基于HPLC指纹图谱及色度值的当归与油当归比较研究

目的通过建立指纹图谱结合色度值分析当归与油当归的差异。方法采用HPLC建立当归油炒前后样品指纹图谱,评价相似度并指认共有峰;以当归油炒前后共有峰峰面积、色度值为指标,运用配对样本t检验、聚类热图分析、主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)对当归油炒前后样品进行区分,以变量重要性投影(VIP)>1为标准筛选差异性标志物。结果当归、油当归指纹图谱分别标定16、18个共有峰,其中色谱峰8、10号为炮制后产生,共指认6个成分,分别为阿魏酸、绿原酸、藁本内酯、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、阿魏酸松柏酯。聚类热图、主成分分析结果与OPLS-DA结果一致,均可将样品明显聚为当归和油当归2类;通过VIP值筛选出峰5、峰7(绿原酸)、峰17、峰4、峰18(藁本内酯)、峰9(阿魏酸)、峰1、峰13、峰11(洋川芎内酯I)、峰2、峰3为导致样品差异的主要标志色谱峰。油当归与当归的色度值差ΔE*值为6.10~12.37,表明二者可被肉眼识别,且L*、a*、b*均可作为鉴别当归与油当归的关键指标。结论建立的当归和油当归HPLC指纹图谱方法稳定可靠,结合色度值差异可用于区分当归与油当归。

Effect of Autotoxicity and Soil Microbes in Continuous Cropping Soil on Angelica sinensis Seedling Growth and Rhizosphere Soil Microbial Population

Objective To study the effect of autotoxicity and the co-effect of autotoxicity and soil microbes from continuous cropping soil on Angelica sinensis growth, root yield and content of essential oils, and soilmicrobalpopulation. Methods The pot experiments were conducted upon A. sinensis seedlings in continuous cropping soil. At the different growth stages, we determined the seedlings in growth parameters, root yield, content of essential oils, ethanol extract, and cultivable microbial populations in rhizosphere soil. Results A. sinensis seedlings were significantly inhibited in growth, root yield and quality. Compared with the control, the composition and structure of soil microbes were changed and the diversity indexes of bacteria functional groups were reduced in rhizosphere soil ofA. sinensis. A. sinensiscropping problems were more seriously after the treatment with combination of autotoxicity and soil microbes than with autotoxicity alone. Conclusion The autotoxicityand soil microbes from continuous cropping soil of A. sinensis could cause the continuous cropping obstacle together.

当归抗动脉粥样硬化药理机制研究进展

动脉粥样硬化是一种动脉内膜异常沉积所致的慢性炎症性疾病,其发病机制复杂,主要与炎症反应、氧化应激、高同型半胱氨酸、血栓形成及脂质浸润等原因密切相关,目前临床多选用降脂类、抗血小板聚集及扩张血管等药物治疗,但起效时间较长,只能作为预防及辅助治疗。而中医药治疗动脉粥样硬化疗效明显,可以有效抑制斑块新生及维持斑块稳定性,其中当归作为治疗动脉粥样硬化的常用中药,具有补血活血、调经通便的作用,其药理成分及作用较广。通过总结多项数据挖掘、网络药理学研究发现,当归不仅是治疗动脉粥样硬化的高频补虚药物,而且含有挥发油、多糖、有机酸、氨基酸、黄酮类等多种化学成分,可介导多个信号通路起到改善血流动力学、血管内皮功能的作用。该文通过查阅国内外相关文献,总结当归抗动脉粥样硬化的作用机制,从抑制血管平滑肌细胞增殖、抗血小板聚集、抑制炎症反应、抗氧化应激反应、调节血脂、调节自噬活性等方面展开综述,以期为当归及其中药复方治疗动脉粥样硬化提供理论依据。

基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨当归挥发油改善血管性痴呆的作用机制

目的基于网络药理学、分子对接及实验验证探讨当归挥发油(Volatile oil of Angelica Sinensis Radix,VOASR)改善血管性痴呆(Vascular dementia,VaD)的作用机制。方法(1)采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)法对VOASR的主要化学成分进行分析鉴定,确定百分含量排前5位的化合物。通过Swiss Target Prediction数据库筛选出VOASR 5个主要化学成分的作用靶点,通过OMIM、GeneCards、Drugbank数据库收集VaD疾病相关靶点。对VOASR主要化学成分的作用靶点与VaD疾病相关靶点取交集,得到二者共同靶点即为VOASR干预VaD的潜在作用靶点。运用STRING数据库对交集靶点构建蛋白相互作用(PPI)网络,并分析判断关键靶点。使用R语言的Bioconductor软件包对共同靶点进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析,并使用Cytoscape 3.7.2软件构建VOASR干预VaD的“药物-成分-疾病-靶点-通路”网络。采用AutoDock Vina软件进行分子对接,分析5个主要化学成分与关键靶点蛋白的结合能力,进一步筛选出VOASR治疗VaD的核心靶点。(2)体内实验:将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、VOASR组(105 mg·kg^(-1)),每组6只。采用单侧颈总动脉结扎术(UCCAO)构建VaD小鼠模型;术后灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每日1次,持续3周。采用Morris水迷宫实验评估VaD小鼠的认知功能;采用免疫组织化学法及Western Blot法检测小鼠海马组织中多巴胺受体D2(DRD2)、单胺氧化酶A(MAOA)蛋白表达情况。结果(1)VOASR中相对百分含量排前5位的核心化学成分分别为(E)-Ligustilide(E-藁本内酯)、Z-Butylidenephthalide(Z-正丁烯基苯酞)、Senkyunolide H(洋川芎内酯H)、Spathulenol(桉油烯醇)、3-Butylphthalide[3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮],占总含量的97.32%。共筛选得到VOASR中5个主要化学成分的作用靶点92个,VaD疾病相关靶点1181个,得到共同靶点(交集靶点)31个。分析得到VOASR治疗VaD的关键靶点包括VEGFA、PTGS2、ICAM1、VCAM1、F2、FGF2、CCR5、PIK3R1、MAPK14、MPO、SELE、DRD2、MAOA、ADRA1A、ELANE。VOASR治疗VaD的潜在作用靶点与脂多糖的反应、神经递质水平的调节、突触传递、多巴胺能等生物学过程有关,主要涉及多巴胺能突触、钙离子信号通路、神经活性配体-受体相互作用、MAPK信号通路、NF-κB信号通路等。分子对接结果显示,E-藁本内酯-DRD2、洋川芎内酯H-MAOA的结合能力最优。(2)与假手术组比较,模型组小鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数显著减少(P<0.001);小鼠海马区中的MAOA、DRD2阳性表达显著上调(P<0.01,P<0.001),MAOA、DRD2蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。与模型组比较,VOASR组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数显著增加(P<0.001);小鼠海马区中的MAOA、DRD2阳性表达明显下调(P<0.05,P<0.01),MAOA、DRD2蛋白表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论VOASR可以有效改善VaD小鼠的认知功能,可能是通过E-藁本内酯、洋川芎内酯H等核心化学成分,作用于DRD2、MAOA等关键靶点,通过多巴胺能突触、钙离子信号通路、MAPK信号通路等多条信号通路来实现的,具有多成分、多靶点、多通路的特点。

Phytochemical progress made in investigations of Angelica sinensis(Oliv.) Diels

The phytochemical progress on Angelica sinensis(Oliv.) Diels over the past decades is summarized. Since 1970 s, 165 chemical constituents, including phthalides, phenylpropanoids, terpenoids and essential oils, aromatic compounds, alkaloids, alkynes, sterols, fatty acids, and polysaccharides have been isolated or detected from the various parts of the title plant.

当归挥发油对人结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移的作用机制研究

目的分析当归挥发油对人结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞HCT116生物学行为的影响作用。方法人CRC HCT116细胞按照0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml 4个当归挥发油浓度分为对照组、当归挥发油25μg/ml组、50μg/ml组、100μg/ml组。MTT、CCK-8实验检测细胞增殖情况;Transwell实验检验细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测CRC HCT116细胞凋亡率;Western bolt检测各组细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Recombinant Bcl-2 associated X protein,Bax)变化情况。结果MTT实验结果显示,当归挥发油25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组细胞增殖抑制率均明显高于对照组,且HCT116细胞增殖抑制率随当归挥发油剂量的上升而上升,差异有统计学意义(P<0.05);CCK-8实验结果显示,三组细胞增殖计数均明显低于对照组,且HCT116细胞增殖率随当归挥发油剂量的上升而下降,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果显示对照组的细胞迁移、侵袭个数明显高于当归挥发油25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测HCT116凋亡结果显示相比于对照组,当归挥发油25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组的HCT116细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Western bolt结果显示,与对照组比较,当归挥发油各组HCT116细胞的Bax蛋白相对表达量均明显升高,Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论当归挥发油能够显著抑制人CRC HCT116细胞增殖、迁移等细胞生物学行为,同时能够提高细胞凋亡率,其可能通过调控Wnt/β-catenin通路参与细胞凋亡过程。

乙醇提取新鲜当归油的抗炎镇痛作用

目的 :研究当归油的镇痛、抗炎作用。方法 :应用二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、蛋清致大鼠足跖肿胀及大鼠棉球肉芽肿增生4种动物模型进行抗炎药效学实验 ;采用醋酸致小鼠扭体反应 ,进行镇痛实验。结果 :当归油能显著抑制上述各种动物模型的炎症反应及醋酸引起的小鼠扭体反应。结论 :当归油对急、慢性炎症均有明显抑制作用 ,且有一定的镇痛效果。

当归精油对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响

目的 :观察当归精油对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响。方法 :制作离体子宫平滑肌肌条 ,考察催产素、高钾去极化溶液存在条件下当归精油对子宫肌条反应的影响。结果 :当归精油对催产素及高K+去极化液中Ca2 +所致的离体子宫平滑肌收缩均呈剂量依赖性抑制 ;使CaCl2 累积量 效曲线非平行性右移 ,最大效应下降 ,呈非竞争性抑制 ;且对子宫平滑肌依细胞内、外Ca2 +两种收缩成分均呈抑制作用。结论 :当归精油对大鼠离体子宫平滑肌条的抑制作用 ,可能与其拮抗Ca2 +有关。

当归挥发油对实验性哮喘大鼠肺功能及其组织病理学的影响

目的观察当归挥发油对实验性哮喘大鼠肺功能及其组织病理学改变的影响。方法采用注射卵清白蛋白与氢氧化铝致敏、雾化吸入卵清白蛋白激发哮喘模型,每次激发前当归挥发油灌胃,并测定大鼠肺功能、观测肺组织病理变化以及血清中IgE的水平,研究当归挥发油对哮喘大鼠的保护作用。结果当归挥发油能促进大鼠体质量的增加,改善肺功能,降低IgE的水平,抑制哮喘模型大鼠肺组织的炎症反应。结论当归挥发油具有一定的平喘、治疗支气管哮喘的作用。

独活挥发油成分的GC-MS分析

目的:分析我国中药材GAP基地之一所种植独活挥发油的化学成分,为其质量评价提供科学依据。方法:采用水蒸气蒸馏法提取独活挥发油,用GC毛细管柱进行分析,归一化法测定其相对含量,并用GC-MS法鉴定化学成分。结果:检出229个色谱峰,鉴定出88个化合物,占挥发油总量的78.23%。结论:独活挥发油的单萜类化合物及其衍生物中,3-蒈烯(8.89%)、间-聚伞花素(4.99%)、β-水芹烯(8.35%)等是主要成分,占总挥发油量的22.23%;倍半萜类化合物及其衍生物中,桉叶烷-4(14),11-二烯(4.36%)、α-芹子烯(1.36%)、喇叭醇(1.14%)、α-甜没药萜醇(6.03%)和1,8-二甲基-4-异丙基-螺环[4.5]+-8-烯-7-酮(4.37%)等是主要成分,占总挥发油量的17.26%。

超临界CO_2萃取当归挥发油的研究

用超临界CO_2流体萃取技术从当归(Angclica sinensis)中萃取分离出挥发油,并用GC-MS-计算机联用技术对其进行了研究,从中分离鉴定了38个成分,并进行了含量测定。亚油酸、藁木内酯、棕榈酸为其主要成分,其含量分别为56.74％、19.82％及14.20％。其中乙酸(acetic acid)等28个成分为首次从该植物中分离到。

岷当归有效成分对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化的影响

目的观察岷当归3种有效成分(当归挥发油、当归多糖、阿魏酸)对高同型半胱氨酸血症致兔动脉粥样硬化(AS)的影响,探讨其作用机制。方法日本大耳白兔48只,随机分为正常组、模型组、当归挥发油组、当归多糖组、阿魏酸组和叶酸维生素组,每组8只。采用DL-蛋氨酸皮下注射法建立高同型半胱氨酸血症兔模型,造模8周后各给药组给予相应药物灌胃,12周后检测各组兔血清同型半胱氨酸(Hcy)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,观察兔腹主动脉病理变化。结果模型组较正常组Hcy水平明显升高(P<0.05);当归挥发油组、阿魏酸组、叶酸维生素组Hcy水平较模型组明显降低(P<0.05);当归挥发油组、阿魏酸组TC、TG、LDL-C水平较模型组明显降低(P<0.05)。腹主动脉组织学检查显示,模型组AS征象明显,叶酸维生素组、当归挥发油组、阿魏酸组病变程度较模型组减轻。结论岷当归有效成分当归挥发油和阿魏酸能减轻模型兔血管内皮的损伤,对高同型半胱氨酸血症致兔AS病变有防治作用。

气相色谱-质谱法测定当归挥发油中藁本内酯的含量

目的:建立当归挥发油中藁本内酯的含量测定方法。方法:气相色谱-质谱法,HP5973气相色谱-质谱联用仪,HP-5(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱,HP化学工作站,NIST谱库,HP7683自动进样器。载气为高纯氦气,柱温采用程序升温,进样口温度250℃,检测器温度280℃,选择离子采集(SIM),选取离子为148,161,190对藁本内酯进行监测。结果:藁本内酯进样量在1.34ng～1.34pg,响应值与浓度呈良好的线性关系,灵敏度为0.1ng·mL^(-1)(S/N=10),平均加样回收率为98.9％,RSD为2.2％。结论:本文建立的GC-MS选择离子监测外标定量方法,具有灵敏、快速、准确的特点,可供当归挥发油的质量控制及藁本内酯的含量测定。

当归挥发油对哮喘大鼠的平喘作用及其对IL-4、IFN-γ的影响

目的观察当归挥发油对实验性哮喘大鼠的平喘作用及其对IL-4、IFN-γ的影响。方法采用注射OVA与氢氧化铝致敏、OVA雾化吸入激发来复制哮喘动物模型,通过观测特异性与非特异性支气管激发实验中大鼠的行为、测定血清中IgE的含量与BALF中IL-4和IFN-γ的水平,探讨当归挥发油的平喘作用及其作用机制。结果当归挥发油能促进大鼠体质量的增加,明显缓解OVA或乙酰胆碱与组胺混合物激发实验中大鼠的哮喘等行为学表现,降低血清与BALF中IgE与IL-4水平,提高BALF中IFN-γ水平。结论当归挥发油具有一定的平喘、治疗支气管哮喘的作用,调节IL-4与IFN-γ的表达失衡是其作用机制之一。

当归挥发油分子蒸馏馏分GC-MS分析及抗氧化研究

目的研究当归挥发油分子蒸馏后各馏分的化学组成及抗氧化能力。方法用分子蒸馏设备对当归挥发油进行分馏,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)表征各馏分的化学组成,采用主成分分析法(PCA)分析其化学组成的差异,用2,2-二苯基-1-苦基苯肼(DPPH)自由基清除能力评价各馏分的抗氧化能力。结果当归挥发油经分子蒸馏后得到6个馏分。GC-MS结果显示藁本内酯是各馏分的主要成分。PCA结果显示各馏分除了在Z-藁本内酯上的差异外,馏分6中的油酸和馏分5中的Z-氧代环十七碳-8-烯-2-酮与其他馏分有较大差异。抗氧化能力测定结果显示各馏分都有抗氧化能力但有差异,而且对馏分中藁本内酯的含量无依赖性,馏分6和馏分5的抗氧化能力较强,可能与其所含的特异性成分有关。结论本研究可为当归和其他中药挥发油的进一步开发利用提供参考。

β-环糊精包合技术在当归精油新剂型研究中的应用

目的 :制备当归精油的 β 环糊精包合物并测定包合物中当归精油的包合率、释放率、溶出速率 ,探讨当归精油制成固体药物的可行性。方法 :用气相色谱 质谱法、X射线衍射法、薄层层析法对包合前后的挥发油进行研究。结果 :X射线衍射分析表明包合物完全不同于当归精油与 β 环糊精的混合物 ,已形成一种全新的物相 ,气相色谱 质谱法与薄层层析法检验结果证明当归精油的化学成分在包合前后没有发生变化。结论 :当归精油经 β 环糊精包合后其化学成分没有改变 ,增强了稳定性 ,制成制剂具有用量少、药效时间长、易于保存、服用方便等优点。

轮作与连作当归光合特性和挥发油的比较

为了探索当归连作后产量和品质降低的影响因素,研究比较了轮连作当归光合特性及挥发油收率以及化学成分,为深入探讨连作对当归生长发育障碍提供理论依据。用CI-310系统光合测定仪,田间活体测定当归净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)、胞间CO2浓度(Ci)等光合生理生态因子;用水蒸气蒸馏法提取当归药材挥发油,并用GC-MS法鉴定化学成分,归一化法测定相对含量。结果表明,连作当归叶绿素a和b含量比轮作下显著降低,分别为轮作下的26.5%和57.0%;连作当归的日平均光合速率为1.73μmol/(m2.s),比轮作当归降低50.9%(2.61μmol/m2.s)(P<0.05);一天中连作和轮作当归的蒸腾速率下午显著低于上午,连作低于轮作;气孔导度(Gs)12:00前的平均值连作当归(10.6mmol/m2.s)与轮作(11.4mmol/m2.s)差异不显著,而14:00后连作(1.3mmol/m2.s)极显著的低于轮作(4.4mmol/m2.s);胞间CO2浓度(Ci)的变化和气孔导度一致;轮作和连作当归挥发油收率分别为0.95%和0.70%,挥发油中藁本内酯的相对含量分别为71.62%和29.49%,但挥发油组分基本一致。当归连作显著降低叶片的光合色素含量、光合特性和药材挥发油含量,进而导致产量和品质下降,因此在栽培中应注重合理的轮作倒茬。

当归挥发油在大鼠支气管哮喘模型中的作用

目的:研究当归挥发油对实验性哮喘大鼠的平喘作用及其对肺组织相关转录因子表达的影响。方法:采用注射卵清白蛋白(OVA)与氢氧化铝致敏、OVA雾化吸入激发来复制哮喘动物模型,通过观察OVA造模过程中大鼠行为学的变化、肺组织T-bet与GATA-3蛋白表达以及肺组织病理学改变,研究当归挥发油的平喘作用及其作用机制。结果:当归挥发油可明显减小哮喘大鼠在造模过程中的行为综合评分值,提高肺组织T-bet蛋白的表达而降低GATA-3蛋白的表达水平,改善肺组织病理学,减轻支气管上皮细胞脱落程度与炎性细胞浸润程度。结论:当归挥发油具有一定的平喘作用,而调节T-bet/GATA-3表达失衡是其作用机制之一。

超临界CO_2萃取当归油的工艺研究

目的:研究超临界CO_2 流体萃取当归油的生产工艺。方法:用正交试验等方法,研究药材粒度、萃取温度、萃取压力、萃取时间及解析分离条件对超临界CO_2流体萃取当归油的影响。结果:超临界CO_2流体萃取当归油的优选工艺为:药材粒度 40目,萃取温度 40℃、萃取压力 25Mpa、萃取时间 2h,CO2 流量 20L/h,分离釜Ⅰ压力 8Mpa,分离釜Ⅰ温度 50℃;分离釜Ⅱ压力 6Mpa,分离釜Ⅱ温度 50℃。结论:优选得到的工艺具有较高的提取率,该工艺合理、可行。

当归挥发油对尼莫地平透皮吸收的影响

目的研究当归挥发油对尼莫地平体外经皮渗透的影响。方法以30%乙醇-0.9%氯化钠溶液为接收液,不同浓度的当归挥发油为促渗剂,以预处理的体外兔皮肤作为渗透屏障,Franz扩散池进行体外渗透实验,高效液相色谱法测定尼莫地平的含量。结果不同浓度当归挥发油均能显著提高尼莫地平渗透速率(均P<0.05),其中1.0%当归挥发油促渗效果最好,渗透速率为36.63μg.(cm2)-1.h-1,是对照组的3.25倍。结论当归挥发油可以作为尼莫地平经皮吸收制剂的促渗剂。