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电转化法制备高转化效率的E.coli感受态细胞研究 被引量:6
1
作者 李欣 杨坤宁 +1 位作者 刘志勇 陈红兵 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期48-51,共4页
为了制备高转化效率的E.coliTG1和E.coliDH5a感受态细胞,采用电转化方法探索E.coli生长对数期的不同生长阶段、质粒DNA含量、电场强度对E.coli转化效率的影响。研究结果表明:40μL菌液中加1.0ngpUC19DNA,用间隙0.2cm电击杯时... 为了制备高转化效率的E.coliTG1和E.coliDH5a感受态细胞,采用电转化方法探索E.coli生长对数期的不同生长阶段、质粒DNA含量、电场强度对E.coli转化效率的影响。研究结果表明:40μL菌液中加1.0ngpUC19DNA,用间隙0.2cm电击杯时转化效率最高,E.coli TG1有1个电转化效率峰值,即A600为0.665时,转化效率达1.7×10^9cfu/μg pUC19DNA;E.coliDH5a有2个转化效率峰值,即A600为0.443和0.810时,转化效率均为3.0×10^9 cfu/μg pUCl9DNA。研究结果表明,在相同情况下E.coliDH5a的转化效率高于E.coli TG1,利用本实验确定的参数可制备出高转化效率的电转化感受态细胞。 展开更多
关键词 大肠杆菌 电转化 感受态细胞
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制备高效大肠杆菌电转化感受态细胞和电转化条件的研究 被引量:13
2
作者 朱森康 黄磊 +2 位作者 李燕飞 钟卫鸿 徐志南 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期206-209,共4页
旨在建立一种高效大肠杆菌电转化感受态细胞的制备方法,研究了摇瓶装液量,菌体生长阶段,转化电场强度,转化后复苏时间以及感受态细胞存放时间等对转化效率的影响。结果表明,装液量为400 mL/2 L,菌体在OD600值为0.452时收集所制备的感受... 旨在建立一种高效大肠杆菌电转化感受态细胞的制备方法,研究了摇瓶装液量,菌体生长阶段,转化电场强度,转化后复苏时间以及感受态细胞存放时间等对转化效率的影响。结果表明,装液量为400 mL/2 L,菌体在OD600值为0.452时收集所制备的感受态细胞,在电场强度12.5 kV/cm条件下电击5 ms,转化后复苏时间2 h,转化效率可达到1010CFU/μg DNA。此条件下制备的感受态细胞转化效率高,质量稳定,重复性好。 展开更多
关键词 大肠杆菌 电转化 感受态细胞 转化效率
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三种大肠杆菌高效感受态的制备及转化 被引量:14
3
作者 涂知明 陈明洁 +1 位作者 何光源 常俊丽 《华中科技大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期112-115,共4页
描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α,TG1和XL1blue,其中最有效的是XL1blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞的存储时间及其与转... 描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α,TG1和XL1blue,其中最有效的是XL1blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞的存储时间及其与转化效率之间的关系也进行了研究,结果显示感受态细胞可以在-20℃存储7d,在-70℃存储15d.将常见的方法做了三种改进:首先是将CaCl2溶液改为TB溶液;其次是将培养基由LB换成S.O.C;再就是在质粒对感受态细胞的转化过程中加入DMSO或PEG8000.改良的细菌转化系统比常见的方法能提高转化效率约1000倍,是一种高效的细菌转化系统. 展开更多
关键词 感受态细胞 大肠杆菌 质粒 保藏 转化
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感受态细胞制备与保存方法的比较研究 被引量:26
4
作者 罗婵 汤刚彬 +1 位作者 谢体三 石德顺 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期52-54,共3页
目的 :确立一个能制备高转化率感受态细胞并长期维持其感受性的实验方案。方法 :比较CaCl2 法、TSS法、超高效法制备感受态细胞的效果 ,选用三者中较好的方法进一步探讨不同生长期 (OD值 0 .2~ 1.1)的细菌对制备感受态细胞的影响 ,并... 目的 :确立一个能制备高转化率感受态细胞并长期维持其感受性的实验方案。方法 :比较CaCl2 法、TSS法、超高效法制备感受态细胞的效果 ,选用三者中较好的方法进一步探讨不同生长期 (OD值 0 .2~ 1.1)的细菌对制备感受态细胞的影响 ,并分别比较了不同冷冻保护剂 (7%DMSO ,10 %甘油 )于 - 2 0℃、- 80℃冰箱保存感受态细胞的效果。结果 :三种方法获得的感受态细胞转化率差异极显著 (P <0 .0 1)。采用超高效法 ,OD值为 0 .36 (或 0 .5 8)时收集菌体可获得 1.1× 10 8的高转化率的感受态细胞 ,以 7%的DMSO为冷冻保护剂保存感受态细胞可维持 10 7以上的转化率 4 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法 转化率 保存
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大肠杆菌感受态细胞保存条件的研究 被引量:8
5
作者 唐颜苹 王小媚 +1 位作者 何薇 李晓华 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期745-748,共4页
研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响。结果表明:在4℃-、40℃、-70℃条件下,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势,转化效率在第1天或第7天达到最大值,此后随保存时间增加而呈下降趋... 研究了保存时间、温度和抗冻剂对大肠杆菌感受态细胞保存的影响。结果表明:在4℃-、40℃、-70℃条件下,大肠杆菌感受态细胞转化效率在保存前期随保存时间增加呈上升趋势,转化效率在第1天或第7天达到最大值,此后随保存时间增加而呈下降趋势;在保存前期,保存于4℃的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于保存在-70℃、-40℃的大肠杆菌感受态细胞的转化效率,在保存后期低于保存在-70℃、-40℃的大肠杆菌感受态细胞的转化效率;在相同保存温度和保存时间下,保存在甘油的大肠杆菌感受态细胞转化效率高于保存在DMSO的大肠杆菌感受态细胞的转化效率。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 保存 转化效率
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大肠杆菌感受态细胞转化能力的影响因素 被引量:28
6
作者 张岚岚 徐春燕 徐昌杰 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第4期429-432,共4页
探讨了大肠杆菌菌株、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和纯度对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A600为0.55的TG1制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化... 探讨了大肠杆菌菌株、细菌生长状态、转化溶液、抗冻剂及保存时间、质粒长度和纯度对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaCl2为缓冲液,采用经活化培养的A600为0.55的TG1制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化率最高,可达2×106-4×107cfu/μg DNA(pUC19)。随着质粒长度增加和纯度降低,转化率有所下降。若感受态细胞要保存备用,以15%甘油为抗冻剂优于7%DMSO,但添加抗冻剂对转化率有抑制作用。贮于甘油的感受态细胞在-70℃冻存两个月后仍有较理想的转化率。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化能力 菌株
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温度对大肠杆菌感受态细胞的影响 被引量:9
7
作者 柯涛 张勇法 +1 位作者 潘园园 马向东 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期57-60,共4页
在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出... 在不同的培养温度下制备一系列大肠杆菌感受态细胞,并选取其中一组感受态细胞在4种不同的温度下保存,对培养温度与大肠杆菌感受态形成的关系以及感受细胞在不同保存温度下的保持情况进行了研究.结果表明,不同培养温度下大肠杆菌生长出现高峰期不同.其中,18℃和25℃,出现于对数期早期,而30℃和37℃则出现于对数期中后期.在25℃条件下转化效率最高.感受态细胞在4种不同温度条件下保存,受活菌数和感受态2种因素的影响程度都不同.转化效率在前期都有不同程度的提高,液氮条件下保存感受态细胞时间最长. 展开更多
关键词 自然感受态 人工感受态 温度 大肠杆攻 感受态细胞
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大肠杆菌最佳感受态细胞制备的探讨 被引量:11
8
作者 李路怡 易建华 李敏 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第3期194-198,共5页
本文对4种大肠杆菌菌株在不同生长时期的转化效率分别进行了测定.结果表明,在细菌的生长繁殖过程中,其转化效率是有很大变化的.对于不同的菌株,它们获得高转化率时的活菌数不同.同时,得到了这4种大肠杆菌菌株制备最佳感受态细... 本文对4种大肠杆菌菌株在不同生长时期的转化效率分别进行了测定.结果表明,在细菌的生长繁殖过程中,其转化效率是有很大变化的.对于不同的菌株,它们获得高转化率时的活菌数不同.同时,得到了这4种大肠杆菌菌株制备最佳感受态细胞的条件. 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化率
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影响大肠杆菌电转化效率因素的探讨 被引量:5
9
作者 张晓楠 肖玉 +5 位作者 黄勇 张秀敏 王涛 王丽 关璐媛 赵玮钦 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期466-468,472,共4页
目的探讨影响大肠杆菌DH5a电转化效率的几个关键但易被忽略的因素。方法于室温(25℃)用空气浴振荡和水浴振荡培养大肠杆菌DH5a,用10%(V/V)甘油-水溶液和10%(V/V)甘油-生理盐水溶液冻存所制感受态细胞。在电压2.5kV、电阻200Ω、电容25μ... 目的探讨影响大肠杆菌DH5a电转化效率的几个关键但易被忽略的因素。方法于室温(25℃)用空气浴振荡和水浴振荡培养大肠杆菌DH5a,用10%(V/V)甘油-水溶液和10%(V/V)甘油-生理盐水溶液冻存所制感受态细胞。在电压2.5kV、电阻200Ω、电容25μF的条件下进行电转化,电击冰浴(0~10min)后测定转化效率。结果于25℃水浴振荡培养细菌、10%甘油-生理盐水溶液冻存感受态细胞、电转化后冰浴6min,转化效率高达1.01×1010CFU/μg DNA。结论该法适合于大肠杆菌DH5a,可获得较高的转化效率。 展开更多
关键词 感受态细胞 大肠杆菌DH5 a 电穿孔 转化效率
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大肠杆菌JM109感受态形成因素分析 被引量:6
10
作者 游雷鸣 翁海波 +2 位作者 韩绍印 席宇 孙春花 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第2期37-40,共4页
目的:分析大肠杆菌JM109感受态形成因素,提高转化效率。方法:采用不同生长状态、不同转化溶液、不同保存时间及热激处理时间的细菌制备感受态,分析转化效率。结果:以20mmol/L MgCl2+80mmol/L CaCl2为处理液,经活化培养OD600为0.82... 目的:分析大肠杆菌JM109感受态形成因素,提高转化效率。方法:采用不同生长状态、不同转化溶液、不同保存时间及热激处理时间的细菌制备感受态,分析转化效率。结果:以20mmol/L MgCl2+80mmol/L CaCl2为处理液,经活化培养OD600为0.82的菌液制备感受态细胞,4℃放置12-24h之内,42℃热激处理60s,转化效率最高,可达9.8×10^6-1.2×10^7cfu/μg DNA(pUC19)。随着质粒长度增加,转化效率下降。结论:感受态细胞形成与生长状态关系密切,金属离子、有机溶剂对感受态的形成影响显著。感受态形成过程中,细胞可能发生了一系列的生理变化。 展开更多
关键词 大肠杆菌JM109 感受态细胞 转化效率
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低温培养对大肠杆菌电穿孔转化效率的影响 被引量:5
11
作者 韩峰 褚艳 于文功 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第9期30-34,共5页
在18℃和37℃振荡培养大肠杆菌DH5α并制备感受态细胞,用Eppendorf公司的Multiporator电转移仪进行电穿孔转化,研究了培养温度对转化效率的影响.实验结果表明,低温(18℃)培养的细菌,回收时的OD600值在0.5~1.0时,转化效率都维持在高水平... 在18℃和37℃振荡培养大肠杆菌DH5α并制备感受态细胞,用Eppendorf公司的Multiporator电转移仪进行电穿孔转化,研究了培养温度对转化效率的影响.实验结果表明,低温(18℃)培养的细菌,回收时的OD600值在0.5~1.0时,转化效率都维持在高水平;而在37℃培养的细菌,转化效率仅在OD600 0.6~0.7时出现一个锐利的峰值,此OD600值前后转化效率显著下降.在不影响细胞生长的情况下,18℃培养细菌的转化效率随电场强度增加而升高;而37℃培养的细菌在电场强度超过20.5 kV/cm时转化效率将大幅度下降.另外,还对影响转化效率的其他因素(培养基、振荡培养时的转速、细胞密度、质粒浓度、电击前后冰浴时间等)进行了优化,建立了一个便利而高效的质粒DNA电转化方法,获得1.02×1010cfu/μg DNA的高转化效率. 展开更多
关键词 低温培养 感受态细胞 大肠杆菌 DH5Α 电穿孔 转化效率 电场强度
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电转化法提高平连载体DNA转化效率的研究 被引量:6
12
作者 方勤 田静 《生物技术》 CAS CSCD 1999年第4期5-8,共4页
探讨了电转化过程中一些影响平连载体DNA转化效率的因素,并与化学法进行了比较,由此建立了优化的电转化条件。结果显示,在OD600值0.72-0.78收获细胞时,可使平连载体DNA的转化效率达到5×106转化子/μ... 探讨了电转化过程中一些影响平连载体DNA转化效率的因素,并与化学法进行了比较,由此建立了优化的电转化条件。结果显示,在OD600值0.72-0.78收获细胞时,可使平连载体DNA的转化效率达到5×106转化子/μgcD-NA,较化学法高102-103倍。同时,降低连接产物的盐浓度。 展开更多
关键词 电转化法 感受态细胞 平连载体DNA 转化效率
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一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化方法 被引量:18
13
作者 李明才 何韶衡 《汕头大学医学院学报》 2005年第4期228-230,241,共4页
目的:建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法。方法:质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板。以大肠杆菌DH5α为受体菌,研究CaCl2溶液浓度、感受态细胞的存放时间、转化时间及转... 目的:建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法。方法:质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板。以大肠杆菌DH5α为受体菌,研究CaCl2溶液浓度、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的培养时间等对质粒转化效率的影响。结果:以100 mmol/L CaCl2溶液制备感受态细胞,冰浴转化5 min,经42℃热休克作用90 s后直接涂平板筛选转化子,获得与常规转化方法相当的转化效率。CaCl2溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间和转化后的振荡培养时间对转化效率的影响不明显。结论:成功地建立了一种高效、快速的感受态细胞制备及质粒转化的方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 质粒 转化 感受态细胞
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大肠杆菌感受态细胞转化能力影响因素的研究 被引量:1
14
作者 纠敏 汪伦记 张敏 《安徽农学通报》 2007年第16期23-24,248,共3页
探讨了大肠杆菌生长状态、转化溶液浓度、保存温度、冰上放置时间对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaC l2为缓冲液,采用经活化培养的A6000.56的大肠杆菌JM109制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化率最高。... 探讨了大肠杆菌生长状态、转化溶液浓度、保存温度、冰上放置时间对感受态细胞转化能力的影响。结果表明,以100 mmol/L CaC l2为缓冲液,采用经活化培养的A6000.56的大肠杆菌JM109制备的感受态细胞,在冰上放置6h后转化,所得转化率最高。若感受态细胞要保存备用,液氮保存最好,其次-70℃,添加20%甘油利于冷冻保存,但添加保护剂对转化率有抑制作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化
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大肠杆菌感受态细胞制备及转化研究现状 被引量:4
15
作者 郭梦姚 吴靖芳 《河北北方学院学报(自然科学版)》 2020年第8期44-48,共5页
大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)又称大肠杆菌,因结构简单、遗传背景明确而成为基因克隆实验中最常用的受体菌种。感受态细胞的制备与转化是生物转化实验中的重要环节,大肠杆菌感受态细胞的转化效率直接影响携带目的基因的重组... 大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)又称大肠杆菌,因结构简单、遗传背景明确而成为基因克隆实验中最常用的受体菌种。感受态细胞的制备与转化是生物转化实验中的重要环节,大肠杆菌感受态细胞的转化效率直接影响携带目的基因的重组质粒能否导入受体细胞,表达出新的遗传性状。大肠杆菌感受态细胞(competent cells)制备常采用物理或化学方式改变细胞膜通透性,诱导受体菌摄取外源性DNA并整合入受体菌。此外,细菌细胞密度值(OD600)、转化液浓度、热激参数、培养条件等因素也影响转化效率。综述了国内外大肠杆菌感受态细胞的制备及转化方法,以期为各大实验室制备和转化大肠杆菌感受态细胞提供参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 制备方法 转化
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一种快速脱盐制备大肠杆菌电转化感受态细胞的方法 被引量:1
16
作者 蔡松 杨东成 +3 位作者 唐梅 熊圆圆 王金华 王永泽 《湖北农业科学》 2020年第17期170-174,177,共6页
为了建立一种高效快捷的大肠杆菌(Escherichia coli)电转化方案,采用类似密度梯度离心的方法,使用角转子离心机达到快速除盐的目的。研究发现,以20%甘油(V/V)/1.5%甘露醇(m/V)溶液作为梯度介质,采用菌悬液与梯度介质比例为1∶5(V/V)时... 为了建立一种高效快捷的大肠杆菌(Escherichia coli)电转化方案,采用类似密度梯度离心的方法,使用角转子离心机达到快速除盐的目的。研究发现,以20%甘油(V/V)/1.5%甘露醇(m/V)溶液作为梯度介质,采用菌悬液与梯度介质比例为1∶5(V/V)时形成的密度梯度可有效地进行离心除盐,离心后的细胞以20%甘油(V/V)/1.5%甘露醇(m/V)溶液重悬,随后在电场强度为15 kV/cm的条件下进行电转化能得到较高的转化效率,而在室温条件下进行电转化试验不能提高转化效率。本研究仅通过2次离心,电转化效率可达到4.2×109 CFU/μg DNA,大大简化了试验流程。 展开更多
关键词 电转化 感受态细胞 脱盐 大肠杆菌(escherichia coli)
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双歧杆菌感受态细胞的制备和电转化条件的研究 被引量:4
17
作者 荀安营 李娜 +4 位作者 邹兵 王成文 李迎雪 姚君 王立生 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2013年第10期1128-1130,共3页
介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法,并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究,菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞,制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培... 介绍目前常用的双歧杆菌感受态细胞制备方法,并系统研究影响双歧杆菌电转化效率的关键因素。通过研究,菌体在4oo为0.3-0. 5时收集以制备感受态细胞,制备好的感受态细胞应尽早用于电转化;最佳电场强度为12.5 kV/cm;转化后的细胞复苏培养2 h为佳。感受态细胞的转化效率可达103 CFU/μg DNA。 展开更多
关键词 双歧杆菌 电转化 感受态细胞 转化效率
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Ca^(2+)对诱导大肠杆菌摄取外源DNA的影响 被引量:3
18
作者 梅运军 陈向东 +2 位作者 谢志雄 沈萍 李文化 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期354-358,共5页
将CaCl2诱导大肠杆菌建立感受态及其质粒的转化过程进行逐一分解,根据转化效率探讨了Ca2+在各个步骤中的作用.结果发现,Ca2+并不能永久性地改变细胞的结构和生理状态;细胞只有在Ca2+存在下才能维持其摄取DNA的能力;在诱导大肠杆菌摄取DN... 将CaCl2诱导大肠杆菌建立感受态及其质粒的转化过程进行逐一分解,根据转化效率探讨了Ca2+在各个步骤中的作用.结果发现,Ca2+并不能永久性地改变细胞的结构和生理状态;细胞只有在Ca2+存在下才能维持其摄取DNA的能力;在诱导大肠杆菌摄取DNA的过程中,Ca2+主要是在转化步骤中起作用,转化前是否用Ca2+处理或处理时间长短对大肠杆菌摄取DNA能力影响不明显. 展开更多
关键词 钙离子 大肠杆菌 感受态细胞 转化
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高转化效率甲基化酶缺陷大肠杆菌感受态细胞制备条件的优化 被引量:1
19
作者 司苏晋 刘田福 +2 位作者 雷小春 薛亮亮 张引红 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期533-535,538,共4页
目的优化高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件。方法采用不同生长状态、转化冰浴时间、热激时间及转化后复苏时间的大肠杆菌DM1制备感受态细胞,分析转化效率。结果 A600值为0.39和0.69的菌液制备感受态细胞,转化... 目的优化高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件。方法采用不同生长状态、转化冰浴时间、热激时间及转化后复苏时间的大肠杆菌DM1制备感受态细胞,分析转化效率。结果 A600值为0.39和0.69的菌液制备感受态细胞,转化冰浴时间为30min,42℃热激处理90s,大肠杆菌DM1的转化效率最高;转化后复苏时间对细菌转化效率的影响不明显。结论已优化了高转化效率甲基化酶缺陷的大肠杆菌DM1感受态细胞的制备条件,可满足大部分在质粒中进行的常规克隆的需要。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 转化效率
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一种优化的大肠杆菌感受态细胞制备及转化方法 被引量:6
20
作者 黄学娟 张金迪 +3 位作者 张壮 李裕静 曹雪松 胡全安 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期5199-5204,共6页
Silwet L-77是一种非离子型的表面活性剂,常用于植物的转化。本研究发现,Silwet L-77的加入也可以显著地提高大肠杆菌的转化效率。同时,我们比较了不同培养温度、不同培养浓度(OD_(600)值)及不同冷冻保护剂对感受态细胞转化效率的影响... Silwet L-77是一种非离子型的表面活性剂,常用于植物的转化。本研究发现,Silwet L-77的加入也可以显著地提高大肠杆菌的转化效率。同时,我们比较了不同培养温度、不同培养浓度(OD_(600)值)及不同冷冻保护剂对感受态细胞转化效率的影响。我们发现,28℃培养E.coli至OD_(600)值为0.55~0.6之间时制备感受态细胞,利用9%的DMSO做为冷冻保护剂冷冻保存感受态细胞,转化时加入0.001 5%~0.002%的Silwet L-77,可以获得最高的转化效率。总之,该研究进一步优化了大肠杆菌感受态细胞的制备及转化方法。 展开更多
关键词 大肠杆菌 感受态细胞 质粒 转化
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