藏药二十味沉香丸的质量标准研究

目的 建立常用藏药二十味沉香丸的鉴别和含量测定方法。方法 采用薄层色谱法和高效液相色谱法。结果 建立了二十味沉香丸中沉香、马钱子、诃子、红花、降香等药材的薄层色谱鉴别方法 ,并采用HPLC测定了该藏药制剂中诃子等药材中的有效成分没食子酸的含量 ,其回归方程为 :A =5 0 2 0 5C - 10 4 18(r=0 .9995 ) ,没食子酸的平均回收率为 10 0 6 4 % ,RSD =1 13% (n =5 )。结论 鉴别与含量测定方法简便、准确 ,可用于二十味沉香丸的质量控制。

基于旷场实验探究二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠的调节作用

目的:观察二十味沉香丸对卒中后创伤后应激障碍(post traumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠的调节作用。方法:将42只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、二十味沉香丸组、帕罗西汀组。正常组及假手术组每组6只,模型组、二十味沉香丸组及帕罗西汀组每组10只。造模后2周,每天分别给予相对应的药物或生理盐水进行灌胃,静养1周后进行旷场实验,检测各组间大鼠行为学变化。结果:运动总距离、穿格次数,模型组与正常组比较差异有统计学意义(P<0.05);运动总距离、穿格次数、直立次数、直立时间、修饰次数及修饰时间,模型组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);运动总距离、穿格次数、直立次数及直立时间,二十味沉香丸组与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05);运动总距离、穿格次数及直立次数,帕罗西汀组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠焦虑样行为具有一定的改善作用。

二十味沉香丸调控糖尿病肾病大鼠肠道菌群益生菌构成的机制研究

目的分析二十味沉香丸调控糖尿病肾病大鼠肠道菌群益生菌构成的机制。方法选取50只SPF级8~10周龄雄性SD大鼠,10只作为对照组,其余40只建立糖尿病肾病模型,之后将40只大鼠随机分为模型组、二十味沉香丸低剂量组、二十味沉香丸中剂量组、二十味沉香丸高剂量组各10只。建模成功后开始灌胃,对照组、模型组给于3 ml生理盐水,二十味沉香丸低剂量组给予生理盐水+0.5 g/kg二十味沉香丸,二十味沉香丸中剂量组给予生理盐水+1 g/kg二十味沉香丸,二十味沉香丸高剂量组给予生理盐水+2 g/kg二十味沉香丸。观察每组肝功能指标、炎症因子表达水平、肠道菌群多样性与丰富度、p38丝裂素活化蛋白激酶(p38MAPK)通路蛋白表达量。结果与对照组相比,模型组、二十味沉香丸低剂量组、二十味沉香丸中剂量组、二十味沉香丸高剂量组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、p38MAPK、磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(P-CREB)、纤维连接蛋白(FN)通路蛋白升高,AST/ALT水平、OTU数量、chaol指数、shannon指数、simpson指数降低(P<0.05);与模型组相比,二十味沉香丸低剂量组、二十味沉香丸中剂量组、二十味沉香丸高剂量组AST、ALT、hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、p38MAPK、P-CREB、FN通路蛋白降低,AST/ALT水平、OTU数量、chaol指数、shannon指数、simpson指数升高(P<0.05);与二十味沉香丸低剂量组相比,二十味沉香丸中剂量组、二十味沉香丸高剂量组AST、ALT、hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、p38MAPK、P-CREB、FN通路蛋白水平降低,AST/ALT水平、OTU数量、chaol指数、shannon指数、simpson指数升高(P<0.05);与二十味沉香丸中剂量组相比,二十味沉香丸高剂量组AST、ALT、hs-CRP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、p38MAPK、P-CREB、FN通路蛋白水平降低,AST/ALT水平、OTU数量、chaol指数、shannon指数、simpson指数升高(P<0.05)。结论高剂量二十味沉香丸可改善大鼠肝功能,缓解机体炎症反应,维持肠道菌群益生菌稳定。

二十味沉香丸对垂体后叶素致大鼠心肌缺血的保护作用

目的探讨二十味沉香丸对垂体后叶素诱导的大鼠心肌缺血的影响。方法给予大鼠舌下静脉iv垂体后叶素后,观察大鼠心电图T波、ST段的改变,测定左心室等容期压力最大变化速率、左心室舒张末压、左心室收缩压、平均动脉压和血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性。结果二十味沉香丸能显著改善心肌缺血大鼠ST段和T波的变化,增加心肌收缩力,降低血清中LDH和CK的活性,且呈剂量、时间依赖性。结论二十味沉香丸对垂体后叶素致大鼠心肌缺血损伤具保护作用。

二十味沉香丸质量控制标准优化

本研究通过建立藏药二十味沉香丸的新型质量控制标准体系,为生产企业质量控制与临床安全使用提供参考。用单因素实验优化没食子酸提取工艺,以高效液相色谱法对其进行定量检测并以薄层色谱法对制剂没食子酸成分进行定性分析。结果显示,薄层色谱所得斑点清晰,分离度好;提取工艺和HPLC色谱条件优化后,在0.1~0.5mg/mL浓度区间内,没食子酸浓度与HPLC峰面积值呈现y=5979576x+27982的稳定线性关系,r^2值为0.999;方法学实验误差在允许范围内,没食子酸成分在24h内无明显变化。此方法作为二十味沉香丸质量控制标准,专属性强,定量准确。

二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为学及5-HT1AR的调节作用探析

目的:探究藏药二十味沉香丸对卒中后PTSD模型大鼠行为和5-HT1AR的调节作用。方法:将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、二十味沉香丸组、帕罗西汀组。每组各12只。造模后未达到观察时点死亡的大鼠排除本研究,筛选出符合条件的大鼠并通过随机抽样原则补齐动物。造模后每天分别给予相应的药物或生理盐水进行灌胃,灌胃2周后采用旷场实验检测各组剩余大鼠行为学变化。每组各取6只,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测海马组织中5-HT1AR基因和蛋白水平的变化。结果:与假手术组相比较,模型组运动总距离(P<0.01)、单次最大运动距离(P<0.05)、穿格次数(P<0.01)、直立次数(P<0.01)、直立时间(P<0.01)、修饰时间(P<0.01)、修饰次数(P<0.05)减少差异有统计学意义,5-HT1AR基因(P<0.05)及蛋白表达水平下降;与模型组相比较,二十味沉香丸组运动总距离(P<0.05)、穿格次数(P<0.05)、直立时间(P<0.05)、直立次数(P<0.01)增加差异具有统计学意义,且5-HT1AR的基因(P<0.05)及蛋白水平表达升高;与模型组相比较,帕罗西汀组穿格次数(P<0.05)、运动总距离(P<0.05)、直立时间(P<0.05)增加差异具有统计学意义,5-HT1AR的基因(P<0.01)及蛋白表达水平升高。结论:本实验成功复制了卒中后PTSD模型,所选取的中药二十味沉香丸能在一定程度上改善卒中后PTSD模型大鼠的焦虑样行为,其效用与西药帕罗西汀类似,且作用机制可能与调节5-HT1AR有关。

藏药二十味沉香丸的安全性评价

建立了高效液相色谱法测定二十味沉香丸中的马钱子碱和士的宁，并结合急性动物试验评价本品的安全性。采用Waters Sunfire色谱柱，以甲醇：0．15％三乙胺液（以冰乙酸调至pH6．3）（25：75）为流动相，检测波长254nm。马钱子碱和士的宁的线性范围为5～100和10～100μg／ml，回收率为97．35％（RSD 0．48％）、97．47％（RSD 0．55％）。6批二十味沉香丸中马钱子碱和士的宁含量范围为0．0422～0．2351mg／g和0．0674～0．5242mg／g。通过小鼠急性毒性试验测得本品的最大给药量为30．7g／kg，相当于拟推荐成人日口服剂量的230倍。表明本品单次给药后，安全风险较小。