene transfer techniques, methods developed and mechanisms of nucleic acid uptake by germ cells. 展开更多
关键词 erm cell sperm-mediated gene transfer testis-mediated gene transfer ovary-mediated gene transfer
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Cloning and Sequence Analysis of the gp41 Gene of Clanis bilineata Nuclear Polyhedrosis Virus
2
作者 ZHU Shan-ying WANG Wen-bing ZHU Jiang 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2006年第10期787-792,共6页
Clanis bilineata Nucleo Polyhedro Virus (CbNPV) was purified from Clanis bilineata larva. To obtain the molecular information of the virus, the genomic DNA of CbNPV was extracted, and a DNA fragment library of the v... Clanis bilineata Nucleo Polyhedro Virus (CbNPV) was purified from Clanis bilineata larva. To obtain the molecular information of the virus, the genomic DNA of CbNPV was extracted, and a DNA fragment library of the virus was constructed using shotgun. The positive clones were then sequenced and analyzed. An open-reading frame (ORF) that has high identity with the gp41 gene of most NPVs was found in the library. The gp41 gene of CbNPV is 933 base pair long and encodes a protein of 310 amino acids. The result of the amino acid sequence analysis showed that the CbNPV gp41 has 53-61 and 56-73% identities with Group 1 and II NPVs gp41 proteins, respectively. The result indicates that the isolated CbNPV is a novel baculovirus, and the CbNPV shares a much closer relationship Ⅱ NPVs. 展开更多
关键词 Clanis bilineata Nucleo Polyhedro Virus gp41 gene sequence analysis
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肺炎链球菌分离株红霉素耐药erm、mef基因检测研究 被引量:2
3
作者 丁云芳 糜祖煌 +2 位作者 陶云珍 亓晓 秦玲 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2003年第5期414-415,417,共3页
目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月~ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染... 目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月~ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 2 3株Sp菌 (红霉素敏感表型 3例、中敏 3例、耐药 17例 )进行检测。结果 :红霉素耐药、中敏、敏感Sp菌分别检出耐药基因 94.1% (16 17)、10 0 %、3 3 .3 % (1 3 )。ermB基因PCR检出率 43 .5% (10 2 3 ) ;ermA ermB基因通用兼并引物PCR检出率 69.6% (16 2 3 ) ;mefA基因PCR检出率 2 6.1% (6 2 3 ) ;erm或 和mef基因检出率 87.0 % (2 0 2 3 )。携带erm基因的耐药表型率 93 .3 % (14 15) ,其中单独ermA基因为 10 0 % (4 4) ;ermB +ermA B基因为 87.5% (14 16)。单独携带mef基因的耐药表型率 50 % (2 4) ,而erm或 和mef基因为 80 % (16 2 0 )。结论 :本地区Sp菌株中存在ermA、ermB和mef基因 ;三者单独或共同表达均可致Sp菌红霉素耐药 ; 展开更多
关键词 肺炎链球菌 红霉素耐药 erm基因 mef基因
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人β地中海贫血β^41/42突变基因的克隆和真核表达体系的构建 被引量:3
4
作者 唐晖 李弘剑 +5 位作者 张欣 李月琴 周天鸿 汤绍辉 张文军 程龙球 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期152-156,共5页
目的:克隆人地中海贫血基因β41/42及调控系列LCR,构建该致病基因的体外真核表达体系,为该病基因治疗的研究提供理想模型。方法:抽提β41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41/42基因,将其串连克隆至真核稳... 目的:克隆人地中海贫血基因β41/42及调控系列LCR,构建该致病基因的体外真核表达体系,为该病基因治疗的研究提供理想模型。方法:抽提β41/42纯合子患者的DNA,PCR扩增出人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41/42基因,将其串连克隆至真核稳定表达质粒pcDNA3.1-中,脂质体转染至小鼠红白血病细胞(MEL),DMSO诱导MEL细胞表达,逆转录PCR检测人β41/42基因在MEL中的表达。结果:成功构建了人β41/42突变基因的真核表达系统。结论:β41/42基因在MEL细胞中的表达情况与设计的表达完全一致,为该病的基因治疗研究提供了一个理想模型。 展开更多
关键词 地中海贫血 β^41/42突变基因 基因疗法 急性白血病 幼红细胞
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鸡传染性支气管炎病毒D_(41) 株S1基因部分序列的测定 被引量:4
5
作者 廖明 辛朝安 王林川 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期55-59,共5页
通过反转录及变退火温度PCR方法扩增出含先导序列的IBV广东地方分离株D41的S1基因cDNA,长度约1.7kb.利用双脱氧链终止法对其5′端测序,准确读到342个碱基,并确定了翻译起始密码子ATG的位置.
关键词 鸡病 传染性支气管炎 病毒 基因 测序
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转基因棉花中棉41多重PCR体系的建立 被引量:1
6
作者 徐方娇 冯俊丽 +1 位作者 梁颖 陈集双 《科技通报》 北大核心 2013年第3期51-57,共7页
利用多重PCR建立转基因棉花中棉41外源基因的检测体系。多重PCR技术的关键在于多重PCR反应条件的优化,本文从多重引物组合、PCR反应体系、PCR反应条件这三个方面对转基因棉花多重PCR反应进行优化,建立了扩增效率较高的中棉41的六重PCR... 利用多重PCR建立转基因棉花中棉41外源基因的检测体系。多重PCR技术的关键在于多重PCR反应条件的优化,本文从多重引物组合、PCR反应体系、PCR反应条件这三个方面对转基因棉花多重PCR反应进行优化,建立了扩增效率较高的中棉41的六重PCR反应体系,优化后的体系为HotstarTaq DNA聚合酶用量为1.25 U/50μL,镁离子的终浓度为3.5 mM,dNTP的终浓度为400μM,BSA(10mg/mL)的加入量为2μL,选取58℃为反应扩增的退火温度。利用优化的多重PCR体系特异性地检测到转基因棉花中棉41中的外源基因启动子CaMV 35S、终止子TNOS、报告基因NPTII和抗虫基因Cry1Ac。 展开更多
关键词 中棉41 多重PCR 检测体系
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人β地中海贫血突变基因重组载体pcDNA3.1-LCR-β^(41/42)的构建
7
作者 唐晖 李弘剑 +4 位作者 何震宇 李月琴 唐冬生 周天鸿 程龙球 《广东药学院学报》 CAS 2005年第1期60-63,共4页
目的构建人β地中海贫血突变基因β41 /42及具有调控功能的基因座控制区(LCR)重组载体,为该病基因治疗的体外细胞模型和转基因小鼠模型的建立奠定基础。方法抽提β41 /42纯合子患者的DNA,PCR扩增人β珠蛋白基因座控制区 (LCR)和β41 /4... 目的构建人β地中海贫血突变基因β41 /42及具有调控功能的基因座控制区(LCR)重组载体,为该病基因治疗的体外细胞模型和转基因小鼠模型的建立奠定基础。方法抽提β41 /42纯合子患者的DNA,PCR扩增人β珠蛋白基因座控制区 (LCR)和β41 /42基因,将其串联克隆至pcDNA3. 1 中,酶切及测序鉴定重组载体。结果所构建的重组载体中含人β珠蛋白基因座控制区(LCR)和β41 /42基因,测序结果及引入方向正确。结论成功构建了含 5. 5kgβ珠蛋白基因座控制区(LCR)的β41 /42人重型地中海贫血基因的重组载体。 展开更多
关键词 地中海贫血 巢式PCR β^41/42基因 pcDNA3.1- 重组载体
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红霉素抗性基因ermE在链霉菌中的表达及抗性测定 被引量:3
8
作者 金慧怡 张惠展 《上海师范大学学报(自然科学版)》 2006年第2期80-84,共5页
红霉素抗性基因ermE编码一种甲基化酶,可以对50S核糖体亚基上的23S rRNA进行甲基化修饰.甲基化作用可能引起核糖体构型变化,阻碍红霉素与50S核糖体亚基的结合,从而使宿主获得抗性.研究中将来自红色糖多孢茵(Saccharopolyspora erythra... 红霉素抗性基因ermE编码一种甲基化酶,可以对50S核糖体亚基上的23S rRNA进行甲基化修饰.甲基化作用可能引起核糖体构型变化,阻碍红霉素与50S核糖体亚基的结合,从而使宿主获得抗性.研究中将来自红色糖多孢茵(Saccharopolyspora erythraea)的ermE基因克隆到链霉菌高拷贝表达载体pUWL201和pIJ6021上组成型启动子ermEp和硫链丝菌素诱导型启动子PtipA的下游,构建出了链霉菌表达质粒pKIM4,pKIM7和pKIM8.将pKIM4,pKIM7和pKIM8分别转入S.lividans链霉菌中,每种转化子都能表现出明显的红霉素抗性,并且ermE基因在TK64/pKIM8转化子中还实现了高效表达. 展开更多
关键词 ermE基因 红色糖多孢菌 表达 最小抑菌浓度(MIC)
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Streptococcus peumoniae in an Egyptian urban community:incidence of erythromycin-resistance determinants and antibiotic susceptibility profile
9
作者 Fatma Abdelaziz Amer Eman Mohamed Elbehedy Mohamed Elahmady 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2008年第4期20-23,共4页
Objectives:To determine the incidence of resistance of Streptococcus(Strep).pneumoniae isolated in our locality to erythromycin,to screen for the two resistance determinants erm(B) and mef(A) genes,and to identify the... Objectives:To determine the incidence of resistance of Streptococcus(Strep).pneumoniae isolated in our locality to erythromycin,to screen for the two resistance determinants erm(B) and mef(A) genes,and to identify the susceptibility profile to commonly used antibiotics.Methods:Samples were collected from patients attending the Outpatient Department of Zagazig University Hospital,Zagazig,Egypt,between February 2006 and March 2007.Strep.pneumoniae was identified by conventional procedures.Susceptibilities to erythromycin and 15 antibiotics were identified by disc diffusion method,as outlined by CLSI.E-test was used for MIC determination of erythromycin.erm(B) and mef(A) genes were detected by PCR.Results:Eighty-one Strep. pneumoniae strains were identified.Fifty- one of them(63%) were erythromycin-resistant,and mef(A) gene was the predominant resistance determinant.Vancomycin,imipenem and gatifloxacin had the best activity against the isolates,whereas tetracycline had the least.Forty-two(51.85%) out of the 81 Strep.pneumoniae strains were multidrug-resistant.Conclusions:High incidence of resistance to erythromycin and multiple antimicrobials existed.mef(A) was the principal erythromycin-resistance gene. 展开更多
关键词 Strep pneumoniae ERYTHROMYCIN erm.(B) gene mef(A) gene Antibiotic RESISTANCE Egypt
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肺炎支原体红霉素耐药机制研究 被引量:25
10
作者 辛德莉 糜祖煌 +4 位作者 侯安存 秦玲 魏田力 李靖 韩旭 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期666-667,i004,共3页
目的了解肺炎支原体(MP)对红霉素耐药情况及耐药机制。方法对60例临床证实为MP感染患儿鼻咽分泌物或咽拭子标本进行分离培养,药物敏感试验筛选耐药株,进行耐药基因检测。结果60例标本中,分离阳性株5例,耐药株4例,占80%。敏感株和标准株... 目的了解肺炎支原体(MP)对红霉素耐药情况及耐药机制。方法对60例临床证实为MP感染患儿鼻咽分泌物或咽拭子标本进行分离培养,药物敏感试验筛选耐药株,进行耐药基因检测。结果60例标本中,分离阳性株5例,耐药株4例,占80%。敏感株和标准株的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,4例耐药株的23SrRNA基因发生点突变,两株突变位点在2063,G替代了A,另两株突变位点在2064,G替代了A。5株分离株erm编码的甲基化酶基因均为阴性。结论MP对红霉素有耐药株产生,4株MP红霉素耐药株的耐药分子基础是23SrRNA基因发生点突变,未发现erm编码的甲基化酶基因。 展开更多
关键词 支原体 肺炎 红霉素 药物敏感试验 23 S rtLNA点突变 erm基因
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对大环内酯类、林可酰胺类、链阳菌素抗生素耐药葡萄球菌检测 被引量:9
11
作者 叶信予 胡付品 +1 位作者 周乐 朱德妹 《中国抗感染化疗杂志》 2005年第6期339-341,共3页
目的了解复旦大学附属华山医院临床分离株中诱导型克林霉素耐药葡萄球菌的检出率及其相关耐药基因erm的分布情况。方法根据NCCLS推荐的15μg/片红霉素和2μg/片克林霉素的纸片协同试验(D试验)对90株红霉素耐药的葡萄球菌检测诱导型克林... 目的了解复旦大学附属华山医院临床分离株中诱导型克林霉素耐药葡萄球菌的检出率及其相关耐药基因erm的分布情况。方法根据NCCLS推荐的15μg/片红霉素和2μg/片克林霉素的纸片协同试验(D试验)对90株红霉素耐药的葡萄球菌检测诱导型克林霉素(iMLS)耐药;PCR检测与诱导型克林霉素耐药相关的ermA、ermC基因。结果90株红霉素耐药葡萄球菌中,56株克林霉素敏感或中敏者显示D试验阳性(iMLS型),占62.2%;另有22株克林霉素敏感者显示D试验阴性(MS型),占24.4%;12株克林霉素耐药者(cMLS型)亦显示D试验阴性,为13.4%。PCR结果显示56株iMLS型葡萄球菌均具有ermA或ermC基因,并以ermC基因为主,为91.1%(51/56)。12株cMLS型葡萄球菌中8株具有ermA或ermC基因。22株MS型均未检测到该2种基因。结论诱导型克林霉素耐药的葡萄球菌检出率为62.2%(56/90),其主要编码基因为ermC(91.1%,51/56)。临床分离株金葡菌04-17的ermA基因序列与GenBank金葡菌M661的ermA序列完全一致,可能可作为D试验阳性的质控对照株。 展开更多
关键词 葡萄球菌 D试验 erm 基因
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血流感染金黄色葡萄球菌克林霉素耐药与分子流行病学研究 被引量:5
12
作者 周珊 张蓓 +4 位作者 徐修礼 冯琳涵 刘家云 马越云 郝晓柯 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第24期3517-3519,共3页
目的了解2014年全院血流感染金黄色葡萄球菌红霉素对克林霉素诱导耐药基因情况及分子流行病学分析。方法收集2014年全年临床血液标本分离的金黄色葡萄球菌。以双纸片法筛选红霉素对克林霉素诱导耐药的表型。erm基因检测采用PCR方法,并用... 目的了解2014年全院血流感染金黄色葡萄球菌红霉素对克林霉素诱导耐药基因情况及分子流行病学分析。方法收集2014年全年临床血液标本分离的金黄色葡萄球菌。以双纸片法筛选红霉素对克林霉素诱导耐药的表型。erm基因检测采用PCR方法,并用spa及多位点序列分型(MLST)方法了解不同erm型分子流行情况。结果 33株金黄色葡萄球菌中MRSA分离率78.79%。且MRSA均携带有ermA基因。在7株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中,4株分别携带ermB或ermC基因。spa及MLST结果显示,该院血流感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以ST239-t030型别为主;而MSSA存在较多型别,如ST59-t437、ST398-t3625等。结论 MRSA有较高分离率,主要以ST239-t030克隆株为主。erm基因主要以ermA检出为主(86.67%)。菌株对抗菌药物耐药明显,实验室应加强对克林霉素诱导耐药的检测,以指导临床合理使用抗菌药物。 展开更多
关键词 血流感染 金黄色葡萄球菌 erm基因 流行病学 耐药性
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葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的检测和分析 被引量:5
13
作者 汤瑾 王坚镪 蒋燕群 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2008年第1期50-52,共3页
目的调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况和基因型特征。方法收集我院2004年分离到的70株红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株,双纸片法做克林霉素诱导耐药(D试验),PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC和msrA基因。... 目的调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况和基因型特征。方法收集我院2004年分离到的70株红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株,双纸片法做克林霉素诱导耐药(D试验),PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC和msrA基因。结果70株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药32株(45.7%)。基因型分别是ermA1株,ermC33株,msrA18株,ermC+msrA5株,全部阴性的13株。结论我院葡萄球菌克林霉素诱导耐药率较高,且存在多种基因型,应提高对诱导耐药葡萄球菌的监测和控制。 展开更多
关键词 克林霉素 葡萄球菌 D试验 erm基因 msrA基因
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杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因的检测 被引量:5
14
作者 张征 孙静娜 +2 位作者 王政民 李亚威 赵建宏 《现代中西医结合杂志》 CAS 2010年第1期24-26,共3页
目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL... 目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL基因进行检测,分析PVL基因阳性MRSA的ermA/B/C检出率。结果45株MRSA中有33株检出ermA/B/C,检出率为73%(33/45);有12株检出PVL基因,检出率为27%(12/45);12株PVL基因阳性MRSA中有9株检出ermA/B/C,检出率为75%(9/12);33株PVL基因阴性MRSA中仅24株检出ermA/B/C,检出率为73%(24/33)。结论PVL基因阳性与PVL基因阴性MRSA的ermA/B/C检出率基本一致,MRSA的重要致病基因——PVL的产生可能与红霉素耐药基因ermA/B/C无关。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 红霉素耐药基因 erm基因 杀白细胞毒素基因 PVL基因
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葡萄球菌对克林霉素诱导耐药表型及基因型检测研究 被引量:5
15
作者 贾伟 赵志军 +1 位作者 杨晓燕 魏军 《分子诊断与治疗杂志》 2010年第2期94-97,共4页
目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素诱导克林霉素耐药状况和基因型特征。方法收集我院2005~2007年分离到的350株葡萄球菌采用K-B法做药敏试验,对红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株做D试验检测,PC... 目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素诱导克林霉素耐药状况和基因型特征。方法收集我院2005~2007年分离到的350株葡萄球菌采用K-B法做药敏试验,对红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株做D试验检测,PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC、msrA、msrB和linA/linA’基因。结果350株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药64株,D试验阳性为18.3%。基因型分别是ermA9株、ermB2株、ermC48株、msrA7株、msrB11株、全部阴性的5株、linA/linA’64株、ermC+msrB7株。结论红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。 展开更多
关键词 葡萄球菌属 erm基因 msrA基因 linA/linA’基因
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伪狂犬病病毒宿主关闭蛋白的基因克隆及结构分析 被引量:1
16
作者 马相如 胡勤芹 +3 位作者 肖少波 方六荣 刘正飞 陈焕春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-71,共7页
为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST ... 为研究伪狂犬病病毒 (pseudorabiesvires ,PRV)UL4 1基因编码的病毒宿主关闭蛋白 (VHS)的结构与功能 ,通过PCR扩增得到含UL4 1基因完整编码区的 1174bp片段 ,将该片段克隆到表达载体pGEX KG中GST下游 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中实现了GST VHS融合蛋白的高效表达 .序列分析发现VHS蛋白具有 4个保守区 ,并且第 3个保守区与核酸内切酶结构域FEN 1(1A76 )高度同源 .PROSPECT软件预测的伪狂犬病病毒VHS蛋白三维结构中含有 10个α螺旋和 2 2个β折叠 ,与单纯疱疹病毒Ⅰ型的VHS蛋白三维结构十分相似 . 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒(PRV) 病毒宿主关闭蛋白(VHS) UL41基因 结构分析
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多重交叉置换扩增联合羟基萘酚蓝检测脓肿分枝杆菌方法的建立 被引量:3
17
作者 尹树鹏 钱城 +4 位作者 言晨绮 李马超 刘海灿 李相新 万康林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期40-44,49,共6页
目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方... 目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方法进行初步评价。结果建立的MAB-MCDA-HNB检测限为100 fg的DNA模板。31株细菌菌株中,只有脓肿分枝杆菌检测结果为阳性,其它细菌包括结核分枝杆菌,卡介苗,马赛分枝杆菌、鸟分枝杆菌等非结核分枝杆菌和金黄色葡萄球菌等均为阴性。脓肿分枝杆菌模拟痰标本检测灵敏度为1.7×10~3 CFU/mL(每次反应17 CFU)。结论MAB-MCDA-HNB方法能够快速准确诊断脓肿分枝杆菌的感染。 展开更多
关键词 脓肿分枝杆菌 等温扩增 erm(41)基因
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及erm基因的检测与分析 被引量:19
18
作者 宁立芬 汪玉珍 +1 位作者 张家芳 袁先厚 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期484-486,共3页
目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性及erm基因存在状况。方法采用ATB Staph药敏试验板微量肉汤法对50株金黄色葡萄球菌(SAU)进行15种抗菌药物敏感性测定,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测MRSA的erm基因。结果检出的42株MRSA对... 目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性及erm基因存在状况。方法采用ATB Staph药敏试验板微量肉汤法对50株金黄色葡萄球菌(SAU)进行15种抗菌药物敏感性测定,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测MRSA的erm基因。结果检出的42株MRSA对万古霉素、替考拉宁、夫西地酸和奎奴普汀/达福普汀均100.0%敏感;对青霉素、苯唑西林、庆大霉素、四环素、环丙沙星和左氧氟沙星100.0%耐药;42株MRSA中erm基因阳性的35株,阳性率为83.3%。结论临床分离的MRSA多药耐药性已十分严重;MRSA对红霉素的耐药机制主要是由erm基因编码甲基化酶,使药物作用靶位改变所致。 展开更多
关键词 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 耐药性 erm基因
原文传递
家蚕let-7 microRNA靶基因Bmlin-41的克隆表达与调控 被引量:1
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作者 周兰庭 周挺 +5 位作者 高君凌 王伟 吴小燕 黄亚玺 夏庆友 刘仕平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期635-647,共13页
异时性基因调控细胞增殖和个体发育阶段的转换。家蚕异时性基因在家蚕变态发育过程中也很可能具有重要的调控作用,但它们的表达模式、生物学功能以及与micro RNA之间的关系却鲜有报道。本研究首先利用果蝇同源基因lin-41搜索家蚕基因组... 异时性基因调控细胞增殖和个体发育阶段的转换。家蚕异时性基因在家蚕变态发育过程中也很可能具有重要的调控作用,但它们的表达模式、生物学功能以及与micro RNA之间的关系却鲜有报道。本研究首先利用果蝇同源基因lin-41搜索家蚕基因组数据库中相似序列,设计引物扩增Bmlin-41的编码序列,克隆了家蚕Bmlin-41基因CDS,其长度为2 166 bp,编码721个氨基酸,含有B-box和NHL结构域;随后,利用RT-PCR、q PCR技术并结合已有的家蚕全基因组芯片数据研究了Bmlin-41在家蚕中的时空表达模式,发现Bmlin-41在从家蚕胚胎到成虫的发育过程中呈逐渐递增的表达趋势,在五龄3 d不同组织中,于卵巢里表达量最高,精巢和中肠次之,而其余组织中低量表达或不表达;最后,利用3′RACE克隆了Bmlin-41基因的3′UTR,全长1 434 bp,用在线软件RNAhybrid预测发现Bmlin-41的3′UTR上存在bmo-let-7靶位点,构建了含Bmlin-41 3′UTR的双荧光素酶报告基因载体,在S2细胞上共转染Bmlin-41 3′UTR和bmo-let-7的模拟物(Mimics)和拮抗剂(Antagomir),bmo-let-7 mimics显著下调Bmlin-41,bmo-let-7 antagomir显著上调Bmlin-41,证实了Bmlin-41是bmo-let-7的靶基因。以上研究结果为深入研究let-7 mi RNA和Bmlin-41的功能,揭示Bmlin-41和bmo-let-7在家蚕变态发育过程中的调控关系提供了新的线索。 展开更多
关键词 家蚕 异时性基因 家蚕let-7 MIRNA Bmlin-41 表达模式 靶基因
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武汉市丙酸杆菌对红霉素耐药与23SrRNA点突变和携带erm基因相关
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作者 曾宪玉 姜敏 +3 位作者 付辰 董碧麟 吴卓璇 王玮蓁 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期385-388,共4页
目的探讨武汉市耐红霉素丙酸杆菌23SrRNA有无点突变以及携带ermX基因的Tn5432转座子是否转入了丙酸杆菌。方法从痤疮患者皮损中分离丙酸杆菌,E—test法检测分离株对红霉素和克林霉素的MIC值。PCR扩增耐药株23SrRNA、ermX、ermX(ei)、... 目的探讨武汉市耐红霉素丙酸杆菌23SrRNA有无点突变以及携带ermX基因的Tn5432转座子是否转入了丙酸杆菌。方法从痤疮患者皮损中分离丙酸杆菌,E—test法检测分离株对红霉素和克林霉素的MIC值。PCR扩增耐药株23SrRNA、ermX、ermX(ei)、ISl249a、ISl249b并测序,并在基因库中比较。结果19株痤疮丙酸杆菌(P.acnes)和10株卵白丙酸杆菌(P.avidum)对红霉素均表现为高度耐药(MIC均〉256μg/ml)。19株P.acnes中,16株对克林霉素高度耐药(MIC〉256μg/ml),3株敏感;10株P.avidum对克林霉素高度耐药(MIC〉256μg/ml)。19株P.acnes耐药株中,7株在相当于E.co/i23SrRNA2058位点发现由A—G点突变,均对红霉素和克林霉素高度耐药;4株在相当于E.coli23SrRNA2059位点发现由A—G点突变,其中1株对克林霉素耐药,3株敏感;另外8株P.acnes扩增errnX阳性,其序列与基因库中P.acnesermX基因100%同源。10株P.avidum中,2株ermX扩增阳性,其序列与P.aenesermX基因100%同源;另外8株扩增ermX(ei)得到预期片段PCR产物,与基因库中CorynebacteriumjeikeiumermX(ei)序列99%同源,而与P.acnesermX基因仅有94%的同源性。10株扩增ermX基因阳性的菌株扩增IS1249a和IS1249b均阳性,而其余菌株均阴性。结论武汉市耐红霉素丙酸杆菌分别由相当于E.co/i23SrRNA2058、2059由A-G点突变、携带ermX的Tn5432传人以及ermX(cj)传人丙酸杆菌引起。 展开更多
关键词 丙酸杆菌属 红霉素 克林霉素 23S RRNA 基因 erm
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