牛乳源金黄色葡萄球菌EsxB蛋白的表达及免疫效应分析

为分析牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxB蛋白的免疫特性,扩增EsxB基因并构建了pET-28a-EsxB重组质粒,转化后的重组菌经诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting检测重组蛋白;以纯化的EsxB蛋白免疫小鼠,检测其抗体水平、滴度及亚型、测定攻击保护率和观察小鼠肺、肾病理组织学变化。结果显示,成功纯化了EsxB蛋白,且该蛋白具有良好的抗体反应特性。免疫小鼠的血清抗体水平与对照组相比显著升高;抗体滴度可达1∶24 300,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主,免疫小鼠的攻击保护率可达75%;且免疫后降低了S.aureus攻击对小鼠肺脏及肾脏的病理损伤。重组EsxB蛋白具有良好的免疫原性和保护效果。

金黄色葡萄球菌EsxB蛋白的表达、纯化及应用

目的建立EsxB蛋白的表达、纯化方法，了解金黄色葡萄球菌（简称金葡菌）感染者血清EsxB抗体阳性比例及其耐药特征。方法同源重组构建EsxB蛋白原核表达体系，诱导表达后果用超小波法破碎细菌，以镍离子螯合层析柱纯化EsxB蛋白；以EsxB为抗原，应用间接ELISA法检测78例临床金葡菌感染患者血清EsxB抗体；应用全自动细菌鉴定分析仪检测相应的78株金葡菌分离菌株的耐药情况。结果成功构建EsxB原核表达体系并纯化得剑EsxB蛋白；28．2％（22／78）的金葡菌感染患者血清EsxB抗体阳性，来自EsxB抗体阳性患着金葡菌分离株，其多重耐约菌株的的比例（100．0％，22／22）和耐甲氧两林菌株的比例（77．3％，17／22）均高于来自EsxB机体阴性患者的金葡菌分离株洲[分别为35．7％（20／56）和21．4％（12／56）]（P值均〈0．01）结论建立了EsxB蛋白的表达、纯化疗法；分离自EsxB抗体阳性者的金葡菌均为耐药菌株，且大多数对甲氧西林耐药。