食管鳞癌细胞中ESCCAL_1对蛋白激酶磷酸化的调节作用

目的探讨ESCCAL_1在食管鳞癌中发挥功能的可能机制。方法使用人磷酸化激酶阵列试剂盒检测ESCCAL_1敲减前后EC9706细胞中相关蛋白激酶磷酸化水平,对各蛋白条带进行灰度值定量分析。结果 KD组与NC组中FAK、JNK1、Src、AMPKα1等蛋白激酶的相对磷酸化水平比值分别为2.76∶1、2.20∶1、2.15∶1、2.01∶1,表达量明显降低(P<0.05)。结论 ESCCAL_1可能通过调节相关蛋白激酶的磷酸化水平调控EC9706细胞生长。

靶向ESCCAL_1基因的siRNA纳米复合物的制备及体外对食管癌EC-9706细胞的抑制作用

目的制备装载靶向ESCCAL_1基因的siRNA纳米复合物,并考察其体外对食管癌EC-9706细胞增殖的抑制作用及对ESCCAL_1表达的影响。方法采用溶胶-凝胶法制备MSNP,通过表面修饰阳离子聚合物聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)使其带有正电荷,能够与带负电的ESCCAL_1siRNA相结合;纳米粒度仪、透射电镜测定纳米复合物的粒径和电位;凝胶电泳测定其对siRNA的包封率;MTT法检测纳米复合物体外对EC-9706细胞增殖的抑制作用;荧光显微镜观察纳米复合物中siRNA被EC-9706细胞摄取的情况;RT-PCR法检测其对EC-9706细胞中ESCCAL_1 LncRNA表达的影响。结果纳米粒度仪、透射电镜测得所合成的MSNP表面介孔直径约3~5 nm,分散性较好,尺寸较均一;能明显抑制EC-9706细胞的增殖(P<0.05),72h抑制率为(54.93±2.6)%;其装载的siRNA能被EC-9706细胞有效摄取;能有效沉默EC-9706细胞中ESCCAL_1,沉默效率为69.5%。结论采用该方法可制备包封率较高的肿瘤靶向纳米复合物,其介导的siRNA能有效抑制食管癌EC-9706细胞的体外增殖和沉默EC-9706细胞中ESCCAL_1表达。

LncRNA ESCCAL_1对食管鳞状细胞癌免疫原性细胞死亡的影响

[目的]探讨LncRNA ESCCAL_1对食管鳞状细胞癌免疫原性细胞死亡的影响。[方法]分别将食管鳞状细胞癌细胞株KYSE450、KYSE70分为shNC组和shESCCAL_1组。采用慢病毒介导的RNA干扰技术,敲减KYSE450、KYSE70细胞LncRNA ESCCAL_1后,采用流式细胞术检测钙网蛋白和细胞凋亡;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)及ATP含量。敲减ESCCAL_1的KYSE450、KYSE70细胞与DC细胞共培养后,流式细胞术检测DC细胞表面标记CD86和CD1a的表达。[结果] KYSE450、KYSE70细胞敲减ESCCAL_1后,与shNC相比,shESCCAL_1组细胞钙网蛋白阳性表达均明显升高(t=21.96、31.11,P均<0.001),KYSE450和KYSE70细胞中shESCCAL_1组细胞凋亡增加(t=18.37、5.16,P均<0.01)。在KYSE450和KYSE70细胞中,与shNC组相比,敲减ESCCAL_1组ATP释放明显增加(t=23.24、23.86,P均<0.01),HMGB1含量明显升高(t=48.69、49.97,P均<0.001)。KYSE450细胞shESCCAL_1组共培养的DC表面CD86和CD1a表达显著性增加(t=45.88、29.45,P均<0.001),KYSE70细胞shESCCAL_1组共培养的DC表面CD86和CD1a表达增加,差异有统计学意义(t=32.45、37.41,P均<0.001)。[结论]敲减LncRNA ESCCAL_1可以促进食管鳞状细胞癌的免疫原性细胞死亡。

血浆ESCCAL＿1在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(ESCC)相关的长链非编码RNA ESCCAL_1在ESCC患者血浆中的表达及临床意义。方法抽提ESCC患者及体检健康者血浆RNA,以GAPDH为内参照,实时灾光定量PCR(q RT-PCR)检测ESCC患者及体检健康者血浆中ESCCAL_1的表达水平,并分析其与ESCC患者临床病理参数的关系。结果ESCC患者ESCCAL_1的△Ct均值(4.04±1.74)低于体检健康者(5.38±1.46),差异有统计学意义(t=-3.684,P<0.01);ESCC患者ESCCAL_1上调率[66.7%(42/62)]高于体检健康者[25%(12/48),χ~2=19.777,P<0.01];但ESCCAL_1在ESCC患者不同临床病理参数中的表达水平差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论ESCCAL_1在ESCC患者及体检健康者血浆中差异表达,提示其可能参与了ESCC的发生过程。