微波消解ICP-AES法同时测定藏药二十五味松石丸中的四种金属元素

目的：建立藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素的含量测定方法。方法：采用微波消解ICP-AES法同时测定藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素。结果：藏药二十五味松石丸中的汞的含量较高,为1.54%,金含量〈0.0001%,铜和铅的含量分别为0.38%和0.001%。加样回收率为96.40%~100.60%,精密度RSD为1.36%~2.55%。结论：本法简便、灵敏、准确,可用于藏药二十五味松石丸的质量控制。

0微波消解ICP—AES法同时测定藏药二十五味松石丸中的四种金属元素

目的：建立藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素的含量测定方法。方法：采用微波消解ICP—AES法同时测定藏药二十五味松石丸中汞、金、铜和铅4种金属元素。结果：藏药二十五味松石丸中的汞的含量较高，为1．54％，金含量〈0．0001％，铜和铅的含量分别为0．38％和0．001％。加样回收率为96．40％～100．60％，精密度RSD为1．36％～2．55％。结论：本法简便、灵敏、准确，可用于藏药二十五味松石丸的质量控制。

藏药二十五味驴血丸的指纹图谱建立、含量测定及化学模式识别分析

目的:建立藏药二十五味驴血丸的指纹图谱,测定其中5种成分的含量,并进行化学模式识别分析。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)。以秦皮乙素为参照,绘制10批藏药二十五味驴血丸的HPLC指纹图谱,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》进行相似度评价,确定共有峰;同时采用相同的HPLC法测定藏药二十五味驴血丸中5种成分的含量;采用SPSS 19.0软件进行聚类分析和主成分分析。结果:10批藏药二十五味驴血丸共有11个共有峰,相似度均大于0.98;共指认了秦皮乙素、荭草苷、异牡荆素、异金雀花素和鞣花酸等5个共有峰。秦皮乙素、荭草苷、异牡荆素、异金雀花素、鞣花酸检测质量浓度的线性范围分别为1.232~11.092μg/mL(r=0.9996)、2.766~24.893μg/mL(r=0.9995)、1.400~12.600μg/mL(r=0.9998)、0.600~5.400μg/mL(r=0.9995)、49.447~445.025μg/mL(r=0.9994);精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%;平均加样回收率分别为101.29%(RSD=2.33%,n=3)、91.39%(RSD=1.22%,n=3)、90.28%(RSD=1.88%,n=3),98.76%(RSD=2.53%,n=3)、101.45%(RSD=2.84%,n=3)、100.44%(RSD=1.38%,n=3),100.91%(RSD=1.73%,n=3)、97.78%(RSD=2.07%,n=3)、99.15%(RSD=1.28%,n=3),100.27%(RSD=1.81%,n=3)、98.38%(RSD=1.89%,n=3)、101.92%(RSD=1.17%,n=3),95.50%(RSD=0.67%,n=3)、99.89%(RSD=0.38%,n=3)、100.10%(RSD=0.65%,n=3)。含量分别为0.175~0.310、0.351~0.632、0.274~0.395、0.186~0.278、6.956~8.636 mg/g。聚类分析结果显示,10批藏药二十五味驴血丸样品可聚为两类,其中S1~S4为一类、S5~S10为一类。主成分分析结果显示,两个主成分的累积方差贡献率为89.178%。结论:所建指纹图谱稳定、可行,含量测定方法简便、准确、重复性好,结合化学模式识别分析可用于藏药二十五味驴血丸的质量控制。

基于网络药理学的藏药二十五味肺病丸防治新冠病毒肺炎(COVID-19)可行性分析及机制探讨

目的采用网络药理学方法探究藏药二十五味肺病丸防治新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的可行性分析及机制探讨。方法基于课题组藏药大复方的研究经验,通过文献调研,筛选出二十五味肺病丸专属性、特征性化合物,并通过Chemical book数据库以及TCMSP数据库进行验证,确定二十五味肺病丸有效物质成分。将筛选出的成分通过Swiss Target Prediction数据库进行靶点筛选,进而运用Cytoscape软件构建药物-化合物-靶点(基因)网络进行可视化。运用CTD数据库查询与疾病COVID-19相关的靶点,找出与二十五味肺病丸共有的靶点,将共有基因导入STRING数据库生成蛋白互作网络,并通过DAVID数据库进行KEGG通路富集分析和GO功能富集分析,预测藏药二十五味肺病丸的作用机制。结果经筛选藏药二十五味肺病丸中檀香、悬钩木、山柰、红花、獐牙菜、甘草、藏木香、宽筋藤等19种药材被纳入到研究中。药材-化合物-靶点网络包含了19种药材,38个化合物和相应靶点419个。通过CTD数据库查询到COVID-19疾病相关靶点基因472个,与二十五味肺病丸共有靶点基因77个,分别为ESR1、NOS2、PPARG、PTGS2、PPARA、HMGCR、CYP17A1、NR1H4、TLR9等。通过网络拓扑和蛋白互作网络分析筛选出关键靶点涉及PTGS2、ESR1、AKT1、EGFR等。GO功能富集分析得到339条生物过程条目(BP),45条细胞组成条目(CC)和81条分子功能条目(MF)。KEGG通路富集分析筛选得到102条信号通路,包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、甲型流感、胰腺癌、T细胞受体信号通路等。结论二十五味肺病丸可能通过作用于PTGS2、ESR1、AKT1、EGFR相关靶点并通过相关肺病通路、炎症通路、免疫通路对COVID-19起到防治作用。

探讨藏药二十五味松石丸的配伍特点及其治疗肝病的核心组合成分

目的:通过初步了解二十五味松石丸的配伍特点及其治疗肝病的核心组合成分,以期为藏药方剂组方的优化及新药研发提供思路与方法。方法:本研究通过查阅《四部医典》、《新修晶珠本草》等藏医药典籍,概括二十五味松石丸中所含25味药的"味"、"性效"并分析二十五味松石丸的药"味"、"性效"的配伍特点,整理出21种常用治疗肝病的藏药方剂,统计二十五味松石丸的各成分药在21种常用治疗肝病藏药方剂中单味药的使用频次和药对配伍频次,并进行分析。结论:结果表明,二十五味松石丸是以清热药配伍为主的组方,主要治疗热性肝病,其核心组合成分为西红花和牛黄。

藏药二十五味珊瑚丸中獐牙菜藏药材名称的探讨

目的:探讨藏药二十五味珊瑚丸中獐牙菜药材名称的准确表述。方法:依据藏医药古籍及现代文献记载、现行药品标准和藏药习用品使用情况进行分析。结果:獐牙菜之名系多种藏药材的总药材名称,不能满足一药一物的要求,因此不宜在国家药品标准中使用。结论:藏药成方制剂中獐牙菜名称,应修订为桑蒂(川西獐牙菜),或甲蒂(印度獐牙菜),或帕蒂(普兰獐牙菜)。

藏药二十五味鬼臼丸通过OPG/RANKL/RANK通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的干预作用

目的:探究藏药二十五味鬼臼丸通过OPG/RANKL/RANK通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的干预作用。方法:建立去卵巢骨质疏松模型,术后2周开始给药,模型组、假手术组灌胃蒸馏水,雌二醇组灌胃0.1 mg/kg戊酸雌二醇片混悬液,二十五味鬼臼丸低、中、高剂量组分别灌胃200、400、800 mg/kg二十五味鬼臼丸混悬液,1次/d,连续12周。给药后每周统计体质量,HE染色观察股骨和腰椎形态,ELISA法检测大鼠血清骨形成标志物[骨钙素(BGP)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PⅠNP)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)]和血清骨吸收标志物[Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)]水平,RT-PCR检测股骨中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)mRNA的表达水平,Western Blot检测股骨中OPG、RANKL蛋白水平。结果:与模型组比较,二十五味鬼臼丸高剂量组能够显著降低大鼠的体质量和血清CTX-Ⅰ、TRAP5b水平(P<0.01),显著降低股骨RANKL、RANK mRNA及RANKL蛋白的表达(P<0.05),显著提高大鼠血清BGP、PⅠNP、BALP水平和股骨OPG mRNA、OPG蛋白的表达(P<0.01,P<0.05)。结论:藏药二十五味鬼臼丸通过调节OPG/RANKL/RANK信号通路对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢发挥调控作用。

基于下丘脑-垂体-卵巢轴探讨藏药二十五味鬼臼丸对绝经后骨质疏松症大鼠的干预作用

目的基于下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)探讨藏药二十五味鬼臼丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只SD雌性未孕大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、二十五味鬼臼丸组,每组10只。除假手术组仅摘取卵巢旁同样大小的脂肪块,其余3组大鼠均摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)大鼠模型。手术1周后开始给药处理,雌二醇组ig0.1mg/kg戊酸雌二醇,二十五味鬼臼丸组ig441mg/kg二十五味鬼臼丸,假手术组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续12周后,ELISA法检测血清雌二醇、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)水平;RT-PCR检测下丘脑、垂体、左侧股骨远端雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)m RNA表达;免疫荧光染色法检测下丘脑、垂体和右侧股骨远端ERα、ERβ蛋白表达;HE染色法观察大鼠右侧股骨远端组织形态变化;Micro-CT检测右侧股骨远端微结构的改变。结果藏药二十五味鬼臼丸能显著降低大鼠体内血清LH、FSH、GnRH水平(P<0.05、0.01),并在HPOA轴中显著性上调下丘脑及垂体ERαm RNA及蛋白表达(P<0.01),同时显著性上调股骨ERβm RNA及蛋白表达(P<0.01),并能显著回调大鼠股骨密度及骨微结构参数(P<0.01)。结论藏药二十五味鬼臼丸可有效防治PMOP,其机制可能与药物直接作用骨组织雌激素受体或作用HPOA轴靶器官相关雌激素受体后,通过改变体内性激素的水平间接调控骨代谢有关。

基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究藏族药二十五味松石丸改善对乙酰氨基酚致小鼠肝损伤的作用机制

该研究基于Keap1/Nrf2与TLR4/NF-κB p65信号通路研究藏族药二十五味松石丸(Ershiwuwei Songshi Pills, ESP)改善对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)致小鼠肝损伤的作用机制。将昆明小鼠随机分为空白组,模型组,二十五味松石丸高(400 mg·kg^(-1))、中(200 mg·kg^(-1))、低(100 mg·kg^(-1))剂量组和乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)组。各给药组小鼠均连续给药14 d后,除空白组外,其余各组小鼠腹腔注射200 mg·kg^(-1)APAP,12 h后收集小鼠血清与肝脏组织。通过肝脏病理切片苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining, HE),并检测小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)水平以及肝组织匀浆中谷胱甘肽(glutathione, GSH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)、总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)水平,观察与分析二十五味松石丸对APAP致小鼠肝损伤的保护作用。通过ELISA法测定小鼠血清中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白细胞介素(interleukin-1 beta, IL-1β)与(interleukin-6,IL-6)水平,Western blot法测定小鼠肝细胞核内核转录因子E2相关因子2(nuclear transcription factor E2 related factor 2,Nrf2)、细胞质kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、肝脏内Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)以及细胞核内核因子-κB p65(nuclear factor-kappa B,NF-κB p65)蛋白表达,实时荧光定量PCR测定小鼠肝脏中谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(glutamate-cysteine ligase catalytic subunit, GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶调节亚基(glutamate-cysteine ligase regulatory subunit, GCLM)、血红素氧合酶1(heme oxygenase-1,HO-1)、还原型辅酶/醌氧化还原酶[NAD(P)H dehydrogenase quinone 1,NQO-1]基因mRNA相对表达水平,初步探究藏族药二十五味松石丸改善APAP致小鼠肝损伤的作用机制。结果显示,与模型组相比,二十五味松石丸给药组小鼠肝脏病理损伤程度有所改善;血清中AST、ALT水平有所降低;肝脏中GSH、SOD、CAT、T-AOC水平有所升高,MDA、MPO有所降低;血清TNF-α、IL-6水平有所降低;小鼠肝脏细胞质Keap1、细胞核NF-κB p65表达有所减少,细胞核Nrf2表达有所增加,肝脏TLR4表达无显著性差异;GCLC、GCLM、HO-1、NQO-1等抗氧化基因mRNA相对表达量也有所增加。研究结果表明,二十五味松石丸可减轻APAP引起的氧化损伤与炎症反应,其作用机制可能与Keap1/Nrf2信号通路以及TLR4/NF-κB p65通路上的信号转导因子有关。

藏药二十五味珍珠丸中肉桂酸的含量测定及HPLC指纹图谱研究

目的:建立藏药二十五味珍珠丸的HPLC指纹图谱分析方法及肉桂酸含量测定方法。方法:采用ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长285 nm,柱温30℃。结果:肉桂酸进样量在0.156~1.404μg的范围内有良好的线性关系(r=0.999 9),平均回收率(n=9)为99.19%。19批二十五味珍珠丸中肉桂酸的含量在30.13~161.08μg·g^(-1);指纹图谱中检出15个共有峰,相似度计算结果在0.887~0.985之间,并通过聚类分析,将不同企业的19批样品分为两类。结论:该方法较好地反映了二十五味珍珠丸的化学成分信息,且操作简单,重复性好,为进行二十五味珍珠丸的质量评价提供了参考。

藏药二十五味松石丸减方对大鼠慢性肝纤维化的防治作用研究

目的:探讨二十五味松石丸减方前后对大鼠慢性肝纤维化的防治作用。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为模型组、空白对照组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片630mg/kg)、二十五味松石丸105mg/kg组、原方减朱砂103mg/kg组、原方减松石98mg/kg组、原方减朱砂和松石97mg/kg组。除空白对照组以外,其余各组大鼠皮下注射40%CCL_4橄榄油溶液连续造模8周,造模期间模型组和空白对照组灌胃等量的生理盐水,其余各组灌胃给予相应药物,8周末处死大鼠。测定大鼠血清指标谷草转氨酶(AST)、白蛋白(AL)、谷丙转氨酶(ALT)含量,采用ELISA法测定大鼠透明质酸(HA)、羟脯氨酸(HYP)、层粘连蛋白(LN)、转化生长因子-β1(TGF-β1),测定超氧化歧化酶(SOD)的水平。进行常规HE染色观察各组大鼠肝组织病理学变化,采用Masson染色观察各组大鼠肝纤维化的程度。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠血清ALT、AST、TGF-β1、HA、LN和HYP水平显著升高,AL含量明显降低。与模型组比较,二十五味松石丸105mg/kg组、原方减朱砂和松石97mg/kg组大鼠血清ALT、TGF-β1、HA、LN和HYP水平明显降低,AL含量明显升高,肝纤维化面积明显减少。结论:二十五味松石丸减方前后均对CCL_4所致大鼠慢性肝纤维化具有一定的防治作用,以二十五味松石丸组的防治作用最佳,原方减朱砂和松石组次之,原方减朱砂组、原方减松石组的防治作用均最差。

HPLC法测定藏药二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素的含量

目的:建立HPLC法并对二十五味鬼臼丸中的鬼臼毒素进行含量测定。方法:采用Shim-pack VP-ODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,线性梯度洗脱(0~10 min,35%乙腈;10~25 min,35%乙腈→55%乙腈;25~30 min,55%乙腈→35%乙腈),流速1.0 m L·min^(-1),检测波长290 nm,柱温30℃。结果:鬼臼毒素的线性范围为0.02~0.33μg(r=0.999 9),方法回收率(n=6)为100.5%(RSD=0.57%)。全国7个生产企业的69批次二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素含量范围为0.02~0.77 mg·g^(-1);二十五味鬼臼丸中鬼臼毒素含量限度定为0.07 mg·g-1。结论:本方法制定了二十五味鬼臼丸处方中主药鬼臼中鬼臼毒素的含量限度,为该药的质量控制提供了有力的依据。