发酵五碳糖和六碳糖产乙醇染色体整合大肠杆菌的构建

为了保证外源基因表达的稳定性,减少发酵副产物的生成,根据同源重组原理,将大肠杆菌丙酮酸甲酸裂解酶pfl基因两侧的基因片段作为同源片断,构建了带有运动发酵单胞菌丙酮酸脱羧酶基因pdc和乙醇脱氢酶基因adhB的整合重组质粒PA-pfl,用化学法转入大肠杆菌TOP10的感受态细胞,将经过氨苄青霉素筛选得到的重组子进行PCR扩增,证明pdc和adhB基因整合到了大肠杆菌的染色体基因组丙酮酸甲酸裂解酶基因pfl位点上。乙醇发酵结果表明,重组菌E.coli TOP10-pfl不但能稳定地利用葡萄糖产乙醇,也能稳定地利用木糖产乙醇,在大肠杆菌中建立了一条新的代谢糖生成乙醇的途径。

MUG－EMB快速检定大肠杆菌的方法研究

通过对不同来源的５９１株大肠杆菌的测试，其β－葡萄糖醛酸酶阳性反应占菌株总数９４．８％。与部颁法比较，对１２０个样品进行大肠杆菌检测，两法均检出大肠杆菌的有１０个样品，未检出大肠杆菌的有１０９个样品，符合率为９９．１％；对２０５株阳性对照菌在样品中检测，两法同时检出大肠杆菌１９９株，未检出６株，符合率为９７．１％。改进的ＭＵＧ－ＥＭＢ法与部颁法的准确度、灵敏性完全一致。革兰氏阳性杆菌、球菌、芽胞菌属一些菌株亦有β－葡萄糖醛酸苷酶。

再论MUG-Indole大肠杆菌检查法的研究

首次应用４甲基伞形酮βＤ葡萄糖醛酸苷（４ＭｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｉｆｅｒｙｌβＤｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，简称ＭＵＧ）检定药品中大肠杆菌获得成功，但有６％以上的大肠杆菌ＭＵＧ为阴性反应，故提出ＭＵＧ－Ｉｎｄｏｌｅ法，可将ＭＵＧ阳性、Ｉｎｄｏｌｅ阳性的大肠杆菌一次检出；对ＭＵＧ阴性、Ｉｎｄｏｌｅ阳性或ＭＵＧ阳性、Ｉｎｄｏｌｅ阴性的大肠杆菌辅以ＥＭＢ及ＩＭＶｉＣ试验，成功地解决了假阴性和假阳性的问题，提高了本法的准确性。