改良亚胺培南-EDTA纸片增效试验检测铜绿假单胞菌产金属酶表型

目的评估改良亚胺培南-乙二胺四乙酸(EDTA)纸片增效试验在检测铜绿假单胞菌(PA)产金属酶表型中的应用价值。方法收集95株耐碳青霉烯类药物PA,采用琼脂稀释法测定所有菌株对亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC)值,聚合酶链反应(PCR)和DNA测序鉴定金属酶基因型,亚胺培南-EDTA纸片增效试验常规法和改良法检测金属酶表型。结果 95株耐碳青霉烯类药物PA对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为100.0%和71.6%;常规法敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别是100.0%、96.6%、72.7%和100.0%,而改良法均为100.0%。结论改良亚胺培南-EDTA纸片增效试验可能是一种检测PA产金属酶表型的有效方法。

铜绿假单胞菌耐药性分析及金属酶基因检测

目的分析中南大学湘雅医院临床分离铜绿假单胞菌抗菌药物敏感性及金属酶流行情况,以期指导临床用药。方法收集2010年11月—2011年4月临床分离非重复铜绿假单胞菌200株,所有菌株均经VITEK-2全自动微生物鉴定与药敏试验分析系统进行鉴定和药敏试验。采用双纸片协同试验作为金属酶表型初筛试验,初筛阳性菌株采用聚合酶链反应(PCR)检测IMP、VIM、SPM和NDM4种金属酶基因型以及Ⅰ类整合酶基因。结果 200株铜绿假单胞菌分离自ICU患者55株,占27.5%。药敏试验结果显示,该菌对美罗培南耐药率最低(8.5%),对庆大霉素耐药率最高(38.5%)。6株铜绿假单胞菌金属酶初筛试验阳性,检出率3.0%,经基因检测发现IMP型阳性菌株2株(2株均产IMP-1菌株),未检出VIM、SPM及NDM型金属酶,且这6株铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因均为阳性。结论该院产金属β内酰胺酶的铜绿假单胞菌检出率较低,主要金属酶基因型为IMP-1。铜绿假单胞菌耐药仍较严重,但对碳青霉烯类抗生素耐药率低。

二种方法检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌产金属β-内酰胺酶的效果比较

目的比较两种方法检测耐亚胺培南鲍曼不动杆菌产金属β-内酰胺酶的效果。方法采用改良Hodge试验和EtestMBL方法检测细菌产金属β-内酰胺酶;采用MicroScan WalkAway 96检测鲍曼不动杆菌的耐药性。结果采用两种方法同时检测40株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的金属β-内酰胺酶,改良Hodge试验阳性36株,阳性检出率90%;Etest MBL方法检测阳性38株,阳性检出率95%。结论两种方法均能简便、快速、准确的检测鲍曼不动杆菌产金属β-内酰胺酶。

Etest法在耳鼻咽喉致病真菌药敏检测中的应用研究

目的:用Etest法研究耳鼻咽喉致病真菌对酮康唑(KE)、伊曲康唑(IT)、5-氟孢嘧啶(FC)、二性霉素B(AP)、氟康唑(FL)5种抗真菌药的敏感性。方法:按瑞典倍肯公司关于Etest检测方法,用上述5种抗真菌药对来自耳鼻咽喉的黄曲霉、烟曲霉及白念珠菌等15种致病真菌进行药敏检测,判定其MIC值。结果:1白念珠菌对上述5种抗真菌药均敏感,其中酮康唑及伊曲康唑最敏感;2酮康唑、伊曲康唑对黄曲霉、烟曲霉、米曲霉、卡氏枝孢霉、尖端单孢霉、桔青霉及皮癣菌均有敏感性,两药对15种致病真菌的MIC值分别为≤0.008～>32mg/L和≤0.006～32mg/L;3氟康唑对15种受试菌株中的11株有耐药性,其MIC值≤0.5～>32mg/L。结论:1Etest法对致病真菌的药敏检测具有先进新颖,操作简便,定值精确,结论可靠,重复性好的优点;2酮康唑、伊曲康唑有广谱高效的抗真菌功效。

一种细菌金属β-内酰胺酶筛查方法的建立

目的 建立一种简便、易行的实验方法 ,检测细菌产生的金属酶。方法 根据协同试验原理 ,采用亚胺培南 (IP)与巯基乙酸 (MA)协同作用的方法检测金属酶 ,并与PCR方法检测金属酶基因进行比较。结果 4 7株嗜麦芽窄食单胞菌全部产生了金属酶 ;14株黄杆菌中有 9株产生了酶 ;2 0株铜绿假单胞菌均没有产生金属酶。该检测结果与PCR法检测金属酶基因结果一致。结论 使用伊米配能与巯基乙酸协同作用的方法可以检测金属酶 ,该方法有较好的敏感性和特异性 ,并且操作简便 ,不需要特殊的仪器设备 ,适合用于临床微生物实验室筛查产金属酶的菌株。

eCIM联合mCIM试验对肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶分型的应用

目的应用乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活法(eCIM)联合改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测肺炎克雷伯菌(KPN)中碳青霉烯酶的分型,并初步评估其用于分型的效能。方法以KPN为研究对象,eCIM联合mCIM试验分析产金属酶和丝氨酸酶碳青霉烯酶的表型,以PCR为金标准,评估eCIM联合mCIM试验检测碳青霉烯酶分型的准确率。结果检测94株耐碳青霉烯类KPN,其中87株mCIM试验阳性,为产碳青霉烯酶株;7株mCIM阴性,为非产碳青霉烯酶株。产碳青霉烯酶菌株中75株eCIM阴性,为丝氨酸酶表型;12株eCIM阳性,为金属酶表型。PCR检测碳青霉烯酶编码基因阳性株87株,其中丝氨酸酶KPC-2基因阳性76株,金属酶IMP基因阳性12株,1株同时携带KPC-2和IMP基因。χ2分析两种方法检测结果的一致性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论eCIM联合mCIM试验检测KPN中碳青霉烯酶分型,与PCR结果一致,不需购买特殊试剂,操作简便,易于推广,可为临床抗感染用药及医院感染控制提供重要参考。

两种重要抗真菌药敏试验的比较研究

目的 :比较NCCLS方案与Etest法两种重要的抗真菌药敏试验的优劣。方法 :对NCCLS方案与Etest法方法的过程、条件、对唑类药物抗真菌MIC的一致性方面进行比较。结果 :Etest法更优。结论 :NCCLS方案准确性强 ,但操作步骤复杂 ,而Etest较为简便、可靠、准确。

铜绿假单胞菌IMP型金属β-内酰胺酶的基因研究

目的 研究铜绿假单胞菌产金属β- 内酰胺酶(metallo -β- lactamases,简称金属酶)的编码基因及亚型。方法 临床分离的铜绿假单胞菌用全自动微生物分析系统鉴定,纸片扩散法进行抗生素敏感试验,采用纸片协同法检测金属酶表型,PCR法扩增金属酶基因,并对PCR产物进行序列测定,确定亚型。结果 24株耐亚胺培南铜绿假单胞菌共检出产金属酶菌株7 株。该7 株细菌均扩增出IMP型金属酶,其扩增片段含500个核苷酸,核苷酸及氨基酸序列经GenBank分析,为IMP -1型金属酶(注册号:AY386702),但有3个位点的同义突变。结论 7 株临床分离的铜绿假单胞菌产生的金属酶为IMP -1亚型。

多黏菌素B和黏菌素体外药敏试验系统评估

目的:评估国内临床实验室常用的7种多黏菌素药物敏感性检测系统,为临床实验室对多黏菌素体外药物敏感性检测提供支持。方法:选取全中国多中心2017-2018年抗菌药物耐药趋势监测研究(SMART)项目中的512株革兰阴性菌,采用肉汤微量稀释(BMD)法检测菌株对多黏菌素B和黏菌素的最低抑菌浓度(MIC),选取MIC为0.25~64 mg/L的102株菌株,其中大肠埃希菌60株,肺炎克雷伯菌37株,不动杆菌属5株。采用BMD-A法、纸片扩散(KB)法、E-test法(Etest-A和Etest-B)和自动化药敏检测系统(NMIC/ID4、NMIC-413及DL-120,简称DL-120药敏系统)的4种方法,检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和不动杆菌属,对7种多黏菌素药物敏感性试剂及系统进行评估。以BMD法为参考方法分析4种方法与参考方法的基本一致率(EA)、分类一致率(CA)、非常严重错误(VME)及重大错误(ME)。结果:BMD-A试剂检测多黏菌素B的MIC的CA、EA均最高,分别为98%和85%,且VME最低,KB法检测多黏菌素B与黏菌素的抑菌圈直径和MIC存在相关关系(r=-0.579,r=-0.410;P<0.001)。在2种E-test法中,Etest-A法检测的CA、EA、VME和ME分别为93.1%、78.2%、13.3%和3.5%,而Etest-B的MIC偏低,VME为57.8%,相比于Etest-B,Etest-A的差异(MD)为26.5%。NMIC/ID-4及NMIC-413一致性较好,CA、VME均为95.1%和10.6%。DL-120药敏系统CA最低,为71.6%,且VME也略有欠缺,为61.7%。结论:BMD-A法试剂检测的菌株对多黏菌素B的MIC性能较好,NMIC/ID4与NMIC-413两种系统一致性较好,而Etest-B法对临床菌株检测有较高的VME,不应在临床用于多黏菌素B和黏菌素的体外敏感性检测。

东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的产酶情况及联合药敏试验

目的?研究东莞地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CRPA)的产酶现状和抗菌药物的体外联合抗菌活性,为临床治疗提供合理用药依据。方法收集CRPA菌株216株,采用eCIM实验筛查碳青霉烯酶,双纸片扩散法检测产酶表型,微量肉汤稀释法检测抗菌药物的单药和联合时的MIC值,判定联合抑菌效应。结果在216株CRPA中,产碳青霉烯酶占38.4%,其中单一产丝氨酸酶占17.6%,单一产金属酶占13.9%,同时产丝氨酸酶和金属酶占6.9%,不产碳青霉烯酶占61.6%。药物联合前后的MIC_(50)和MIC_(90)值均有明显降低。在联合药敏组合中,以协同和相加作用为主,头孢他啶与左氧氟沙星协同率最高,达到67.1%,其次为哌拉西林/他唑巴坦+左氧氟沙星、美罗培南+左氧氟沙星协同率分别为50.9%和50.0%,相加作用最高构成比为头孢哌酮+阿米卡星46.8%,无关作用构成比为8.3%~39.8%,拮抗作用构成比相对较低为1.4%~5.6%,4个单药与左氧氟沙星联合中协同和相加作用比与阿米卡星相对较强。结论产碳青霉烯酶不是东莞地区铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制,抗菌药物联合抑菌作用显著优于单一抗菌药物,以协同和相加作用为主,应用体外呈协同或相加效应的抗菌药物组合,可得到较高临床治愈率。

注射用亚胺培南西司他丁钠无菌检查法的优化及标准化

目的对注射用亚胺培南西司他丁钠的无菌检查方法进行优化及确认。方法依据《中国药典》2020版四部通则1101无菌检查法,对供试液、敏感菌、冲洗量和中和剂等可能的影响因素进行了探讨,并在供试液配制,滤膜,冲洗量及冲洗次数、中和剂及其使用量、阳性对照菌等方面对注射用亚胺培南西司他丁钠的无菌检查方法进行优化。结果选取4个厂家样品对注射用亚胺培南西司他丁钠的无菌检查方法进行确认,6株阳性试验菌在规定时间内都生长良好。结论该方法能有效去除注射用亚胺培南西司他丁钠的抑菌性,具有操作简便,高效可靠等优点,适用于注射用亚胺培南西司他丁钠上市抽验样品和批出厂产品的无菌检查。

E-test法检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌超广谱β-内酰胺酶

目的 研究临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌 ,对第三代头孢菌素和氨曲南的耐药性及其产超广谱 β-内酰胺酶的测定。方法 应用纸片扩散法检测从临床标本中分离的 10 7株大肠埃希菌和 78株肺炎克雷伯菌的耐药性 ;并对可疑菌株用 E- test法进行超广谱 β-内酰胺酶的测定。结果 大肠埃希菌对 5种抗生素的耐药率 :氨曲南为 2 .8% ;头孢曲松为 7.5 % ;头孢噻肟为 8.4 % ;头孢他啶为 9.3 % ;头孢哌酮为 15 .0 %。产酶株共有 17株 ,占15 .89%。肺炎克雷伯菌对 5种抗生素的耐药率 :头孢噻肟为 2 3 .1% ;头孢哌酮为 2 3 .1% ;头孢他啶为 2 6.9% ;头孢曲松为 3 0 .8% ;氨曲南为 3 4.6%。产酶株有 19株 ,占 2 4 .3 5 %。结论 大肠埃希菌较肺炎克雷伯菌耐药率低 ,其中对氨曲南敏感性最高 ,肺炎克雷伯菌对头孢噻肟及头孢哌酮敏感性最高 ,肺炎克雷伯菌较大肠埃希菌更容易产生超广谱

1999-2000年中国4所医院肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及卡他莫拉菌的耐药现状

目的 :调查近期我国 4所医院肺炎链球菌、流感嗜血杆菌及卡他莫拉菌耐药现状 ,以指导临床用药。方法 :采用Etest法测定 1999— 2 0 0 0年来自全国 4家医院分离的 5 5 3株肺炎链球菌、2 61株流感嗜血杆菌及 61株卡他莫拉菌对常用抗生素的最低抑菌浓度 (MICs) ;并测定 916株流感嗜血杆菌、10 1株卡他莫拉菌中 β内酰胺酶的产生。 结果 :对于肺炎链球菌 ,青霉素耐药株 (PRSP)为 13 .8% (中介的为 12 .1% ) ,阿莫西林 /克拉维酸、头孢曲松、头孢噻肟、头孢呋辛、氧氟沙星、万古霉素的敏感率为 95 .6%～ 10 0 % ,85 .1%的PRSP株 (MICs,0 .0 94～ 4 μg/ml)对头孢曲松敏感 ( 0 .0 16～ 0 .5 μg/ml)。红霉素、四环素、复方磺胺甲唑的耐药率高达 62 .9%～ 77.4 %。 10 .3 %的流感嗜血杆菌和 91.1%的卡他莫拉菌产 β内酰胺酶。对前者 ,头孢曲松、头孢噻肟、左氧氟沙星、阿莫西林 /克拉维酸、头孢呋辛、头孢克洛的敏感率为 97.1%～ 10 0 % (MIC90 为 0 .0 16～ 4 μg/ml) ,阿奇霉素的敏感性为 88.8%。所有的卡他莫拉菌对上述 7种抗生素均敏感。结论 :在中国 ,PRSP及产酶的流感嗜血杆菌的发生率较低 ,但卡他莫拉菌的产酶率较高。阿莫西林 /克拉维酸、及第二、三代头孢菌素对这 3种菌保持很高的活性。

2011年东莞市太平人民医院细菌耐药性监测

目的了解广东省东莞市太平人民医院2011年临床分离菌对常用抗菌药物的耐药情况。方法肺炎链球菌采用法国生物梅里埃公司的ATB STREP5药敏试验板条,流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌采用法国生物梅里埃公司的ATB HAEMO药敏试验板条进行抗菌药物的敏感性试验,其他细菌采用纸片扩散法(K-B法)进行抗菌药物敏感性试验,以CLSI 2010年版为判断标准,数据分析采用WHONET5.5软件。结果临床分离的1 355株细菌中,革兰阴性菌占64.6%(876/1 355),革兰阳性菌占35.4%(479/1 355)。MRSA和MRCNS的检出率分别为23.2%和86.7%,肺炎链球菌对青霉素的敏感率为97.5%。未检出糖肽类抗生素耐药的革兰阳性球菌。肠杆菌科细菌对亚胺培南、美罗培南高度敏感,产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别为58.4%(153/262)和39.9%(55/138)。从血培养中检出1株耐碳青霉烯类抗生素的大肠埃希菌,表型检测显示其产金属酶。鲍曼不动杆菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦和米诺环素的耐药率均低于20%。泛耐药鲍曼不动杆菌的检出率(19.2%,10/52)较2009年(3.3%,3/90)有明显上升。铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均低于10%。嗜麦芽窄食单胞菌对甲氧苄啶-磺胺甲口恶唑、左氧氟沙星和米诺环素的耐药率较低。未发现对阿莫西林-克拉维酸和头孢噻肟耐药的流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌。结论 2011年该院临床分离菌较以往的监测有较大变化,但仍以革兰阴性杆菌为主,所分离的革兰阴性杆菌对碳青霉烯类抗生素高度敏感。苛养菌中肺炎链球菌和流感嗜血杆菌所占比率有所上升。定期进行细菌耐药性监测有助于了解该院细菌及其耐药性的变迁,为临床经验用药和合理用药提供依据。

桥联双核Cu(Ⅱ)-Zn(Ⅱ)配合物抑菌活性的研究

现已发现，金属桥联多核结构广泛存在于生物体的金属蛋白及金属酶中，它们对生物体有着微妙的抑菌活性[1]。

何谓Etest法？它用于分枝杆菌药敏试验有哪些优点？

答:Etest法是根据琼脂扩散法原理,将不同浓度的药条贴于种有细菌的培养基表面,药物扩散形成浓度梯度,作用细菌后产生抑菌环,其他缘于药条的切点即为该药对该菌的最低抑菌浓度.Etest法是定量检测,结果准确,快速;操作简便,不需特殊仪器设备;可用于联合药敏试验;易于标准化操作和质量控制等.

肺炎球菌结合疫苗接种前后儿童中血清型19A分离物的特性

此研究评估了希腊引入肺炎球菌结合疫苗(PCVs)前后,来自肺炎球菌疾病(PD)儿童的肺炎球菌血清型19A分离物的的流行率和特性。1986—2015年在一家大型儿科医院收集到的肺炎链球菌分离株,通过肺炎球菌荚膜肿胀试验进行血清分型,用Etest法测定其MICs。通过聚合酶链反应检测pbp基因的变化和mefA、 mefE、 ermB基因的存在与否。基因型通过多位点序列分型(MLST)进行评估。

白色念珠菌的耐药性和随机扩增DNA多态性分型研究

采用Etest药敏试验方法检测 30株临床分离白色念珠菌对 5种抗真菌药物的敏感性 ,并用随机扩增DNA多态性 (RAPD)分型方法对这些菌株进行基因分型。结果发现有两株对氟康唑耐药 ,且它们的RAPD带型有着高度相似性 ,提示RAPD带型可能与耐氟康唑基因有关。