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地衣芽孢杆菌GXN151的纤维素酶基因cel12A的序列分析及其在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 刘永生 冯家勋 +5 位作者 段承杰 赵广存 柏学亮 张成刚 唐纪良 马庆生 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2003年第3期194-200,共7页
地衣芽孢杆菌菌株GXN151的cel12A基因为783bp,可编码含261个氨基酸的羧甲基纤维素酶Cel12A,Cel12A的N末端第1~28氨基酸具典型的信号肽特征、第9~31氨基酸具跨膜功能域特征、第104~261氨基酸形成家族12糖基水解酶(glycosylhydrolase)... 地衣芽孢杆菌菌株GXN151的cel12A基因为783bp,可编码含261个氨基酸的羧甲基纤维素酶Cel12A,Cel12A的N末端第1~28氨基酸具典型的信号肽特征、第9~31氨基酸具跨膜功能域特征、第104~261氨基酸形成家族12糖基水解酶(glycosylhydrolase)功能域。将编码其第73~261氨基酸的DNA序列克隆到大肠杆菌表达载体pET30a(+)得表达质粒pGXN12A,用1mmol/LIPTG诱导处理JM109(DE3)/pGXN12A的培养液6hpGXN12A的表达量达到最高,在JM109(DE3)和BL21(DE3)pLysS中该表达蛋白质可分别占菌体胞内总蛋白的54.3%和20.9%。在含羧甲基纤维素的LA平板上JM109(DE3)/pGXN12A和BL21(DE3)pLysS/pGXN12A表现有较弱的羧甲基纤维素酶活性,说明重组的Cel12A的催化功能域具有独立的催化活性。包含体检测表明pGXN12A在JM109(DE3)中的表达产物大部分形成不溶性包含体。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 纤维素酶基因 序列分析 大肠杆菌 表达
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人单链白细胞介素12的原核表达和生物学活性鉴定 被引量:1
2
作者 周鹤峰 邵敏 +1 位作者 姬可平 葛正龙 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第31期3124-3126,共3页
目的构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12。方法 PCR法从质粒pCA13-hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,... 目的构建含人单链白细胞介素12(hscIL-12)基因的原核表达载体,在大肠杆菌中表达具有活性的hscIL-12。方法 PCR法从质粒pCA13-hscIL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a(+)-hscIL-12,转入到大肠杆菌BL21(DE3)中,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集菌液进行蛋白质印迹分析,经镍柱亲和层析(Ni2+-NTA)纯化,体外增殖实验检测其生物学活性。结果 PCR扩增、双酶切及DNA序列测定证实pET28a(+)载体上成功插入了hscIL-12基因片段。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,证明其相对分子质量为70×103;蛋白质印记表明重组蛋白具有hscIL-12抗原活性;表达产物纯化、复性后进行体外生物学活性实验表明,该重组蛋白能刺激外周血单核细胞(PBMC)产生IFN-γ。结论 pET28a(+)-hscIL-12原核表达载体的构建和重组hscIL-12蛋白的制备为进一步研究hscIL-12生物学功能和临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人单链白细胞介素12 大肠杆菌 生物学活性 表达
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IL-10与IL-12在银屑病患者系统血液快速固有免疫反应中的表达 被引量:2
3
作者 郭志丽 郭峰 +1 位作者 顾军 张志勇 《中国麻风皮肤病杂志》 2011年第5期301-303,共3页
目的:检测银屑病患者IL-10及IL-12在体外系统血液快速固有免疫反应体系中的表达。方法:将灭活大肠杆菌(3X108/mL)0.2mL做为免疫原加入抗凝全血细胞悬液0.2mL和血浆0.3mL中,37℃水浴1h,离心,取上层血浆,固相夹心法酶联免疫... 目的:检测银屑病患者IL-10及IL-12在体外系统血液快速固有免疫反应体系中的表达。方法:将灭活大肠杆菌(3X108/mL)0.2mL做为免疫原加入抗凝全血细胞悬液0.2mL和血浆0.3mL中,37℃水浴1h,离心,取上层血浆,固相夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆IL-10及IL-12含量。结果:银屑病血液经免疫原激活后IL-12含量明显上升,IL-10含量无明显上升,但正常人免疫原激活后IL-12和IL-10含量都明显上升。银屑病血液经免疫原激活后IL-12/IL-10比值增高。结论:银屑病患者血浆中IL-12与IL-10细胞因子水平的异常是固有免疫反应亢进的一种表现,可能与银屑病的系统免疫学发病机制相关。 展开更多
关键词 大肠杆菌 银屑病 系统血液免疫反应 固有免疫 IL-10 IL-12
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耐利福定大肠杆菌K—12包膜组分的生化分析
4
作者 李显志 王浴生 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期193-198,共6页
通过提取大肠杆菌K-12敏感株及其耐利福定株的包膜,并对其组分作了初步的生化分析。结果表明:十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳发现耐药株包膜蛋白质中一条分子量为52KD的蛋白带较相应敏感株包膜蛋白有明显减少;超薄膜层聚丙烯酰胺... 通过提取大肠杆菌K-12敏感株及其耐利福定株的包膜,并对其组分作了初步的生化分析。结果表明:十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳发现耐药株包膜蛋白质中一条分子量为52KD的蛋白带较相应敏感株包膜蛋白有明显减少;超薄膜层聚丙烯酰胺等电聚焦电泳分析提示敏感株与耐药株包膜蛋白的等电点无明显区别,均为4.5~6.7;氨基酸组成分析提示敏感株与耐药株包膜的各种氨基酸及其含量无明显区别;薄层色谱分析提示耐药菌膜脂较敏感菌膜脂多分离出1种组分,前者7种组分,后者仅6种组分;敏感株与耐药株包膜总含量分别为每毫克干重包膜含糖186.7±15.3和150.0±17.0微克。提示大肠杆菌K-12耐利福定后包膜屏障通透性的改变可能系蛋白质和脂类改变的结果。进一步的研究工作仍在继续之中。 展开更多
关键词 利福定 大肠杆菌K-12 抗药性
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产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌中SHV型β内酰胺酶的分子生物学研究 被引量:17
5
作者 熊自忠 朱德妹 +1 位作者 汪复 张婴元 《中国抗感染化疗杂志》 2003年第4期194-198,共5页
目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PC... 目的 :了解复旦大学附属华山医院临床分离产超广谱 β内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌中SHV型 β内酰胺酶的分布、流行情况以及分子生物学特点。方法 :用SHV型 β内酰胺酶基因的通用引物进行聚合酶链反应 (PCR)检测 ;编码框以外设计引物、PCR扩增SHV型 β内酰胺酶全编码基因并进行克隆表达、序列分析 ;对产SHV型 β内酰胺酶的菌株进行脉冲场凝胶电泳 (PFGE)检测。结果 :5 8株产ESBLs大肠埃希菌中 ,只有 3株细菌产生SHV型 β内酰胺酶 (5 .2 % ) ,其中 1株产生SHV 1 1(非ESBLs) ,另 2株产生SHV 1 2 (ESBLs) ;3株产SHV型 β内酰胺酶菌株的PFGE谱型不同。 结论 :临床分离产ESBLs大肠埃希菌中 ,SHV型 β内酰胺酶的基因型为SHV 1 1和SHV 1 2 ,SHV型ESBLs不是主要的ESBLs型别。未发现产SHV型 展开更多
关键词 大肠埃希菌 SHV型β内酰胺酶 超广谱Β内酰胺酶 SHV-11 SHV—12
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黄粉虫幼虫免疫血淋巴最佳制样条件的确定 被引量:13
6
作者 王小平 徐冠军 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期442-446,共5页
采用正交设计L27(313)的方法对大肠杆菌诱导黄粉幼虫的免疫血淋巴最佳制样条件进行了研究,结果表明:以每虫105菌量诱导较小的虫体(0.7g以下)后72h取样得到的样品活性最高。
关键词 黄粉虫 大肠杆菌 免疫血淋巴 制样 抑菌物质
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大肠杆菌σ^(70)启动子的识别 被引量:5
7
作者 张颖 贾芸 吕军 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期475-481,共7页
应用多样性增量结合二次判别分析(Increment of Diversity with Quadratic Discriminant analysis,IDQD)方法,对大肠杆菌σ70启动子进行识别。使用受试者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线和精度召回率曲线(Precisio... 应用多样性增量结合二次判别分析(Increment of Diversity with Quadratic Discriminant analysis,IDQD)方法,对大肠杆菌σ70启动子进行识别。使用受试者操作特性(receiver operating characteristic,ROC)曲线和精度召回率曲线(Precision Recall Curves,PRC)进行性能评估。10-fold交叉检验给出,在正负集之比为1∶1时,ROC曲线下面积和PRC曲线下面积均为95%。结果表明,IDQD算法有能力应用于原核启动子的识别。识别精度高于现有算法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 启动子 多样性增量 二次判别分析
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细菌对利福定的耐药性与细菌包膜屏障的关系
8
作者 李显志 凌保生 王浴生 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第5期315-317,共3页
选用大肠杆菌k-12及其耐利福定菌株,利用同位素示踪技术研究发现利福定明显抑制~3H-尿苷掺入敏感菌,而耐药菌掺入则不受抑制,加用膜通透剂EDTA后,~3H-尿苷掺入耐药菌受到明显的抑制;~3H-利福定透入耐药菌的量明显低于透入敏感菌的量,用E... 选用大肠杆菌k-12及其耐利福定菌株,利用同位素示踪技术研究发现利福定明显抑制~3H-尿苷掺入敏感菌,而耐药菌掺入则不受抑制,加用膜通透剂EDTA后,~3H-尿苷掺入耐药菌受到明显的抑制;~3H-利福定透入耐药菌的量明显低于透入敏感菌的量,用EDTA后,透入耐药菌中的~3H-利福定显著增加。结果提示:细菌包膜屏障通透性降低使药物进入菌体减少是细菌对利福定耐药的重要机制之一。 展开更多
关键词 利福定 细菌包膜屏障 抗药性 细菌
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添加不同表面活性剂对胞苷发酵的影响 被引量:2
9
作者 赵贝贝 方海田 +4 位作者 刘慧燕 马若霜 王茹 刘予煊 李金娜 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期48-54,共7页
研究4种不同表面活性剂对大肠杆菌BG-12的胞苷合成和菌体生长的影响。在胞苷产生菌大肠杆菌BG-12发酵10 h时,添加Tween-80、Triton X-100、CTAB (hexadecyl trimethyl ammonium bromide)和EMB(ethambutol dihydrochloride) 4种表面活性... 研究4种不同表面活性剂对大肠杆菌BG-12的胞苷合成和菌体生长的影响。在胞苷产生菌大肠杆菌BG-12发酵10 h时,添加Tween-80、Triton X-100、CTAB (hexadecyl trimethyl ammonium bromide)和EMB(ethambutol dihydrochloride) 4种表面活性剂,进行对比试验,分析菌体生长、耗糖速率和胞苷浓度等的变化。Tween-80的添加量为1~4 g/L时,对胞苷的产量呈现促进作用,添加3 g/L时的产量达到最大为1.696 g/L,是对照组的2.42倍,且对菌体生长、耗糖速率无明显影响;添加Triton X-100时实验组的胞苷产量均低于对照组,但添加量为0.4~0.8 g/L时会促进菌体生长和耗糖速率;添加CTAB和EMB时,胞苷产量明显下降,但对菌体生长及耗糖速率影响不大。Tween-80在发酵10 h时添加、且在低于4 g/L时对胞苷产量有促进作用,添加Triton X-100、CTAB和EMB对菌体生长表现为促进或无影响,但对胞苷产量无促进作用。 展开更多
关键词 胞苷 大肠杆菌bg-12 表面活性剂
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甲壳素复合石墨相氮化碳的制备及光催化杀菌性能 被引量:6
10
作者 余致汐 贺南南 +1 位作者 陈欢 江芳 《环境化学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1271-1278,共8页
本文采用水热法制备了甲壳素(Chitin)和石墨相氮化碳(g-C3N4)复合材料Chitin-CN,并采用XRD、SEM、XPS、光电流及阻抗分析等手段对其进行物化特性分析.与g-C3N4相比,Chitin-CN复合材料的光生电子-空穴对的分离效率较高,甲壳素(Chitin)含... 本文采用水热法制备了甲壳素(Chitin)和石墨相氮化碳(g-C3N4)复合材料Chitin-CN,并采用XRD、SEM、XPS、光电流及阻抗分析等手段对其进行物化特性分析.与g-C3N4相比,Chitin-CN复合材料的光生电子-空穴对的分离效率较高,甲壳素(Chitin)含量为0.2 g的Chitin-CN材料在模拟太阳光照射下对大肠杆菌K-12表现出最佳的光催化杀菌效率,在2 h内可完全杀死6.5 lg cfu·mL-1的大肠杆菌K-12.Chitin-CN的破碎结构暴露了更多的活性位点,甲壳素的加入提高了光生载流子的分离率,从而促进了复合材料光催化杀菌的性能.捕获实验表明超氧自由基(·O-2)和空穴(h+)是Chitin-CN作用于大肠杆菌K-12的主要活性物种. 展开更多
关键词 光催化 甲壳素 大肠杆菌K-12 杀菌
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以物理力将糖脂引入聚联乙炔基质脂的变色囊泡 被引量:1
11
作者 马占芳 李津如 江龙 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期101-104,共4页
In the present paper it is rcported that glycolipid was successfully inserted into colorchangeable TCDA/DGG and PCDA/DGG polydiacetylene vesicles based on physical force rather than covalent binding. And the effects o... In the present paper it is rcported that glycolipid was successfully inserted into colorchangeable TCDA/DGG and PCDA/DGG polydiacetylene vesicles based on physical force rather than covalent binding. And the effects on polyinerization of diacetylene and the change of the polymer vesicles’ color due to the relative quantity of glycolipid versus diacctylene molecules were also reported. The experimental results demonstrated that this approach is available and the colorchangeable property of such polydiacetylenic vesicles was not affected due to the inceorporation of glycolipid. This provided a simple and useful method of functonalizing the polymer vesicles for their wide applications. 展开更多
关键词 变色囊泡 聚联乙炔 糖脂 大肠杆菌 囊泡 检测
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Metabolic engineering of Escherichia coli for the production of Lacto-N-neotetraose(LNnT) 被引量:4
12
作者 Wei Zhang Zhenmin Liu +7 位作者 Mengyue Gong Nan Li Xueqin Lv Xiaomin Dong Yanfeng Liu Jianghua Li Guocheng Du Long Liu 《Systems Microbiology and Biomanufacturing》 2021年第3期291-301,共11页
Lacto-N-neotetraose(LNnT),one of the most important human milk oligosaccharides,can be used as infants’food addi-tives.Nowadays,extraction,chemical and biological synthesis were utilized to obtain LNnT,while these me... Lacto-N-neotetraose(LNnT),one of the most important human milk oligosaccharides,can be used as infants’food addi-tives.Nowadays,extraction,chemical and biological synthesis were utilized to obtain LNnT,while these methods still face some problems such as low yield and high cost.The aim of current work is to construct a de novo biosynthesis pathway of LNnT in E.coli K12 MG1655.The lgtA and lgtB were first expressed by a plasmid,resulting in a LNnT titer of 0.04 g/L.To improve the yield of LNnT on substrate lactose,lacZ and lacI were knocked out,and lacY was over-expressed.As a result,the yield of LNnT on lactose increased from 0.01 to 0.09 mol/mol,and the titer of LNnT elevated to 0.41 g/L.In addition,the pathway was regulated using the titer of Lacto-N-triose II(LNTII)as a measure,and obtained a high titer strain of LNnT for 1.04 g/L.Finally,the gene expressions were fine-tuned,the titer of LNnT reached 1.2 g/L,which was 93%higher than the control strain,and the yield on lactose reached 0.28 mol/mol.The engineering strategy of pathway construction and modulation used in this study is applicable to facilitate the microbial production of other metabolites in E.coli. 展开更多
关键词 Lacto-N-neotetraose Lacto-N-triose II Human milk oligosaccharides escherichia coli K12 MG1655
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基于序列柔性参数的大肠杆菌启动子的预测 被引量:1
13
作者 谢亚茹 董志飞 +2 位作者 杨佳赫 周小军 李前忠 《内蒙古大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2018年第6期620-628,共9页
以大肠杆菌K-12的启动子(Promoter)序列作为正集,编码区(Coding区)和基因间汇聚区(CON区)的序列作为两组对照负集建立数据库,分别对实验上确定的165条σ38、94条σ54及600条σ70启动子序列进行二联体位点的保守性分析,得到保守性参数随... 以大肠杆菌K-12的启动子(Promoter)序列作为正集,编码区(Coding区)和基因间汇聚区(CON区)的序列作为两组对照负集建立数据库,分别对实验上确定的165条σ38、94条σ54及600条σ70启动子序列进行二联体位点的保守性分析,得到保守性参数随位点的涨落.用单种柔性结构参数分别和各集的二联体位置关联权重矩阵构成对序列的打分函数,分别对三类数据集进行了检验.研究发现,在自洽检验中,算法对σ38、σ54启动子的预测准确性都达到98%,对σ70启动子的预测准确性也达到了88%.通过绘制ROC曲线,确定了三类数据集的十交叉检验的最佳阈值,该算法在最佳阈值下对σ38、σ70两类启动子的预测准确度(Ac)都达到了80%以上,其中算法对以σ70启动子序列为正集、编码区序列为负集的数据集(记为Prom-Coding数据集)的Ac为88%,而对以σ54启动子序列为正集、基因间汇聚区序列为负集的数据集(记为Prom-CON数据集)的Ac为76%、Prom-Coding数据集的Ac为87%.使用Jackknife法对σ38、σ54两类数据集进行检验,Ac都达到了80%以上. 展开更多
关键词 大肠杆菌K-12 二联体位置关联权重矩阵 保守性参数 柔性参数 ROC曲线
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Eicosanoids mediate nodulation reactions to bacterial Escherichia coil K 12 infections in larvae of the oriental blowfly, Chrysomya megacephala
14
作者 Fu Zhao Bing Chen +2 位作者 Yong Wang Fen Zhu Chao-Liang Lei 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2009年第5期387-392,共6页
Nodulation is the predominant cellular defense reaction to bacterial challenges in insects. In this study, third instar larvae of Chrysomya megacephala were injected with bacteria, Escherichia coli K 12 (10^6 CFU/mL... Nodulation is the predominant cellular defense reaction to bacterial challenges in insects. In this study, third instar larvae of Chrysomya megacephala were injected with bacteria, Escherichia coli K 12 (10^6 CFU/mL, 2μL), immediately prior to injection of inhibitors of eicosanoid biosynthesis, which sharply reduced nodulation response. Test larvae were treated with specific inhibitors ofphospholipase A2 (dexamethasone), cyclo- oxygenase (indomethacin, ibuprofen and piroxicam), dual cyclo-oxygenase/lipoxygenase (phenidone) and lipoxygenase (esculetin) and these reduced nodulation except esculetin. The influence of bacteria was obvious within 2 h of injection (5 nodules/larva), and increased to a maximum after 8 h (with 15 nodules/larva), and then significantly reduced over 24 h (9 nodules/larva). The inhibitory influence of dexamethasone was apparent within 2 h of injection (4 vs. 5 nodules/larva), and nodulation was significantly reduced, compared to control, over 24 h (5 vs. 8 nodules/larva). Increased dosages of ibuprofen, indomethacin, piroxicam and phenidone led to decreased numbers of nodules. Nodules continued to exist during the pupal stage. However, the effects of dexamethasone were reversed by treating bacteria-injected insects with an eicosanoid-precursor polyunsaturated fatty acid, arachidonic acid. These findings approved our view that eicosanoid can mediate cellular defense mechanisms in response to bacterial infections in another Dipteran insect C. rnegacephala. 展开更多
关键词 bacteria Chrysomya megacephala EICOSANOIDS escherichia coli K12 NODULATION
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Identification of anti-Gram-negative bacteria agents targeting the interaction between ribosomal proteins L12 and L10 被引量:3
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作者 Weiwei Wang Chao Liu +5 位作者 Ningyu Zhu Yuan Lin JiANDong Jiang Yanchang Wang Yan Li Shuyi Si 《Acta Pharmaceutica Sinica B》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期772-783,共12页
Gram-negative bacteria have become the main pathogens and cause serious clinical problems with increased morbidity and mortality. However, the slow discovery of new antimicrobial agents is unable to meet the need for ... Gram-negative bacteria have become the main pathogens and cause serious clinical problems with increased morbidity and mortality. However, the slow discovery of new antimicrobial agents is unable to meet the need for the treatment of bacterial infections caused by drug-resistant strains. The interaction of L12 and L10 is essential for ribosomal function and protein synthesis. In this study, a yeast two-hybrid system was established to successfully detect the interaction between L12 and L10 proteins from gram-negative bacteria Escherichia coli, which allows us to screen compounds that specifically disrupt this interaction. With this system, we identified two compounds IMB-84 and IMB-87 that block L12-L10 interaction and show bactericidal activity against E. coli. We used glutathione-S-transferase(GST) pull-down and surface plasmon resonance(SPR) assays to demonstrate that these compounds disrupt L12-L10 interaction in vitro and the target of compounds was further confirmed by the overexpression of target proteins. Moreover, protein synthesis and elongation factor G-dependent GTPase activities are inhibited by two compounds. Therefore, we have identified two antibacterial agents that disrupt L12-L10 interaction by using yeast two-hybrid system. 展开更多
关键词 YEAST TWO-HYBRID escherichia coli RIBOSOME L12/L10 Antimicrobial AGENTS
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嗜碱单胞菌的新型羧基转移酶α亚基基因Aa-accA及其抗盐碱性能 被引量:2
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作者 羡明杰 翟磊 +3 位作者 仲乃琴 马祎玮 薛燕芬 马延和 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期809-816,共8页
【目的】探讨解淀粉嗜碱单胞菌(Alkalimonas amylolytica)N10来源的羧基转移酶α亚基(Acetyl-coenzyme A carboxylase subunit alpha,AccA)基因Aa-accA对细菌及植物细胞耐盐碱性的作用。【方法】通过PCR方法从嗜碱菌N10基因组中扩增基因... 【目的】探讨解淀粉嗜碱单胞菌(Alkalimonas amylolytica)N10来源的羧基转移酶α亚基(Acetyl-coenzyme A carboxylase subunit alpha,AccA)基因Aa-accA对细菌及植物细胞耐盐碱性的作用。【方法】通过PCR方法从嗜碱菌N10基因组中扩增基因Aa-accA,并在大肠杆菌(Escherichia coli)K12中表达,通过测定工程菌及对照菌在不同盐浓度[0%,2%,4%,6%(W/V)NaCl]及不同碱性pH(8.0,8.5,9.0,9.5)的LB中生长12 h后的OD600值,以及二者在分别含6%(W/V)NaCl及pH 9的LB中的生长曲线,评价Aa-accA对大肠杆菌耐盐碱性的影响。同时以pPZP111为载体,构建了植物细胞重组表达载体,通过农杆菌介导方法将该基因转入烟草BY-2悬浮细胞表达,利用FDA染色方法测定经盐碱溶液处理后残存的活细胞数量评价该基因对植物细胞耐盐碱性的影响。【结果】PCR扩增得到基因Aa-accA,其ORF含957 bp,编码318个氨基酸的多肽,BLAST比对显示该基因为羧基转移酶α亚基(AccA)家族中的成员,其氨基酸序列与E.coli的AccA具有76%同源性;含有Aa-accA的E.coli K12相较于对照组在不同NaCl浓度及不同碱性pH的LB中表现出了明显的生长优势,特别是在6%(W/V)NaCl及pH 9的LB中培养12 h后,终OD600分别是对照菌的2.6倍和3.5倍;缺失体实验结果显示基因缺失的突变体E.coli K12ΔaccA在6%(W/V)NaCl及pH 9的LB中不能正常生长,而含有Aa-accA基因的重组质粒使得E.coli K12ΔaccA在同样条件下OD600值达到0.5和0.2;转入此基因的烟草BY-2细胞,经盐碱溶液处理后,其存活细胞比例高于野生型。【结论】本研究首次发现了Aa-accA基因与盐碱性的相关性,可提高大肠杆菌及烟草BY-2细胞的耐盐碱能力。 展开更多
关键词 嗜碱菌 Aa-accA基因 大肠杆菌(escherichia coli)K12 烟草BY-2细胞 耐盐碱
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