藏药二十五味鬼臼丸对去势大鼠血清性激素及骨转换标志物的影响

目的探究藏药二十五味鬼臼丸对去势大鼠血清性激素及骨转换标志物的影响。方法将36只SD大鼠随机分为给药组、模型组及假手术组,给药组和模型组做卵巢摘除手术。术后两周开始灌胃给药,给药组予二十五味鬼臼丸混悬液(400mg/kg),模型组和假手术组予蒸馅水,每日1次,持续12周。用微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测右侧股骨近端结构、扫描电子显微镜(SEM)观测股骨微结构;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b),血清骨形成标志物骨碱性磷酸酶BALP,血清E,、LH、FSH。结果Micro-CT和SEM显示,藏药二十五味鬼臼丸能显著改善去势骨质疏松症大鼠模型的股骨近端骨微结构和骨小梁密度;Pearson相关性分析显示,血清E_(2)水平与TRAP5b水平呈负相关,与BALP水平呈正相关;血清FSH、LH水平与BALP水平呈负相关。结论藏药二十五味鬼臼丸对去势大鼠血清性激素的影响:升高血清E,激发机体下丘脑-垂体-卵巢轴(HPO)上游的LH、FSH反馈调节;对骨转换标志物的影响:降低血清TRAP5b含量同时升高血清BALP含量,可改善骨代谢失衡,进而改善骨微结构。

藏药二十五味鬼臼丸定性定量方法研究

目的:建立藏药二十五味鬼臼丸的定性定量方法。方法:采用 TLC 法对二十五味鬼臼丸中的沉香、河子进行鉴别;采用RP—HPLC 法,Symmetry C_(18)色谱柱(150mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(60:40)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长为343nm,柱温30℃,进样量10μL,对二十五味鬼臼丸中的胡椒碱进行含量测定。结果:薄层斑点清晰,专属性强;胡椒碱浓度在2.24～11.2μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9991),平均回收率(n=6)为97.4%(RSD 为1.7%)。结论:该方法快述、简单、准确,重复性好,可有效控制二十五味鬼臼丸的质量。

二十五味鬼臼丸体外的抑菌作用

目的考察藏药二十五味鬼臼丸的体外抑菌作用。方法采用M-H琼脂平板、PDA琼脂平板和微量稀释法检测藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853,枯草杆菌、耐药表皮葡萄球菌、白色念珠球菌、非耐药金黄色葡萄球菌、腊状芽孢杆菌、粪肠球菌的抑菌圈和最小抑菌浓度(M IC)。结果对耐药表皮葡萄球菌等9种常见革兰阳性和阴性菌都有明显的体外抑菌作用;不同溶剂药液的抑菌活性具有明显差异。结论二十五味鬼臼丸对临床分离菌株白色念珠球菌和耐药表皮葡萄球菌有较强的抑制作用,具有较高的临床应用价值。

二十五味鬼臼丸的植物雌激素样作用及其对雌激素受体的调控

目的探讨二十五味鬼臼丸对围绝经期综合征大鼠模型植物雌激素样作用及其对雌激素受体的调控。方法采用切除双侧卵巢的方法构建围绝经期综合征大鼠模型,将60只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组和二十五味鬼臼丸组,每组15只。围绝经期综合征模型建立成功后,假手术组和模型组给予等容量生理盐水,雌二醇组给予0.1 mg/kg戊酸雌二醇,二十五味鬼臼丸组给予0.36 g/kg二十五味鬼臼丸,隔日灌胃,连续8周。计算子宫指数(UI),ELISA检测血清雌二醇(E_(2))、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)水平,RT-qPCR检测子宫组织中雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot及免疫荧光染色法检测子宫ERα、ERβ蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组子宫指数、血清E_(2)水平降低(P<0.01),LH、FSH水平升高(P<0.01),子宫ERα、ERβmRNA及蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,二十五味鬼臼丸组子宫指数、血清E_(2)水平升高(P<0.01),LH、FSH水平降低(P<0.05),ERβmRNA及蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),子宫ERαmRNA及蛋白表达无明显变化(P>0.05)。结论二十五味鬼臼丸在子宫组织中选择性上调ERβ的表达,对ERα无明显影响,表明其具有选择性雌激素受体调节剂作用,而选择性雌激素受体调节作用可能是二十五味鬼臼丸有效改善围绝经期综合征的分子机制之一。

二十五味鬼臼丸治疗育龄期妇女排卵期出血30例

目的探讨二十五味鬼臼丸治疗排卵期出血的临床疗效。方法随机抽取2007年11月至2012年6月在妇科门诊患者。采用二十五味鬼臼丸,口服1次1g,1日三次,连服3个月,观察临床疗效。结果 30例排卵期出血患者,治愈13例,有效15例,总有效率为93.3%。结论二十五味鬼臼丸治疗排卵期出血,有效率较高,相对于服用雌激素疗法,不良反应小,值得临床推广应用。

二十五味鬼臼丸激活PI3K/Akt/mTOR介导的自噬缓解去势大鼠骨质疏松作用

目的:探讨二十五味鬼臼丸通过激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路抑制过度自噬防治绝经后骨质疏松(PMOP)症的作用机制。方法:将雌性SD大鼠通过手术去势,随机分为假手术(Sham)组、手术(OVX)组、二十五味鬼臼丸(GJ)组、盐酸雷洛昔芬(RLX)组,每组10只。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)、比色法检测血清中雌激素、骨代谢标志物和胫骨组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,流式细胞术检测骨髓间充质干细胞内活性氧(ROS)水平,马松(Masson)染色观察胫骨近端病理变化,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)观察胫骨微结构参数变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胫骨组织中自噬效应蛋白(Beclin1)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)、微管相关蛋白5(Atg5)、PI3K、Akt、mTOR的表达情况。结果:与Sham组比较,OVX组大鼠血清雌二醇(E_(2))、钙离子(Ca^(2+))及骨组织T-SOD、GSH-Px、PI3K、Akt、mTOR mRNA明显下降(P<0.05,P<0.01);胫骨内骨密度(BMD)、骨表面积和骨体积比(BS/BV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁连接性(Con)明显下降(P<0.05,P<0.01),骨骺生长板较薄,骨髓腔内充满脂肪空泡;磷(P)、MDA、ROS和Beclin1、LC3、Atg5 mRNA、蛋白水平及骨小梁分离度(Tb.Sp)明显升高(P<0.05,P<0.01)。与OVX组比较,GJ、RLX组大鼠血清E_(2)、Ca^(2+)及骨组织SOD、GSH-Px、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平明显上升(P<0.05,P<0.01);胫骨内BMD、BS/BV、Tb.Th、Tb.N、Con明显升高,骨骺生长板相对增厚,骨髓腔内脂肪空泡明显减少(P<0.05,P<0.01);P、MDA、ROS、Beclin1、LC3、Atg5 mRNA、蛋白及Tb.Sp水平明显降低(P<0.05,P<0.01);p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR信号通路,在OVX组中显著降低(P<0.01),在GJ、RLX组中显著增高(P<0.01)。结论:二十五味鬼臼丸降低氧化应激抑制自噬,防治绝经后骨质疏松,其机制可能激活PI3K/Akt/mTOR信号通路从而抑制自噬有关。

二十五味鬼臼丸联合头孢曲松钠治疗慢性盆腔炎的临床研究

目的观察二十五味鬼臼丸联合头孢曲松钠治疗慢性盆腔炎的临床疗效。方法选取中国人民解放军第四五七医院2016年1月—2016年12月收治的慢性盆腔炎患者106例,随机分为对照组和治疗组,每组各53例。对照组患者静脉滴注注射用头孢曲松钠,2 g加入生理盐水250 m L,1次/d;治疗组在对照组的基础上口服二十五味鬼臼丸,5丸/次,2次/d。两组患者均治疗2周。评价两组患者临床疗效,同时比较治疗前后两组患者临床症状评分和炎症因子指标水平。结果治疗后,对照组临床有效率为73.58%,显著低于治疗组的90.57%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组腹坠痛、白带增多、白带异味和月经异常评分均显著降低,同组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗组上述临床症状评分明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组超敏C反应蛋白(hs-CRP)和白细胞介素-6(IL-6)水平均显著降低,同组比较差异具有统计学意义(P<0.05);且治疗组比对照组降低更明显(P<0.05)。结论二十五味鬼臼丸联合头孢曲松钠治疗慢性盆腔炎疗效确切,不良反应较轻,具有一定的临床推广应用价值。

基于下丘脑-垂体-卵巢轴探讨藏药二十五味鬼臼丸对绝经后骨质疏松症大鼠的干预作用

目的基于下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)探讨藏药二十五味鬼臼丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只SD雌性未孕大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、二十五味鬼臼丸组,每组10只。除假手术组仅摘取卵巢旁同样大小的脂肪块,其余3组大鼠均摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)大鼠模型。手术1周后开始给药处理,雌二醇组ig0.1mg/kg戊酸雌二醇,二十五味鬼臼丸组ig441mg/kg二十五味鬼臼丸,假手术组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续12周后,ELISA法检测血清雌二醇、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)水平;RT-PCR检测下丘脑、垂体、左侧股骨远端雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)m RNA表达;免疫荧光染色法检测下丘脑、垂体和右侧股骨远端ERα、ERβ蛋白表达;HE染色法观察大鼠右侧股骨远端组织形态变化;Micro-CT检测右侧股骨远端微结构的改变。结果藏药二十五味鬼臼丸能显著降低大鼠体内血清LH、FSH、GnRH水平(P<0.05、0.01),并在HPOA轴中显著性上调下丘脑及垂体ERαm RNA及蛋白表达(P<0.01),同时显著性上调股骨ERβm RNA及蛋白表达(P<0.01),并能显著回调大鼠股骨密度及骨微结构参数(P<0.01)。结论藏药二十五味鬼臼丸可有效防治PMOP,其机制可能与药物直接作用骨组织雌激素受体或作用HPOA轴靶器官相关雌激素受体后,通过改变体内性激素的水平间接调控骨代谢有关。

藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制研究

目的研究藏药二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌的抑菌作用,初步探讨相关抑菌机制。方法采用琼脂平板打孔法,测定二十五味鬼臼丸(50、100、200 mg·mL^(-1))对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小。通过微量肉汤稀释法,测定最小抑菌浓度(MIC)。调整肉汤培养基中的二十五味鬼臼丸浓度为0.5MIC、1.0MIC和2.0MIC,分别加入1.0×108CFU·mL^(-1)菌悬液,以不含药液而含菌量相同的培养基作为对照组,在37℃、120 r·min^(-1)恒温培养箱中振荡培养,每小时取样,用紫外可见分光光度计在600 nm处测定吸光度(A600)值,绘制细菌的生长曲线;每2小时取样,离心取上清液,试剂盒法测定碱性磷酸酶(AKP)活性;每小时取样,离心取上清液,用紫外可见分光光度计在_(260) nm处测定A_(260)值,以A_(260)值表示DNA/RNA大分子相对量;每小时取样,离心取上清液,加入考马斯亮蓝G250溶液,于595 nm处测定A595值,检测胞外可溶性蛋白含量;培养8 h后,离心留沉淀,进行SDS-PAGE电泳,检测菌体蛋白含量。结果二十五味鬼臼丸50、100、200 mg·mL^(-1)对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为(12.33±0.75)、(16.33±0.41)、(19.17±0.68)mm;对金黄色葡萄球菌的MIC为100 mg·mL^(-1);与对照组相比,二十五味鬼臼丸组的金黄色葡萄球菌生长显著减缓(P<0.05),胞外的AKP活性显著升高(P<0.05),胞外DNA/RNA大分子相对量显著升高(P<0.01),胞外可溶性蛋白含量显著升高(P<0.01),菌体总蛋白表达量明显减少。结论二十五味鬼臼丸对金黄色葡萄球菌具有抑菌作用,其抗菌作用可能与致细菌细胞壁、细胞膜结构破损,且对菌体蛋白具有一定抑制作用有关。

二十五味鬼臼丸联合重组人干扰素α2a栓治疗慢性宫颈炎的临床研究

目的探讨二十五味鬼臼丸联合重组人干扰素α2a栓治疗慢性宫颈炎的临床疗效。方法回顾性分析2019年4月—2020年4月在郑州颐和医院治疗的88例慢性宫颈炎患者的临床资料,依据住院号末尾的奇偶分成对照组和治疗组,每组各44例。对照组于经期结束后睡前给予重组人干扰素α2a栓,置于阴道后穹窿,1枚/次,1次/2d,1个月经周期连用10次为1个疗程;治疗组在对照组基础上口服二十五味鬼臼丸,2丸/次,2次/d。两组患者均治疗3个月。观察两组患者临床疗效,比较治疗前后两组患者临床症状消失时间,阴道灌洗液中细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-8、IL-17、IL-10和干扰素γ(IFN-γ)含量。结果经治疗,治疗组总有效率明显高于对照组(97.73%vs81.82%,P<0.05)。经治疗,治疗组在阴道分泌物消失时间、创面愈合时间、外阴瘙痒消失时间、月经周期恢复时间、下腹疼痛消失时间均明显早于对照组(P<0.05)。经治疗,两组阴道灌洗液中IL-1β、IL-8、IL-17水平均显著下降,而IL-10、IFN-γ水平均升高(P<0.05),且治疗组改善最显著(P<0.05)。结论二十五味鬼臼丸联合重组人干扰素α2a栓治疗慢性宫颈炎可有效改善患者临床症状,降低炎性因子表达,具有一定的临床推广应用价值。

HPLC法测定藏药二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素的含量

目的:建立HPLC法并对二十五味鬼臼丸中的鬼臼毒素进行含量测定。方法:采用Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,线性梯度洗脱(0~10 min,35%乙腈;10~25 min,35%乙腈→55%乙腈;25~30 min,55%乙腈→35%乙腈),流速1.0 m L·min^(-1),检测波长290 nm,柱温30℃。结果:鬼臼毒素的线性范围为0.02~0.33μg(r=0.999 9),方法回收率(n=6)为100.5%(RSD=0.57%)。全国7个生产企业的69批次二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素含量范围为0.02~0.77 mg·g^(-1);二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素含量限度定为0.07 mg·g-1。结论:本方法制定了二十五味鬼臼丸处方中主药鬼臼中鬼臼毒素的含量限度,为该药的质量控制提供了有力的依据。

藏药二十五味鬼臼丸通过OPG/RANKL/RANK通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的干预作用

目的:探究藏药二十五味鬼臼丸通过OPG/RANKL/RANK通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的干预作用。方法:建立去卵巢骨质疏松模型,术后2周开始给药,模型组、假手术组灌胃蒸馏水,雌二醇组灌胃0.1 mg/kg戊酸雌二醇片混悬液,二十五味鬼臼丸低、中、高剂量组分别灌胃200、400、800 mg/kg二十五味鬼臼丸混悬液,1次/d,连续12周。给药后每周统计体质量,HE染色观察股骨和腰椎形态,ELISA法检测大鼠血清骨形成标志物[骨钙素(BGP)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)]和血清骨吸收标志物[Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)]水平,RT-PCR检测股骨中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA的表达水平,Western Blot检测股骨中OPG、RANKL蛋白水平。结果:与模型组比较,二十五味鬼臼丸高剂量组能够显著降低大鼠的体质量和血清CTX-Ⅰ、TRAP5b水平(P<0.01),显著降低股骨RANKL、RANK mRNA及RANKL蛋白的表达(P<0.05),显著提高大鼠血清BGP、PⅠNP、BALP水平和股骨OPG mRNA、OPG蛋白的表达(P<0.01,P<0.05)。结论:藏药二十五味鬼臼丸通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢发挥调控作用。

藏药二十五味鬼臼丸微生物限度检查方法验证

目的建立二十五味鬼臼丸的微生物限度检查方法。方法分别采用常规法、培养基稀释法和薄膜过滤法对4种阳性菌进行回收率试验。结果根据回收率试验结果,二十五味鬼臼丸有较强的抑菌作用,必须采用薄膜过滤法才能彻底消除其抑菌作用,3种细菌的回收率均能达到70%。结论二十五味鬼臼丸微生物限度检查方法的验证表明其细菌计数应按薄膜过滤法,霉菌、酵母菌数和各控制菌均可采用常规法测定。

基于Nrf2/HO-1通路探讨二十五味鬼臼丸对宫颈炎大鼠的治疗作用及机制

目的研究藏药二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆致宫颈炎模型大鼠的治疗作用及机制。方法将雌性SD大鼠48只随机分为对照组、模型组及二十五味鬼臼丸低、中、高剂量(0.2、0.4、0.8 g·kg^(-1))组和抗宫炎片(0.47 g·kg^(-1))组,每组8只。除对照组外,其余5组建立25%苯酚胶浆致宫颈炎大鼠模型,各药物组分别以相应药物ig给药,每日1次,连续给药12 d后取材。观察大鼠外阴炎症程度评分、子宫指数、子宫解剖形态学改变;采用苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠子宫组织病理学改变;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测子宫组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量变化;采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测子宫组织中核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、NADPH氧化酶4(Nox4)的m RNA和蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),体质量、SOD活性、Nrf2、HO-1的m RNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),子宫组织出现不同程度的病理变化;与模型组比较,二十五味鬼臼丸能明显降低外阴炎症评分、子宫指数、子宫组织中MDA水平、Nox4的m RNA和蛋白表达(P<0.05、0.01),升高体质量及子宫组织中SOD活性和Nrf2、HO-1的m RNA和蛋白表达(P<0.05、0.01),减轻子宫颈炎症损伤程度。结论二十五味鬼臼丸可能通过抑制Nox4的表达,激活Nrf2/HO-1通路,发挥抗氧化作用,减轻炎症反应,从而抑制宫颈炎发展。