大肠杆菌O157∶H7生物被膜状态下基因表达分析

生物被膜是细菌适应不良环境形成的一种特殊胞外结构,当细菌从浮游状态转换成生物被膜状态后其生理代谢活动也会随之发生改变。为了研究细菌形成生物被膜后生理代谢途径的变化及生物被膜形成的分子调控机制,以食源致病性大肠杆菌O157∶H7为试验对象,对其在浮游状态和生物被膜形成状态下的转录组进行测序分析。结果表明,与浮游状态相比,大肠杆菌O157∶H7在生物被膜形成状态有1652个显著差异表达的基因(上调821个,下调831个),其中鞭毛组装、细菌趋化性和双组分系统调控蛋白基因等在生物被膜形成阶段表达上调;ABC转运系统调控蛋白基因等表达下调。同时,碳代谢、氮代谢、脂肪酸代谢等多个代谢途径也发生了变化。上述结果为深入研究生物被膜形成的分子机制提供数据支持。

饲用益生菌抑制黄羽肉鸡大肠杆菌的探究

通过体外、体内两个途径研究饲用粪肠球菌、枯草芽胞杆菌对禽大肠杆菌的抑制作用进行研究。体外采用共培养检测其对禽大肠杆菌的抑制作用,并用牛津杯法检测其抑菌效果;体内将粪肠球菌、枯草芽胞杆菌制成复合菌剂饲喂黄羽肉鸡,检测肉鸡血清抗氧化力、盲肠乳酸菌、总芽孢杆菌和大肠杆菌活菌数量来确定其对大肠杆菌的抵制作用。结果表明,体外在共培养12 h后,粪肠球菌显著地降低了大肠杆菌的数量,大肠杆菌数量由1×10^(9) CFU/ml降低至2×10^(5) CFU/ml,至36 h后,培养液中未检测出大肠杆菌。枯草芽孢杆菌具有抑制大肠杆菌能力,在培养24 h后,大肠杆菌数量由1×10^(9) CFU/ml降低至1×10^(5) CFU/ml,至36 h后,培养液中的大肠杆菌数量降低到2×10^(3) CFU/ml,至48 h后,培养液中检测不出大肠杆菌数。牛津杯法检测抑菌效果表明,在伊红美兰琼脂培养基中,粪肠球菌、枯草芽胞杆菌发酵滤液可抑制禽大肠杆菌生长,出现抑菌圈,直径分别为20.12 mm和15.54 mm。养殖试验结果表明,黄羽肉鸡按2×10^(6) CFU/g的添加量饲喂复合菌后,机体抗氧化能力显著增强,盲肠菌群中乳酸菌数量和总芽孢杆菌数量显著提高,大肠杆菌数量显著下降。粪肠球菌、枯草芽胞杆菌能显著抑制禽源大肠杆菌,可作为饲料添加剂用于肉鸡养殖。

1993-2008年禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物耐药性分析

目的了解上世纪90年代以来我国部分地区禽源大肠杆菌和沙门菌分离株对1-4代喹诺酮类药物耐药情况。方法血清型采用常规的凝集试验进行测定;药敏纸片试验采用CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法。结果344株禽源大肠杆菌分离株覆盖了27个血清型,其中O78、O2、O1和O18血清型菌株分别有141、47、27和22株,共237株,占定型菌株的68.90%;224株禽源沙门菌经血清型鉴定均为鸡白痢沙门菌。1993-1999年禽源大肠杆菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%(62.43%,113/181);2000-2008年禽源大肠杆菌分离株对1-3代9种喹诺酮类药物的耐药率均超过60%;禽源沙门菌从2000年起开始出现喹诺酮类耐药菌株,2000-2008年分离到的沙门菌对萘啶酸的耐药率达到了83.74%,但对其它喹诺酮类抗生素的耐药率相对较低。结论近20年来,我国禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,10种喹诺酮类药物之间存在着不同程度的交叉耐药性,且禽源大肠杆菌比沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性更为严重,交叉耐药情况亦更为复杂。

我国部分地区猪源大肠杆菌LEE和HPI毒力岛相关基因的检测

目的采用PCR方法检测我国江苏等9个省市部分地区分离的1 007株猪源大肠杆菌中肠细胞脱落位点毒力岛(LEE)和强毒力岛(HPI)。方法对LEE毒力岛检测其核心区的ler和eaeA基因,对HPI毒力岛检测其irp2和fyuA基因。同时对LEE和/或HPI阳性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定。结果在分离的猪源大肠杆菌中,LEE毒力岛基因检测结果为:2.2%(22/1 007)的菌株ler和eaeA基因的扩增阳性,0.5%(5/100 7)的菌株eaeA阳性。HPI毒力岛基因检测结果为:10.6%(107/1 007)的菌株irp2和fruA基因扩增阳性,2.1%(21/1007)的菌株irp2阳性;其中有2株irp2和ler基因扩增阳性,有3株irp2、ler和eaeA基因扩增阳性,1株irp2f、yuA、ler和eaeA基因扩增都为阳性;在128个HPI阳性分离株中,O93和O107血清型菌株分别占定型菌株的15.7%(13/83)和12.0%(10/83)。结论2.7%的猪源大肠杆菌携带LEE,12.7%的菌株携带耶尔森菌HPI,O93和O107为猪源HPI大肠杆菌常见血清型。

高铁酸钾消毒作用实验观察

目的 对高铁酸钾的消毒效果进行实验研究。方法 观察一定浓度高铁酸钾对不同种类微生物悬液的消毒作用。结果 10～ 4 0mg/L高铁酸钾作用 5min对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭率均为 10 0 % ,对白色念珠菌的杀灭率 >99 5 0 % ,此作用条件下未观察到其对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭作用 ;16 0mg/L高铁酸钾作用 30min未见对乙肝病毒表面抗原的灭活作用。结论 在一定作用条件下高铁酸钾对细菌繁殖体有良好的杀灭作用 ,对真菌也有一定的杀灭作用 ,但未见其对细菌芽孢及乙肝病毒表面抗原的灭活作用。

基于生物热力学表达的大青叶活性部分初筛

目的:从生物热力学角度出发,构建筛选中药活性部分的方法并探讨其可行性。方法:采用生物物理化学中较先进的微量量热方法,测定大青叶水煎液及其不同化学萃取部分对大肠杆菌的代谢影响,通过大青叶对大肠杆菌的热活性谱图(即热功率-时间曲线,P-t图)分析,得到一系列生物热力学参数。结合中医药理论分析了大青叶水煎液及其化学萃取部分的药效作用及差异。结果:大青叶水煎液对大肠杆菌的生长具有促进作用,且随着药液含量的增加,该促进作用逐渐增强。大青叶水煎液的5个化学部分对大肠杆菌生长的影响存在显著差异,其中水层部分能够刺激大肠杆菌的生长,而其他4个部分即石油醚部分、氯仿部分、醋酸乙酯和正丁醇部分对大肠杆菌的生长有不同程度的抑制作用,其抑制作用的大小依次为正丁醇部分>醋酸乙酯部分>氯仿部分>石油醚部分。结论:生物热力学的研究手段微量量热方法具有适用性广,便捷快速的优点,该方法的运用为中药的药效物质初筛提供了一个新的研究思路和方法。

牦牛大肠埃希氏菌的肠毒素试验

从自然病死牦牛体内分离出 3株大肠埃希氏 ,用改良Mundell产毒液体培养基分别培养 ,培养物经高速离心 ,过滤 ,使用滤液做兔回肠结扎试验 ,乳鼠灌胃试验和大鼠回肠环袢试验。结果表明 3株大肠埃希氏菌均产生肠毒素 ,阐明了牦牛腹泻的病因。

基于微量量热法的金银花抗菌活性部位初筛

目的从微量量热法角度出发,构建筛选中药抗菌活性部位的方法并探讨其可行性。方法以金银花为例,采用微量量热法,测定金银花不同部位对大肠杆菌的代谢影响,通过分析不同样品对大肠杆菌的热活性谱图(即热功率-时间曲线),得到一系列微量量热参数,分析金银花不同部位的药效作用及差异。结果金银花各部位对大肠杆菌的生长均具有抑制作用,且作用强弱存在显著性差异,通过主成分分析的方法,比较各部位的抗菌活性强弱。各部位抗菌作用强弱顺序为:总异绿原酸>总绿原酸>总黄酮>总环烯醚萜。结论微量量热法具有适用性广,简便快速的优点,该方法的运用为中药物质的药效初筛提供了一个新的研究思路。

可溶性重组日本血吸虫26 kDa GST的优化表达

目的探讨在大肠杆菌中表达可溶性重组日本血吸虫谷胱甘肽S-转移酶(rSj26 GST)的优化条件。方法用含有Sj26基因的原核表达载体pGEX-3X转化大肠杆菌BL21(DE3),将影响可溶性rSj26 GST表达的4个因素,即温度、诱导剂IPTG浓度、诱导时细菌的密度和诱导时间进行正交设计,确定其优化表达条件并大量表达,采用谷胱甘肽亲和层析法纯化表达的蛋白,测定酶活性,通过Western blot鉴定免疫活性。结果正交设计的直观分析和方差分析结果显示:可溶性rSj26GST最佳表达条件为温度25℃,IPTG的浓度1 mmol/L,诱导前细菌的生长密度0.9,诱导表达时间8 h。可溶性rSj26 GST纯化的产量为16 mg/L,Western blot证实rSj26 GST具有良好免疫原性和免疫反应性。结论通过正交设计确定了可溶性rSj26 GST在大肠杆菌中表达的优化条件。

改型载银树脂对水中微生物灭除效果的试验观察

经检测，改型载银树脂对２５℃、ｐＨ６．５水中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌分别作用１．５３３、１．９６２、２．０５０秒钟，灭除率均可达９９．９％以上。灭除率随ｐＨ值、作用时间增加而上升，随着水中微生物含量、有机物含量以及浊度的增高，灭菌率将显著下降。

食品中大肠杆菌O157:H7的两种检测方法研究

研究食品中大肠杆菌O157∶H7的两种检测方法,PCR法引物针对特异性粘附毒素基因(eaeA)扩增检测,双抗夹心ELISA采用鸡抗O157∶H7特异性脂多糖(LPS)抗体(IgY)检测,结果显示两种方法对纯培养物的检测灵敏度都在103～104cfu/mL之间,特异性能满足食品检测需求;PCR法的敏感度较ELISA法高,且较省时。经以牛奶为参考的食品模拟样品(37℃增菌14h)验证两种检测方法的最低检出限均为2.5cfu/25mL样品。

流式细胞术检测药物抗菌效应方法学的建立

目的 尝试建立用流式细胞术检测药物抗菌效应的新方法。方法 以碘化丙啶为荧光染料 ,用流式细胞术检测大肠埃希菌标准菌株ATCC 2 5 92 2在不同浓度头孢噻肟作用下各管平均荧光强度 ,并就最佳实验条件进行探讨。结果 细菌平均荧光强度值随着抗生素浓度的增加而增强 ,其变化具有浓度依赖性 ,较好地反映了药物的抗菌效应。结论 成功建立用流式细胞术检测药物抗菌效应的新方法 ,流式细胞术在该领域的应用 。

固定化大肠杆菌细胞生产γ-氨基丁酸的研究

用海藻酸钙包埋法将大肠杆菌细胞制成固定化细胞,与1%谷氨酸溶液进行间歇反应、连续搅拌式反应及连续柱式反应生产γ-氨基丁酸。谷氨酸溶液用0.2mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液调至pH4.4,温度37℃。间歇反应在微生物多用培养箱旋转摇床上120r/min振荡反应,每批反应6h,100%的谷氨酸可转化为γ-氨基丁酸。连续搅拌式反应在三角瓶反应器中进行,以6ml/h的流速输入底物溶液,输出反应液,转化率达85%。连续柱式反应在上部膨大、顶端开口的特殊柱反应器中进行,控制流速12ml/h,95%以上的谷氨酸可被转化成γ-氨基丁酸。

1株耐药性大肠杆菌烈性嗜菌体的分离与生物学特性分析（英文）

该试验从鸡粪样品中分离到一株耐药性大肠杆菌的烈性噬菌体，用单层琼脂微量点板法测定其嗜菌谱范围，用双层琼脂平板法对其裂解效价、最佳感染复数以及对温度、酸碱度的耐受性进行了测试。结果显示，该噬菌体嗜菌谱范围较广，对另外2株大肠杆菌呈现完全裂解，对1株大肠杆菌呈现弱裂解；对宿主菌的裂解效价为1.20×10^8 PFU/ml，最佳感染复数为1；最适温度为40℃，噬菌体效价能够达到8.90×10^9 PFU/ml，在80℃时即失去感染活性；pH 值为5～11，噬菌体效价在106～109 PFU/ml，pH值等于4，12，噬菌体则失去感染活性。

超广谱β-内酰胺酶的耐药性监测及方法的可行性研究

目的 :了解内蒙古地区ESBLs的发生率及耐药性 ,比较三种检测方法。方法 :纸片扩散初筛法、双纸片协同法、标准纸片扩散确认法。结果 :ESBLs总检出率为1 0 2 % ,双纸片协同法与确认法符合率达 97 3 % ,产ESBLs较非ESBLs株耐药性高。ESBLs株的耐药率 :IMP为 0 ;PIP/TAZ为 5 4% ;CFP/SU为 1 6 2 % ;FOX为 2 1 6 %。结论 :双纸片法简单易行 ,适合各级医院开展和推广。治疗ESBLs菌的感染 ,首选碳青霉烯类 ;对部分 β-内酰胺酶抑制剂复合物、头霉烯类有良好的作用。

单过硫酸氢钾的复合钠盐的杀菌消毒效果的应用研究

浓度为10～60mg/L单过硫酸氢钾的复合钠盐对不同种类微生物悬液的作用5min,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭率均为100%,对白色念珠菌的杀灭率大于99.50%,此作用条件下未观察到其对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭作用;160mg/L单过硫酸氢钾的复合钠盐作用30min未见对乙肝病毒表面抗原的灭活作用。在一定作用条件下单过硫酸氢钾的复合钠盐对细菌繁殖体有良好的杀灭作用,对真菌也有一定的杀灭作用,但未见其对细菌芽孢及乙肝病毒表面抗原的灭活作用。

大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性

目的了解内蒙古地区大肠埃希菌ESBLs的发生率及耐药性,比较三种检测方法。方法纸片扩散初筛法、双纸片协同法、标准纸片扩散确认法。结果大肠埃希菌ESBLs总检出率为10.8%,双纸片协同法与确认法符合率达96.2%,产ESBLs较非ESBLs株耐药性高。ESBLs株的耐药率:IMP为0.0%;PIP/TAZ为4.0%;CFP/SU为20.0%;FOX为24.0%。结论双纸片法简单易行,适合各级医院开展和推广。治疗ESBLs菌的感染,首选碳青霉烯类;对部分β-内酰胺酶抑制剂复合物、头霉烯类有良好的作用。

应用DNA芯片技术筛选禽致病性大肠杆菌和尿道致病性大肠杆菌的差异表达基因

为研究禽致病性大肠杆菌强毒株E058的毒力相关基因在鸡体内、体外表达情况以及E058和尿道致病性大肠杆菌HEC4在LB和尿液中培养的表达情况,本研究分别提取E058株在SPF鸡体内及E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养的总RNA,与构建的DNA芯片杂交,检测和分析RNA的差异表达情况。芯片的检测结果表明:E058株在鸡体内和LB中培养差异表达基因共有9个,上调基因为5个,分别为neuC、iutA、cvaC、aes-15和iucCD;下调基因为4个,分别为aes-8、gyrB、aec-30和mdh。另外,芯片检测结果也显示E058株和HEC4株在LB和尿液中静置培养,具有相似的基因表达情况。

合肥地区产超广谱β-内酰胺酶菌株的分布及药敏分析

目的 了解合肥地区产超广谱 β 内酰胺酶 (ESBL)的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌分布及耐药特点。方法 应用纸片扩散法对合肥地区 4家较大的综合性医院从临床标本中分离的 2 5 4株肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌进行ESBL的确诊试验。结果 2 5 4株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出6 9株产ESBL菌株 (2 7 2 % ) ,其中 ,血液感染ESBL检出率为 5 4 5 % (6 / 11)、烧伤科ESBL的检出率为 48 6 % (18/ 37)。亚胺硫霉素对产ESBL的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的敏感率分别为 94 5 %和 80 %。头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /他唑巴坦和头孢西丁对产ESBLs的大肠埃希菌和产ESBLs的肺炎克雷伯菌的敏感率在 40 %～ 70 %之间 ,阿米卡星对产ESBL的大肠埃希菌的敏感率为 6 9 2 %。结论 ESBL在血液感染和烧伤科标本中的检出率较高。治疗产ESBL菌株引起的感染可首选亚胺硫霉素 ,其次 ,选含酶抑制剂的复方制剂和头霉素类。对产ESBL的大肠埃希菌也可选阿米卡星。

大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶的定位突变及突变酶的动力学性质

利用人工合成的寡核苷酸探针,将编码大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)的Lac Z基因中537位Glu密码子GAA分别用GAC(Asp)、CAA(Gln)、GTC(Val)来替代,替代后的突变酶的催化活性显著降低.同天然β-D-半乳糖苷酶相比,作用于ONPG底物时,突变酶的k_(cat)值分别为0.13%(Asp-537)、0.0006%(Gln-537)、0.0035%(Val-537),但它们的K_m值并无明显改变.无论是天然酶还是突变酶,底物类似物IPTG是一个强有力的抑制剂,而过渡态类似物2-脱氧-2-氨基-半乳糖和L-核糖只对突变酶有微弱的抑制作用.活化剂叠氮钠的激活作用小于β-D-半乳糖苷酶的Glu-461突变酶.催化甲醇成酯反应的能力小于天然酶.突变酶对热更不稳定.以上结果表明Glu-537残基是该酶催化反应的必需基团.