基于网络药理学探讨二仙汤治疗卵巢早衰作用机制研究

目的基于网络药理学方法探讨二仙汤的功效物质基础对卵巢早衰的作用机制。方法利用TCMSP平台检索二仙汤六味中药仙茅、淫羊藿、巴戟天、知母、当归、黄柏的化学成分和作用靶点,并根据口服生物利用度以及药物相似性对潜在的生物活性成分进行筛选。利用GeneCards疾病数据库,按Gifts≥50进行筛选,获取卵巢早衰相关靶点。采用David 6.8.0数据库对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果共得出92个活性成分,对应309个靶点,与卵巢早衰疾病相关靶点27个,通过GO分析得出22条生物过程(biological process,BP)、7条细胞组分(cellular component,CC)、8条分子功能(molecular function,MF),通过KEGG通路富集得出22条信号通路,主要涉及疾病的发生、信号传导以及细胞生长3个方面。结论通过网络药理学验证了二仙汤治疗卵巢早衰具有多成分、多靶点、整体调节的特点,预测了二仙汤治疗卵巢早衰的潜在作用靶点及作用机制,为其活性成分研究和实验研究提供理论依据。

二仙汤化裁方治疗肾虚瘀阻型前列腺癌骨转移临床疗效与药理学研究

目的探讨二仙汤化裁方用于治疗肾虚瘀阻型前列腺癌伴骨转移的临床疗效、物质基础及作用机制。方法78例肾虚瘀阻型前列腺癌伴骨转移患者分为西医治疗组(全雄激素阻断治疗)和联合治疗组(加用二仙汤化裁方),服药8周后观察患者的临床疗效及中医症状积分,检测并比较患者治疗前后血清碱性磷酸酶(ALP)水平、视觉模拟疼痛评分(VAS)评定患者的骨转移疼痛情况。依托网络药理学研究检索筛选二仙汤化裁方的有效成分和作用靶标,预测其对前列腺癌骨转移的作用机制。结果治疗8周后联合治疗组较西医治疗组客观缓解率(62.5%vs27.5%)及疾病控制率(78.9%vs 39.5%)均更高。联合治疗组较西医治疗组中医症状改善更显著(13.7±6.2)分vs(8.2±5.7)分。患者的血清ALP水平、VAS较治疗前显著降低。网络药理学研究共筛得二仙汤化裁方117个活性成分及219个不同作用靶标,前列腺癌骨转移3648个疾病作用靶标,方药与疾病重合靶标162个,基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析预测出与疾病相关的多条作用通路。结论二仙汤化裁方是治疗肾虚瘀阻型前列腺癌骨转移的有效方剂,能有效改善患者临床症状。该研究预测得到二仙汤化裁方治疗痰瘀互结型前列腺癌骨转移的活性成分主要为黄酮类化合物,主要调节靶标是AKT1、MAPK1、RELA、CCND1、CDKN1A,可能通过作用于卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、人巨细胞病毒感染、PI3K-Akt、Th17细胞分化等信号通路等对前列腺癌骨转移起到治疗作用。

二仙汤对卵巢早衰模型大鼠血清炎性因子、相关生长因子及性激素水平的影响

目的分析二仙汤对卵巢早衰模型大鼠血清炎性因子、相关生长因子的影响,探讨其治疗卵巢早衰的可能作用机制。方法 60只清洁级健康雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补佳乐组、二仙汤低剂量组、二仙汤中剂量组、二仙汤高剂量组各10只。除正常组外,其余5组均采用腹腔注射顺铂建立化疗性损伤卵巢早衰大鼠模型。正常组、模型组给予0.5 mL生理盐水灌胃,补佳乐组给予0.5 mL补佳乐溶液(0.006 mg/mL)灌胃,二仙汤低剂量组、二仙汤中剂量组、二仙汤高剂量给予0.5 mL二仙汤(0.234、0.468、0.936 g/mL)灌胃,0.5 mL/次,2次/d,连续4周。比较大鼠血清炎性炎性、相关生长因子、性激素水平等变化。结果与正常组比较,模型组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)含量明显升高(P<0.01),卵巢组织血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白表达明显减少(P<0.01),血清FSH、LH含量明显升高,E_(2)含量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,补佳乐组、二仙汤组大鼠血清TNF-α、IFN-γ含量明显降低(P<0.05,P<0.01),卵巢组织VEGF、bFGF蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量明显降低,雌二醇(E_(2))含量明显升高(P<0.05,P<0.01)。与二仙汤低剂量组、二仙汤中剂量组比较,二仙汤高剂量组大鼠血清TNF-α、IFN-γ含量明显降低(P<0.05),卵巢组织VEGF、bFGF蛋白表达明显增加(P<0.05),鼠血清FSH、LH含量明显降低,E_(2)含量明显升高(P<0.05)。结论二仙汤有助于改善卵巢早衰模型大鼠性激素水平,促进卵巢功能恢复,可能与拮抗炎性反应、调节相关生长因子表达水平等因素有关。

二仙消瘿汤联合左甲状腺素钠治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎随机平行对照研究

[目的]观察二仙消瘿汤联合左甲状腺素钠治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎疗效。[方法]使用机平行对照方法,将70例门诊患者按就诊顺序号抽签方法简单随机分为两组。对照组35例左甲状腺素钠,25ug/d为开始剂量,晨空腹温水送服,4周后,针对甲状腺激素水平调整。治疗组35例二仙消瘿汤:川芎10g,仙茅9g,浙贝母、当归各12g,鹿角胶5g,熟地黄10g,仙灵脾、淮山药各15g,山萸肉6g,巴戟天10g,水煎300mL,2次/d,早晚温服;纳差加麦芽炒、谷芽炒、白术;颈前粗大加半夏法、牡蛎煅、夏枯草;面目浮肿加泽兰、泽泻、茯苓;左甲状腺素钠治疗同对照组。连续治疗1个月为1疗程。观测临床症状、甲状腺峡部厚度、TNF-α、TSH、TT3、TT4、FT3、FT4、不良反应。连续治疗3疗程(3个月),判定疗效。[结果]治疗组显效10例,稳定23例,无效2例,总有效率94.29%;对照组显效4例,稳定18例,无效13例,总有效率62.86%,治疗组疗效优于对照组(P<0.01)。甲状腺峡部厚度、TNF-α两组均明显改善(P<0.01,P<0.05),治疗组改善优于对照组(P<0.01)。TSH、TT3、TT4、FT3、FT4两组均明显改善(P<0.01);治疗组改善优于对照组(P<0.01,P<0.05)。[结论]二仙消瘿汤联合左甲状腺素钠治疗慢性淋巴细胞性甲状腺炎,疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

二仙汤对迟发性抑郁症模型大鼠脑组织脉络丛叶酸转运-海马神经发生的影响

目的探讨二仙汤治疗迟发性抑郁症(LOD)的效果及可能作用机制。方法40只雄性7~8周龄Wistar大鼠分为正常组和青年抑郁组各20只。60只20月龄雄性Wistar大鼠分为衰老组、迟发抑郁组、二仙汤组各20只。青年抑郁组大鼠采用慢性不可预计应激刺激(CUMS)6周建立抑郁模型,迟发抑郁组、二仙汤组衰老大鼠采用CUMS 6周建立LOD模型,正常组和衰老组不进行任何干预。造模的同时进行灌胃给药,二仙汤组大鼠给予二仙汤8 g/(kg·d)灌胃,正常组、青年抑郁组、衰老组、迟发抑郁组给予4 ml/(kg·d)纯净水灌胃,各组均给药6周。采用糖水偏爱实验、强迫游泳实验评估大鼠抑郁样行为,旷场实验评价大鼠自发活动能力,T迷宫实验评估大鼠认知功能;Western Blot法检测海马组织神经元核心抗原(NeuN)、巢蛋白、双皮质素(DCX)及脉络丛组织中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、叶酸α受体(FRα)、还原型叶酸转运体(RFC)、质子耦合叶酸转运体(PCFT)蛋白表达;采用免疫荧光法检测海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)/DCX双阳性细胞数及脉络丛组织中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达;ELISA法检测血浆、脑脊液、海马组织中5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)含量;采用Pearson相关分析对各组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量与海马组织中巢蛋白、DCX、NeuN蛋白表达进行相关性分析。结果与正常组比较,青年抑郁组及迟发抑郁组大鼠糖水偏爱度降低,旷场总路程、穿格次数减少,强迫游泳不动时间延长,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达均降低,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少,ZO-1、FRα蛋白表达及荧光强度减少(P<0.05或P<0.01);青年抑郁组大鼠第3、4天及迟发抑郁组大鼠第2~4天T迷宫正确率均明显降低,迟发抑郁组大鼠脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。与青年抑郁组相比,迟发抑郁组大鼠旷场总路程、穿格次数减少,第1~4天T迷宫正确率均显著降低,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达及海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数减少(P<0.05或P<0.01)。与迟发抑郁组比较,二仙汤组大鼠糖水偏爱度及旷场总路程、穿格次数均升高,强迫游泳不动时间缩短,第3~4天T迷宫正确率明显升高,海马组织NeuN、巢蛋白、DCX蛋白表达升高,海马齿状回Ki-67/巢蛋白双阳性细胞数、BrdU/DCX双阳性细胞数增加,脑脊液、海马组织中5-MTHF含量明显升高,脉络丛中ZO-1、FRα、RFC、PCFT蛋白表达及荧光强度升高(P<0.05或P<0.01)。相关性分析结果显示,脑脊液(r=0.466)和海马组织(r=0.522)中5-MTHF含量与海马组织中巢蛋白表达存在正相关(P<0.05)。结论二仙汤可改善LOD模型大鼠抑郁样行为及认知障碍,其机制可能通过减轻脑组织脉络丛结构损伤,改善脉络丛叶酸转运障碍,从而促进海马神经发生。

二仙汤对青春期肥胖雄性大鼠生长发育的早期干预作用

目的:探讨二仙汤(EXD)对青春期肥胖大鼠发育迟缓的早期干预作用。方法:采用高脂饲料喂养大鼠6周建立肥胖大鼠模型,分别以1.0、2.0、4.0g/kg EXD早期干预7周,测量体重,体长,计算Lee's指数,称睾丸重量,计算脏器系数,睾丸组织显微观察,采用放射免疫法测定血清T、E2。结果:与空白对照组对比,EXD组大鼠体重、体长、Lee's指数、睾丸重量、T均明显改善;而各组大鼠E2均无显著性差异;正常对照组和EXD组大鼠睾丸生精小管发育正常,空白对照组部分大鼠睾丸生精小管出现异常。结论:高脂饲料能抑制大鼠生长发育,而二仙汤能有效改善营养型肥胖大鼠生长发育。

二仙汤含药血清外泌体经FN1促进成骨细胞骨形成

目的:探讨二仙汤含药血清外泌体蛋白的变化及其对成骨细胞骨形成的作用。方法:对二仙汤含药血清外泌体进行提取、鉴定。体外培养MC3T3-E1成骨细胞,分为正常对照组、空白血清外泌体2.5、5μg/mL组、二仙汤含药血清外泌体2.5、5、10μg/mL组。CCK8法检测成骨细胞增殖情况;碱性磷酸酶(ALP)染色法观察成骨细胞ALP;茜素红染色观察成骨细胞矿化结节;Western blot法检测细胞中骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达。运用蛋白质组学技术对血清外泌体进行差异性蛋白分析。采用纤连蛋白(FN1)联合空白血清外泌体(3 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL、12 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL)处理成骨细胞,通过试剂盒检测成骨细胞ALP活力;Western blot法检测FN1对成骨细胞中BMP-2蛋白表达的影响。结果:与空白血清外泌体2.5μg/mL组相比,二仙汤含药血清外泌体组成骨细胞的增殖、ALP染色程度和茜素红染色程度明显升高(P<0.05或P<0.01),BMP-2的蛋白表达明显上调(P<0.05)。从血清外泌体中共鉴定到256个蛋白,其中96个蛋白属于ExoCarta外泌体蛋白质数据库。差异统计分析显示有29个蛋白表达有明显变化(P<0.05)。针对显著差异蛋白进行生物信息学分析,与差异蛋白质相关的分子功能、生物过程和信号通路主要涉及氧化还原、细胞外泌体、PI3K/AKT信号通路、补体和凝血级联反应等过程。显著差异性蛋白主要包括FN1、白蛋白(ALB)、血清对氧磷酶/芳基酯酶1(PON1)和簇蛋白(CLU)等。与空白血清外泌体5μg/mL组相比,纤连蛋白联合空白血清外泌体组(3 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL、12 nmol/L纤连蛋白+5μg/mL)成骨细胞ALP活力显著升高(P<0.01),BMP-2的蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:二仙汤含药血清外泌体促进成骨细胞骨形成与血清外泌体中的蛋白变化有关,FN1在其中发挥重要作用。