盐酸黄连素作为脱氧核糖核酸荧光染料染色效果的研究

考察了盐酸黄连素(berberine hydrochloride)的荧光强度与双链DNA的相关性;优选盐酸黄连素在琼脂糖凝胶电泳中的最佳条件;将其染色效果与溴化乙锭(EB)进行比较;并从相对迁移率角度研究盐酸黄连素对DNA凝胶电泳的影响。结果显示,双链DNA对盐酸黄连素有明显的荧光增强作用,荧光强度与dsDNA的浓度正相关;凝胶中10 mg/L的盐酸黄连素可分辨出10 ng的100 bp DNA条带,在完全相同的操作条件下,对于小片段dsDNA,其灵敏度略低于EB。因盐酸黄连素在碱性溶液中带正电荷,使DNA相对迁移率减小,但较染料EB的影响小。该研究为盐酸黄连素在日常分子生物学研究中的应用提供了理论依据。盐酸黄连素可以作为琼脂糖凝胶电泳中DNA的荧光染料,其荧光强度能够满足常规应用,可以替代强致癌性染料EB。

小檗碱和溴化乙锭与DNA的光谱学作用研究

利用荧光光谱、紫外-可见吸收光谱、圆二色谱、琼脂糖凝胶电泳方法研究了小檗碱(berberine)和溴化乙锭(EB)与ct-DNA的光谱学作用.在ct-DNA存在时,berberine和EB的荧光强度都有较大的提高,pH的改变对二者荧光光谱的发射峰位与强度影响不大;紫外-可见吸收光谱随ct-DNA浓度的增加,表现出减色效应;二者都使ct-DNA的圆二色谱正负峰的吸收强度有所增加;琼脂糖凝胶电泳实验表明,EB-DNA体系的发光强度高于berberine-DNA体系.在DNA的定量测定中,可用无毒、副作用的小檗碱代替有致癌性的溴化乙锭,为安全、无环境污染、定量测定DNA提供了新试剂使用基础.

核酸染料GeneGreen可影响DNA琼脂糖凝胶电泳条带的质量

目的探讨DNA琼脂糖凝胶电泳条带扭曲、"拖尾"的原因。方法采用"胶染法"和"后染法"2种方法,检测含2种核酸染料(GeneGreen和溴化乙锭)的琼脂糖凝胶中3种DNA Marker条带形态。结果采用"胶染法"的方式电泳,与相同浓度的溴化乙锭相比,含1∶10 000和1∶5 000 2种浓度的GeneGreen琼脂糖凝胶中3种DNA Marker条带呈现明显的扭曲和"拖尾"现象。而采用"后染法"的方式后,两种核酸染料所染的琼脂糖凝胶中3种Marker的条带均呈单一、无扭曲和"拖尾"现象。结论核酸染料GeneGreen可以影响琼脂糖凝胶电泳时DNA条带的质量。在排除DNA本身质量、琼脂糖凝胶质量、电泳液质量以及电压等因素后,若采用"胶染法"进行DNA核酸电泳时出现条带扭曲或"拖尾"时,应考虑到核酸染料质量的问题。采用"后染法"或更换核酸染料的种类可改善DNA电泳条带的质量。

试剂盒配合琼脂糖EB染色法和PAGE银染法分析线粒体DNA A1555G突变的比较研究

目的通过比较试剂盒配合琼脂糖EB染色法和PAGE银染法分析线粒体DNAA1555G突变的不同特点,探索应用标准试剂盒和PAGE银染方法检测线粒体DNAA1555G突变的快速筛查和诊断方法。方法采用线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法检测线粒体DNA1555位点正常者229例,A>G突变阳性者17例,验证此试剂盒配合PAGE银染法检测的有效性和准确性。结果线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法检测结果与酶切EB染色和测序结果完全吻合。结论线粒体DNAA1555G突变诊断试剂盒配合PAGE胶电泳银染法和试剂盒配合EB检测法较前者更为灵敏和清晰,在分析线粒体DNAA1555G突变方面具有简单、价廉、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查。

改良溴化乙锭染色法快速检测基因组DNA

目的探讨一种耗时少、检出率高的基因组DNA检测方法。方法采用改良的溴化乙锭染色法检测提取到的样本基因组DNA。采用分光光度仪进行敏感性验证,聚合酶链式反应确认该方法能否用来检测PCR产物。结果改良的溴化乙锭染色法显著减少基因组DNA的上样量,提高基因组DNA的检测敏感性,节省操作时间,无需loading buffer,并可粗略估计基因组DNA浓度。结论改良的溴化乙锭染色法只适用于初筛样本基因组DNA,不能用于评估DNA片段的长度。

核酸荧光染料在单细胞凝胶电泳中的染色比较

目的探讨4种核酸染料(EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO)在单细胞凝胶电泳(SCGE)中的染色特性,以分析用新型核酸荧光染料代替EB染料的可能性。方法分离提取健康人外周血淋巴细胞,分别用0、20、40、60、80μg/m L的H2O2进行处理,中性SCGE检测淋巴细胞DNA损伤情况;分别用EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO进行染色,荧光显微镜下观察并比较染色结果。分析尾部DNA百分含量(%Tail DNA)以比较组间差异。结果 SCGE结果表明,SYBR GreenⅠ、Gold View和AO均能很好的反应实验结果,不同浓度中,1×~5×SYBR GreenⅠ、2×~5×Gold View、2~5μg/m L AO为最佳染色浓度范围。EB、SYBR GreenⅠ、Gold View和AO的回归系数分别为2.71、2.81、2.73、2.75,其染色效果较为一致,稳定性分析结果表明,3组细胞在48 h以内结果稳定,%Tail DNA差异无统计学意义(P均>0.05);SYBR GreenⅠ、Gold View和AO实验室内精密度分别为6.92%、7.10%、8.25%,优于EB染色(8.35%);SYBR GreenⅠ和Gold View重复性分别为3.07%、2.74%,优于EB染色(3.59%)。结论SYBR GreenⅠ、Gold View和AO均可用于本实验染色,Gold View是更适合用于SCGE中替代EB的核酸荧光染料。

DNA显示中银染EB染色放射自显影三方法的比较研究

采用一种简化的银染方法 ,应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后DNA产物的显示。

溴化乙锭致小鼠外周血单个核细胞DNA损伤的研究

目的:应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,观察溴化乙锭(EB)对体外培养的小鼠外周血单个核细胞DNA的损伤情况及时间、剂量-效应关系。方法:利用碱性单细胞凝胶电泳法和片段化定量分析法研究在10.0 ng/L EB浓度水平下,培养时间从0～72 h,分析EB对单个核细胞DNA的损伤作用;分别以0、10.0 ng、20.0 ng、50.0 ng/L的EB处理小鼠外周血单个核细胞12 h和24 h,观察剂量-效应关系。结果:10.0 ng/L浓度EB处理的小鼠外周血单个核细胞与对照组在片段化和拖尾率均存在差别(P<0.01);DNA片段化和EB浓度之间存在相关性,24 h时r=0.902(P<0.01);48 h时r=0.819(P<0.05)。结论:溴化乙锭能够明显损伤小鼠外周血单个核细胞DNA,并且呈现明显的时间、剂量效应。