壳聚糖抗菌活性的影响因素

以大肠杆菌为实验菌种 ,研究了壳聚糖的浓度、脱乙酰化度、分子量、及环境 p H值等因素对壳聚糖抗菌活性的影响 ,并初步探讨了壳聚糖的抗菌机理 .结果表明 :在研究范围内 ,随着浓度和脱乙酰化度的提高 ,抗菌活性增强 ;随分子量的增加 ,抗菌活性出现先增强而后略有减弱的趋势 ,转折点在 9.16× 10 4 前后 ;在 p H为 6.5左右 ,抗菌活性最优 .通过激光共焦显微镜对异硫氰酸荧光素 ( FITC)标记的壳聚糖齐聚物 ( Mw=80 0 0 )与大肠杆菌作用的观察 ,发现具有抗菌性的壳聚糖齐聚物进入到了细菌细胞的内部 .用扫描电镜观察分子量为 2 7.4× 10 4 的壳聚糖对大肠杆菌的作用 ,发现壳聚糖使菌体凹陷变形 ,并伴有自溶现象 .

鸡大肠杆菌病病原的分离、鉴定及特性

从江苏地区５个大型种鸡场孵化后期死亡的１６３枚鸡胚及８４羽出壳弱雏中分离鉴定出９９株大肠埃希氏菌，死胚分离率为３６．８１％，出壳弱雏分离率４６．４３％；从其它９个蛋鸡场４７羽疑似大肠杆菌病的病、死鸡的肝、脾、心包、腹水、输卵管、脑、眼中分离鉴定出２３株大肠埃希氏菌，分离率为４８．９４％。分离菌中有６７株对清洁级昆明种小鼠（ＫＭ）具有强毒力。对其进行大肠埃希氏菌Ｏ群抗原鉴定，共有２２种Ｏ型血清型，Ｏ１１、Ｏ８８、Ｏ１１５为优势血清型，Ｏ７８及Ｏ８１各为３株，Ｏ１８、Ｏ２０、Ｏ２６、Ｏ３６、Ｏ８９各为２株，其余为Ｏ３、Ｏ４、Ｏ９、Ｏ３０、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ９３、Ｏ１０３、Ｏ１１４、Ｏ１３１、Ｏ１３３及Ｏ１４９；未定型菌１１株，占待检菌株的１６．４２％，其中Ｏ３、Ｏ９、Ｏ１８、Ｏ３０、Ｏ８１、Ｏ１１４、Ｏ１３１及Ｏ１４９为首次发现。对２９株不同血清型不同来源的分离菌进行抗生素敏感性试验，结果，所有菌株对头孢唑啉（ＣＦＺ）极度敏感；对其它抗生素的敏感性则各不相同。此外，本试验还对分离菌的生长培养特性，形态特征，生化特性及对ｌｄ鸡的致病性进行了研究。

多重PCR方法检测大肠杆菌O157∶H7的初步研究

目的研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法。方法以大肠杆菌O157∶H7的O157抗原基因(rfbE基因)、鞭毛H7抗原基因(fliC基因)、粘附素基因(eaeA基因)和志贺样毒素Ⅰ、Ⅱ(SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因)为扩增对象,设计能导至目的片段大小不同的5对引物,通过优化条件,建立了可用于粪便检测的大肠杆菌5重PCR。结果在同一扩增体系中,检测了5株不同来源的大肠杆菌O157∶H7及27株非大肠杆菌O157∶H7细菌。结果表明,该方法能从2株大肠杆菌O157∶H7中扩增出rfbEf、liC、eaeA、SLT-Ⅰ、SLT-Ⅱ基因,它们的大小分别为582 bp、802 bp、487 bp3、68 bp和177 bp。而另外3株大肠杆菌O157∶H7也能扩增出除eaeA、SLT-Ⅱ基因外的其它3个基因片段。表明该方法可用于检测大肠杆菌O157∶H7,还可检测细菌是否含有毒素基因。在检测27株非大肠杆菌O157∶H7,除O149出现SLT-II扩增产物和O1∶H7出现fliC基因扩增产物外,其它非大肠杆菌O157∶H7的扩增结果均为阴性,表明该方法有较高的特异性。当粪便样品经增菌培养12 h,用该5重PCR体系能检测出最初接种量为5cfu/g粪便的样品。结论本5重PCR方法具有较高的特异性和敏感性,可迅速、有效地将大肠杆菌O157∶H7与其它非大肠杆菌O157∶H7相区别,同时还能检测O157∶H7中的毒力因子。因此,通过进一步研究,本方法有望应用于临床大肠杆菌O157∶H7感染的辅助诊断。

下呼吸道标本肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药检测

目的 了解下呼吸道标本肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌产超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL s)的情况及耐药检测 ,供临床用药借鉴。方法 对 1999年 7月至 2 0 0 0年 7月期间我院临床下呼吸道标本分离 92 0株肺炎克雷伯氏菌 ,186株大肠埃希氏菌 ,用双纸片协同扩散法检测 ESBL s,用 Kirby- Bauer琼脂扩散法作药敏试验。结果 92 0株肺炎克雷伯氏菌中检出产 ESBL s菌 2 39株 ,检出率为 2 5 .98% ,186株大肠埃希氏菌中检出产 ESBL s菌 31株 ,检出率为 16 .6 7% ;除亚胺培南外 ,产 ESBL s菌对其它 9种抗生素的耐药率均显著高于非产 ESBL s菌 (P<0 .0 1) ;亚胺培南对产 ESBL s菌全部敏感。结论 肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌中产ESBL s菌检出率高 ,且为多重耐药 ,亚胺培南是治疗 ESBL

产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药性监测分析

目的 监测并分析该医院2004年1～12月间产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌的耐药性变化，为临床合理使用抗菌药物提供指导。方法 对2004年1～12月从该院临床送检的各类标本中分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，采用纸片琼脂扩散法（K-B法）与Vitek-AMS的GNS卡Mic法相结合进行药敏试验，并严格按照CLSI／NCCLS（美国临床实验室标准化研究所／美国临床实验室标准化委员会）推荐的标准方法检测ESBLs菌株。结果 分离的498株大肠埃希菌中，产ESBLs的有196株，占39．4％；311株肺炎克雷伯菌中，产ESBLs的有91株，占29．3％。产ESBLs菌株对青霉素类、头孢菌素类、单环β-内酰胺类、氨基糖甙类、氟喹诺酮类等抗菌药物产生多重耐药性；ESBLs菌株的耐药性显著高于非ESBLs菌株（P〈0．05），但对亚胺培南都显示高度敏感性。结论 产ESBLs菌株的感染已成为临床抗感染治疗的难题，临床在抗感染治疗过程中，应严格掌握抗菌药物的应用指标，特别加强对产ESBLs菌株的耐药性监测，合理使用各种抗菌药物，以防止ESBLs菌株的增长、扩散与流行。

大肠杆菌DH5α耐乙酸突变株的选育及其代谢特性研究

大肠杆菌DH5α是基因工程常用的宿主菌之一 ,但由于对代谢副产物乙酸十分敏感 ,影响外源基因的表达效率。为了提高E .coliDH5α乙酸耐受力 ,采用6 0 Co诱变结合连续培养 ,逐步提高稀释率和乙酸钠选择压力 ,于含乙酸钠平板进一步筛选 ,得到 5株对乙酸耐受能力显著增强的突变菌株 ,具有良好的遗传稳定性 ,其中DA1 9显示最强的耐受性能。DA1 9与DH5α相比 ,在复合培养基YPS和YPS2G中菌体浓度分别提高 1 7%和 5 % ,最大比生长速率分别提高 8%和 2 7% ,产乙酸分别减少为 6%和 5 9% ;在基本培养基中的细胞浓度提高 2 4倍 ,在含 1 0g L乙酸钠培养基中达到的细胞浓度与不加乙酸钠DH5α的细胞浓度相当。

可溶性重组人组织因子(rhTF_(243))分泌型表达载体的构建和表达

目的:构建含有TF的胞外区和跨膜区基因的phoA-TF243分泌型表达载体,在大肠杆菌中以可溶形式表达重组人组织因子(rhTF243)。方法:从人胎盘组织中提取总RNA,以RT-PCR扩增获得目的基因,并克隆到phoA载体中,在大肠杆菌MM294中表达rhTF243,产物采用免疫亲合层析进行纯化。结果:通过低磷酸盐诱导工程菌,获得重组人组织因子(rhTF243) ,表达水平占菌体总蛋白量的16 .3 %,经免疫亲合层析纯化,产物纯度达到95 %以上,分子量为27 .4kD。结论:获得了rhTF243,具有与完整分子完全相同的凝血功能。

蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白基因的融合表达和活性测定

目的:表达蓖麻毒素A链(RTA)与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白(GFP-RTA),用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运机理研究。方法:采用PCR法从重组质粒pKK233.2-RTA中扩增出蓖麻毒素A链基因,然而将其插入真核表达质粒pEGFPC1,构成GFP-RTA融合基因;GFP-RTA经PCR扩增,与T载体连接,用内切酶从T-GFP-RTA中切下GFP-RTA片段,插入原核表达质粒pET-28a(+);在BL21(DE3)中表达GFP-RTA融合蛋白,通过金属螯合和层析纯化,MTT法检测融合蛋白的细胞毒性。结果:测序发现插入的融合基因全长序列完全正确,SDS-PAGE鉴定表达产物分子量正确;经诱导表达后,菌体产生绿色荧光,MTT法表明该融合蛋白呈现与RTA相似的细胞毒性。结论:从大肠杆菌表达的蓖麻毒素A链与绿色荧光蛋白的融合蛋白,具有蓖麻毒素A链和绿色荧光蛋白的生物学活性,可用于蓖麻毒素A链在细胞内的转运途径研究。

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的 :了解产超广谱 β 内酰胺酶大肠埃希菌在泌尿系统感染中的流行情况及对 12种常用抗菌药物的耐药性 ,为临床合理使用抗生素提供必要依据。方法 :采用K B纸片扩散法 ,测定 12 8株大肠埃希菌对 12种抗菌药物的耐药性 ,同时使用E test方法筛选超广谱 β 内酰胺酶阳性菌株。 结果 :从 12 8株大肠埃希菌中共检出ESBL 2 6株 ,产ESBL细菌阳性率为 2 0 3%。在 12种抗菌药物中 ,亚胺培南的体外抗菌活性最好 ,敏感率为 10 0 % ,其次为阿米卡星 (90 5 % )。结论 :产ESBL细菌多重耐药现象严重 ,只有正确使用抗生素才能降低ESBL的发生 ,而对于产ESBL菌株感染的治疗 ,亚胺培南应作为首选药物。

家兔大肠杆菌灭活苗的研究

由埃希氏大肠杆菌引起的家兔腹泻是仔、幼兔发病和死亡率很高的肠道疾病。经123例40～90日龄腹泻死亡兔检验,分离鉴定出埃希氏大肠杆菌89株,居分离细菌的首位。为预防和控制该病,选用了分离率高、毒力强的菌株,研制出大肠杆菌氢氧化铝甲醛灭活苗,并对菌苗分别进行了实验室及养兔场试验。

大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型基因的分子克隆

本文克隆了含大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型基因的2 0kbSau3AI酶切片断,对插入片段进行了核苷酸序列测定,1298bp的核苷酸序列包含2个完整的开放读框,其中SLTIIA亚基基因编码区长957bp,编码319个氨基酸多肽,SLTIIB亚基基因编码区长267bp,编码89个氨基酸多肽,与已知人源的SLTII基因核苷酸序列比较具有99%的同源性,与SLTI结构基因相比,A亚基同源序列为56 43%,B亚基为60 15%。

聚六亚甲基双胍与醋酸氯己定协同作用研究

目的为了解聚六亚甲基双胍与醋酸氯己定的协同作用。方法采用悬液定量杀菌试验对聚六亚甲基双胍、醋酸氯己定及聚六亚甲基双胍复方消毒剂的杀灭微生物效果进行了测试。结果对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌、白色念珠菌作用3min的T/E值分别为13.64、9.53、2.66、123.36。结论聚六亚甲基双胍的杀菌效果明显好于醋酸氯己定,聚六亚甲基双胍与醋酸氯己定有协同杀菌作用。

家兔大肠杆菌所致腹泻兔机体理化参数变化及病理特性研究

致病性大肠杆菌自然和人工感染的腹泻兔的盲肠、结肠 pH值比健康兔高 1．1～ 1．3，高的 pH环境有利于大肠杆菌繁殖，引起内源性感染；腹泻兔与健康兔相比，白细胞总数高 1 917个 /mm3，嗜中性白细胞增高，表现出炎性反应；腹泻兔血液电解质的钾、钠、氯、钙低于健康兔，尿素氮含量增高，有毒产物增多；病理检查发现，大肠杆菌可致家兔肠道微绒毛坏死、脱落，表现出血性坏死性肠炎，实质脏器充血。上述研究结果为发病机理和防治技术研究提供了依据。

聚合酶链反应扩增大肠杆菌志贺样毒素基因

两对寡核苷酸引物通过聚合酶链反应扩增大肠杆菌志贺样毒素Ｉ（ＳＬＴ Ｉ）和志贺样毒素Ⅱ（ＳＬＴⅡ）基因，在单一反应中，两对引物分别扩增出１３０ｂｐ（ＳＬＴⅠ）和３４６ｂｐ（ＳＬＴ Ⅱ）的ＤＮＡ 片段，扩增片段经地高辛标记寡核苷酸探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交分析，证实为ＳＬＴ Ⅰ和ＳＬＴ Ⅱ基因产物。同一扩增反应中应用ＳＬＴⅠ和ＳＬＴⅡ复合引物进行扩增，不同基因型志贺样毒素大肠杆菌从样品中鉴定出。８６９份牛、猪腹泻粪样ＤＮＡ 样品通过ＰＣＲ进行了测定，其中，３％ 检出志贺样毒素大肠杆菌，与牛出血性腹泻、猪水肿病有关。

分离病鸡3株大肠埃希菌的鉴定及毒力和细胞毒测定

目的 分离病鸡中 3株大肠埃希菌和鉴定其对小鼠的致病力及对Vero细胞毒性作用。方法 将按常规细菌的分离并鉴定的 3株大肠埃希菌 ,接种至昆明系小鼠体内做毒力试验 ,计算死亡率和LD50 (5 0 %致死量 )。采用微量单层细胞培养法测定细菌上清液的细胞毒性作用。结果 分离的 3株细菌生物学性状均符合大肠埃希菌。分离的 3株细菌对小鼠致病率为 10 0 % ;菌量达 6× 10 11CFU/L时死亡率为 10 0 % ;LD50 为 1 5× 10 10 CFU/L。分离的 3株细菌对 2株细胞均无细胞毒性作用。结论 分离的 3株致病性大肠埃希菌与O157∶H7株对小鼠致病力相似 ,可能是潜在的人类的传染源。

产毒性大肠杆菌毒力表达的定量研究

目的 探索较量理想的定量分析产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）毒力表达的方法。方法 采用ＥＬＩＳＡ对ＥＴＥＣ毒力因子的 表达进行定量分析，并对ＥＴＥＣ毒力基因ｍＲＮＡ采用快速ＲＮＡ提取、ＲＮＡ－ＤＮＡ杂交方法进行检测，用阳性单位定量 分析杂交反应产物的相对含量。结果ＥＴＥＣ两类毒力因子的表达均明显受环境因素的调控；毒力基因ｍＲＮＡ表达与 毒力因子表达高度相关；用ＲＮＡ－ＤＮＡ杂交法定量分析ＥＴＥＣ毒力表达变化比ＥＬＩＳＡ法敏感和特异。结论用阳性单 位对ｍＲＮＡ杂交反应产物进行定量分析的方法研究ＥＴＥＣ毒力表达可靠、实用。

鸡自家大肠杆菌油乳剂灭活疫苗的研制

从河北省几个大肠杆菌病较严重的大型鸡场分离到29株大肠埃希氏菌,分离菌株的生化特性符合大肠埃希氏菌的特性。以该菌株为抗原研制了自家大肠杆菌油乳剂灭活疫苗,并对其物理性状、安全性、免疫效力、保存期及抗体消长规律进行了检测。结果表明,试验鸡疫苗在免疫后3周到9个月内对大肠杆菌的攻击获得全部保护。疫苗40℃保存15个月,其免疫效力没有下降。

家兔大肠杆菌-魏氏梭菌二联苗研制及与两种单苗免疫比较试验

应用改进液体培养法研制家兔大肠杆菌-魏氏梭菌二联苗,大肠杆菌抗原含量一般可达220亿～250亿/mL,并对二联苗和对应的两种单苗进行了免疫比较试验。结果二联苗免疫兔对大肠杆菌和魏氏梭菌免疫效力分别达91.7％(22/24)和95.2％(20/21),而对应的大肠杆菌单苗和魏氏梭菌单苗的保护率分别为91.3％(21/23)和87％(20/23);免疫后持续4个月,二联苗对大肠杆菌和魏氏梭菌的保护率分别为83.3％(10/12)和81.8％(9/11);对应的两种单苗保护率分别为75％(9/12)和80％(8/10);临床应用效果良好。结果表明,研制的二联苗保护率高,两种组分联合制苗无干扰现象,降低了防疫成本。

阿拉尔片区部分豆制品卫生学评价

本实验是以阿拉尔片区部分豆制品卫生质量进行感观和细菌学评价,为消费者的健康饮食做以指导。结果显示:阿拉尔片区所售的部分豆制品存在着卫生质量问题,菌落总数不合格的为44%;大肠菌群数不合格的为25%;九团检样豆腐中检出一例蜡样芽胞杆菌,阿拉尔片区部分豆制品总体合格率占检样的56%。