Extraction Process of Total Flavonoids from Eucommiae Cortex and Its in vitro Antioxidant Activity

[Objectives]To optimize the extraction process of total flavonoids from Eucommiae Cortex,establish the extraction and content determination methods of its medicinal materials,and study its in vitro antioxidant activity.[Methods]The total flavonoids from Eucommiae Cortex were extracted by reflux extraction method,and the effects of extraction method,extraction solvent concentration,extraction volume,and extraction time on the total flavonoids content of the medicinal materials were explored through the single factor experiment.Orthogonal experiment was carried out to optimize the extraction process conditions,and the optimal extraction process for total flavonoids from Eucommiae Cortex was screened out.The total antioxidant capacity index was used to determine the free radical scavenging ability of the total flavonoids from Eucommiae Cortex.[Results]The optimal extraction process of total flavonoids from Eucommiae Cortex was 50%ethanol,1∶40 solid-to-liquid-ratio,and 1.5 h reflux extraction time.Through the antioxidant experiment in vitro,it is found that the total flavonoids from Eucommiae Cortex have a higher scavenging ability for the total antioxidant capacity,and there is a certain positive correlation with the mass concentration of total flavonoids.[Conclusions]This method can effectively determine the total flavonoids content of Eucommiae Cortex medicinal material,and provide a certain scientific basis for the quality standard research of the medicinal material.The total flavonoids from Eucommiae Cortex have good in vitro antioxidant activity.And the method for extracting total flavonoids from Eucommiae Cortex medicinal material in this experiment has good repeatability,high stability and feasibility.

杜仲水提物上调Nur77表达促进骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化

背景:骨髓间充质干细胞作为成骨细胞的前体细胞,探索其分化机制对于预防和治疗骨质疏松症具有重大意义。杜仲能够诱导骨髓间充质干细胞成骨分化,但是杜仲对骨髓间充质干细胞增殖、分化以及Nur77/MDM2/p53通路的影响尚不明确。目的:探究杜仲水提物对骨髓间充质干细胞增殖和分化的影响并探讨其作用机制。方法:杜仲水提物处理人源和鼠源骨髓间充质干细胞,采用CCK-8法和Annexin V-FITC/PI法分别检测细胞增殖和凋亡情况,Western blot检测增殖、凋亡相关蛋白的表达,Nur77及其下游MDM2、p53相关蛋白的表达及泛素化前后的蛋白水平。成脂、成骨定向诱导分化后,Western blot检测脂肪细胞和成骨细胞的标志蛋白表达来评估其分化程度。转染Nur77 siRNA进入10 mg/mL杜仲水提物处理的骨髓间充质干细胞,检测细胞增殖、凋亡和分化情况。最后,敲低Nur77之后,使用p53抑制剂Pifithrin-α处理骨髓间充质干细胞,检测细胞增殖、凋亡和分化情况以明确其作用机制。结果与结论:①杜仲水提物可促进2种骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化,抑制凋亡和成脂分化;②杜仲水提物可上调Nur77、MDM2蛋白表达,促进p53蛋白泛素化;敲低Nur77基因则抑制MDM2蛋白表达及p53蛋白泛素化,促进p53蛋白表达,抑制2种骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化;③p53抑制剂可逆转Nur77 siRNA的作用,促进2种骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化,抑制凋亡和成脂分化;④结果表明,杜仲水提物可以通过Nur77/MDM2/p53途径促进2种骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化,为杜仲在骨相关疾病方面的研究提供理论参考。

杜仲叶提取物绿色合成纳米铂颗粒及其美白作用

以杜仲叶提取物为还原剂和稳定剂,采用一步法绿色合成纳米铂颗粒(PtNPs),通过单因素试验分析反应条件对PtNPs颜色和浓度的影响,并研究PtNPs对酪氨酸酶活性的影响。结果表明:在一定范围内改变反应条件可调控合成PtNPs的颜色和浓度,适宜反应条件为反应时间60 min、反应温度90℃、氯铂酸浓度3.5 mmol/L、杜仲叶提取物质量浓度10.0 mg/mL,在该条件下制备的PtNPs粒径平均尺寸为(2.27±0.65) nm,具有面心立方结构,分布较均匀;PtNPs对体外蘑菇酪氨酸酶活性有较强的抑制作用,IC50为(6.98±0.76)μg/mL,显著降低了A375细胞内酪氨酸酶活性和UVB诱导的黑色素含量,可达到美白皮肤的效果。

杜仲水提物诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞向神经元样细胞分化

目的 探讨杜仲水提物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(Rat pheochromocytoma cells, PC12细胞)向神经元样细胞分化的作用。方法 用0~10 mg·mL^(-1)杜仲水提物培养PC12细胞4 d,双抗噻唑蓝法(MTT法)检测吸光度(A值)并选取最佳浓度配置杜仲诱导培养基;诱导4 d后通过免疫荧光标记神经丝蛋白H(neurofilament-H,NF-H)检测诱导情况;通过免疫蛋白印迹检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinases, p-ERK)表达情况。结果 不同浓度杜仲培养4 d的PC12细胞,与空白对照A值相比,1~3 mg·mL^(-1)剂量组有增高趋势;4~7 mg·mL^(-1)剂量组有降低趋势;8~10 mg·mL^(-1)剂量组显著降低(P<0.05)。4 mg·mL^(-1)含杜仲诱导培养基培养PC12细胞4 d, 90%以上分化为神经元样细胞,细胞胞体变大,突起伸长,互相连接成网,约20%突起长度> 30μm,显著高于对照组。随着诱导时间的延长,NF-H表达逐渐增多增强,诱导4 d后,约90%以上的细胞NF-H强阳性表达,p-ERK蛋白表达水平较对照组明显降低。结论 杜仲水提物能够诱导PC12细胞分化为神经元样细胞,表达神经元特异蛋白神经丝蛋白,其机制可能与ERK信号通路调节密切相关。

蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法测定杜仲水提液多糖含量

采用蒽酮-硫酸法测定杜仲水提液中总糖含量,3,5-二硝基水杨酸法测定杜仲水提液中单糖含量,多糖含量为总糖与还原糖含量之差。该法简便、快速、准确、稳定,为其他材料水提液中多糖定量提供参考。

杜仲内树皮化学组成及抽提成分的研究(英文)

研究了杜仲内树皮及其抽提物的一般物、矿物质、脂肪酸与单糖的化学组成。结果表明，碳水化合物（92．97％）、钙（5．1769mg／g）、α-亚麻酸（27．4％）及葡萄糖（130．51mg／g）分别是杜仲内树皮的一般物、矿物质、脂肪酸与单糖的主要组成成分。采用Sephadex LH-20柱色谱及薄层色谱等方法，从其70％丙酮提取物水溶性部分分到5种化合物，经波谱分析及理化性质化舍物分别鉴定为：紫云英苷（1）、异槲皮苷（2）、槲皮素-3-O-木糖葡萄糖苷（3）、异绿原酸A（4）、异绿原酸C（5）。化合物3—5为首次从该植物中分得。

杜仲叶中绿原酸的提取纯化研究

目的研究杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法。方法采用水提、絮凝脱色、树脂吸附、重结晶工艺提取纯化。结果杜仲叶的水浸提液浓缩后用1%壳聚糖絮凝去杂、活性碳脱色得到进样液,进样液用NKA-9树脂吸附,50%乙醇解吸,洗脱液浓缩后的粗品经甲醇重结晶得到纯度≥97%的绿原酸,提取率≥65%。结论优化完善了杜仲叶中绿原酸的提取纯化方法,为杜仲资源的充分综合利用和产业化开发提供了参考。

杜仲盐制前后质量变化的比较研究

目的:研究杜仲盐制前后质量的变化。方法:通过杜仲盐制前后松脂醇二葡萄糖苷的含量、醇溶性浸出物以及指纹图谱的变化进行比较研究。结果:杜仲盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量均有不同程度的下降,醇溶性浸出物因产地的不同而呈现出不同的变化趋势,杜仲指纹图谱共标出指纹峰11个,盐杜仲则标示出8个。结论:杜仲经盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量下降,醇溶性浸出物也发生改变,杜仲盐制后HPLC色谱指纹图谱指纹峰减少,且大部分成分含量下降。

双水相体系萃取分离杜仲黄酮

目的:研究双水相体系萃取分离杜仲黄酮的工艺条件。方法:以高分子化合物聚乙二醇4000(PEG4000)/葡聚糖40000(D40)为双水相体系,考察了萃取体系相图,研究了PEG4000/D40质量分数、样品溶液加入量、pH值和温度等因素对双水相成相及杜仲黄酮萃取效果的影响。结果:最佳萃取工艺条件是采用质量分数为11%的PEG4000和质量分数为8%的D40组成双水相体系,加入杜仲黄酮含量为6.85%的样品溶液8 g,控制温度为60℃、溶液pH为8,此条件下杜仲黄酮有较高的萃取率,可达到75.82%。结论:该方法操作条件温和,无溶剂残留,耗时少,对杜仲黄酮的单级分离提纯效率高。

双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的研究

建立了由高分子化合物聚乙二醇(PEG4000)与葡聚糖40000(D40)形成的双水相体系萃取分离杜仲叶中桃叶珊瑚甙的新方法。考察了萃取体系相图,研究了PEG4000/D40质量分数、样品溶液加入量、pH值和温度等因素对双水相成相及桃叶珊瑚甙萃取率的影响。结果表明:PEG4000的质量分数为11%,D40质量分数为8%、样品溶液加入量为8g,温度为60℃,溶液pH为7时,双水相体系对桃叶珊瑚甙有较高的萃取率,重复三次可达到66.32%,而且萃取得到的桃叶珊瑚甙产品的纯度达到48.67%,远远高于粗提物中的8.750%。

杜仲药用有效成分提取方法研究

为优选杜仲的提取工艺条件 ,本实验以杜仲提取液中氯原酸的含量和浸膏得率为指标 ,采用四因素三水平正交设计法 ,筛选影响杜仲提取工艺的因素 ,探索最优的提取工艺条件。实验证明合理的提取方法为 :12倍 6 0 %的乙醇回流 3次 ,每次 2小时 ;所得杜仲提取物中氯原酸含量为 8 72mg/g生药 ,浸膏得率为 2 0 6 8%。

酶法及半仿生法提取杜仲叶中绿原酸和黄酮

为优选杜仲叶中绿原酸和黄酮提取最佳工艺,以绿原酸和黄酮含量为考察指标,通过正交实验对半仿生法和酶法两种提取方法进行了优化。半仿生法的工艺条件为:杜仲叶为原料,以磷酸氢二钠-柠檬酸的缓冲溶液作为提取液,m(杜仲叶)∶m(提取液)=1∶20,提取液pH分别为2.0,7.5,8.3,在70℃,每次提取1 h,提取3次;在此条件下,绿原酸的得率达1.44%,黄酮得率达0.044%。果胶酶提取的工艺条件为:杜仲叶为原料,以磷酸氢二钠-柠檬酸的缓冲溶液作为提取液,m(杜仲叶)∶m(提取液)=1∶15,果胶酶酶解温度为60℃;提取液pH为3.6;每5 g杜仲叶中加入质量分数为0.5%果胶酶1.5 mL,酶解2 h后,升温至80℃,每次1 h,提取3次;在此条件下,绿原酸的得率达1.29%,黄酮得率达0.043%。

绿原酸的提取分离及含量测定

绿原酸是一种重要的生物活性物质。以杜仲叶为原料,采用丙酮-水溶液体系作浸提剂对绿原酸提取工艺进行了研究。结果表明,最佳提取工艺为浸提温度65℃,丙酮浓度40%,料液比1∶12,浸提时间3 h;经聚酰胺柱层析分离后,绿原酸得率可达27.4%,绿原酸产品纯度可达77.04%。

杜仲总木脂素的超声波辅助提取工艺研究

对杜仲总木脂素的超声波提取工艺进行了研究。通过单因素法分析了乙醇体积分数、液料比、超声波时间对杜仲总木脂素提取率的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验设计方法,对超声波辅助提取杜仲总木脂素的工艺条件进行了优化。结果表明,1 g杜仲总木脂素的最佳超声波辅助提取工艺为:使用体积分数为65%的乙醇,液料比20∶1(mL∶g),浸泡12 h后,超声波辅助提取45 min,超声波功率250 W,提取1次。在此实验条件下,提取所得杜仲总木脂素的质量分数为7.652%,提取率为97.75%。

杜仲叶中总黄酮的醇提工艺

在杜仲叶中总黄酮的提取实验中,单因素考察了乙醇浓度、提取温度、提取时间等因素的影响趋势,并以正交实验设计优选最佳提取条件,即以12倍量的50%乙醇,在80℃条件下回流提取60 min,重复提取一次,总黄酮得率达3.08%,占固体提取物的31.9%,得率稳定、重现性较好。

响应面法优化杜仲叶中总多酚超声波辅助提取工艺研究

采用响应面法优化杜仲叶中总多酚超声波辅助提取工艺。考察了提取溶剂、液料比、提取时间、提取温度及提取次数对提取工艺的影响,在单因素实验分析的基础上采用Box-Benhnken中心组合进行4因素3水平的实验设计,以总多酚得率为响应值,进行响应面分析,建立二次多项回归数学模型,并优化提取工艺。结果表明杜仲叶中总多酚超声波辅助提取最佳工艺为:55%乙醇、液料比为25∶1mL·g-1、45℃下提取25min,提取两次,在此条件下,总多酚得率为4.678%。

杜仲中松脂醇二葡萄糖甙的提纯

对杜仲中活性成分松脂醇二葡萄糖甙(PinoresinolDiGlucoside,即PDG)提取、纯化工艺进行了研究,并使用高效液相色谱法测定PDG含量.结果表明:杜仲粉用体积分数为60%的乙醇水溶液,60℃,提取2次,每次1h,PDG提取率可达90%以上.分别采用4种大孔树脂对提取液进行分离纯化处理,以不同浓度的乙醇水溶液进行梯度洗脱,发现S型树脂对此种活性成分选择性好、吸附量大,用体积分数为40%的乙醇水溶液洗脱可将其完全解吸附,PDG的收率达45.2%.在C18色谱柱上,以体积分数为26%的甲醇水溶液为流动相,流速为1.0mL/min,在λ=228nm处,对杜仲原料中PDG进行了测定,结果表明炮制后的杜仲皮的PDG质量分数较高,为0.497%.

离子液体超声波辅助法提取杜仲皮总木脂素的工艺研究

采用离子液体(ILs)超声波辅助法提取杜仲皮总木脂素,考察了ILs种类、料液比、溶剂浓度、提取温度、提取时间、浸泡时间、提取次数对杜仲皮总木脂素得率的影响,采用响应面法优化提取工艺。结果表明,超声波辅助离子液体提取杜仲皮总木脂素的最佳工艺为:0.87 mol/L的[C_4mim]BF_4溶液,液料比18∶1 m L/g,浸泡时间2 h,提取1次,提取温度54℃,提取时间30 min,总木脂素得率11.03%。此法快速、高效、简单、重现性好。

杜仲提取物抗运动疲劳作用的实验研究

目的探讨杜仲提取物对大鼠激素水平、物质代谢及运动能力的影响。方法 SD大鼠随机分为安静对照组、力竭运动组、力竭运动加药组(服用杜仲提取物)。7周力竭运动后取材测定血清胰岛素、胰高血糖素、生长激素、血糖、肝糖原、肌糖原、乳酸血尿素和血红蛋白等生物化学指标。结果①与安静对照组比较:力竭运动组大鼠胰岛素和生长激素水平显著低于安静对照组,(P<0.05或P<0.01),胰高血糖素水平显著高于安静对照组(P<0.05);肝糖原、肌糖原含量及血糖浓度显著低于安静对照组,且均有极显著性差异(P<0.01);血乳酸浓度和肌乳酸含量均显著高于安静对照组(P<0.01),BU浓度极显著高于安静对照组(P<0.01),Hb含量显著低于安静对照组(P<0.05);跑台运动至力竭时间显著长于安静对照组(P<0.05)。②与力竭运动组比较:力竭运动加药组大鼠胰岛素和生长激素水平均极显著高于力竭运动组(P<0.01),胰高血糖素水平显著高于力竭运动组(P<0.05);肝糖原含量及血糖浓度极显著高于力竭运动组(P<0.01),肌糖原含量显著高于力竭运动组(P<0.05);血乳酸和肌乳酸浓度极显著低于力竭运动组(P<0.01);BU浓度极显著高于力竭运动组(P<0.01),Hb含量极显著低于力竭运动组(P<0.01);大鼠跑台运动力竭时间有显著的延缓作用(P<0.05)。结论杜仲提取物可提高力竭运动大鼠激素水平,改善物质代谢,延长运动时间,增强运动能力。

杜仲叶绿原酸提取纯化工艺的研究

以乙醇为溶剂提取杜仲叶绿原酸 ,采用响应面分析法优化工艺条件 ,其最佳工艺条件为 :乙醇浓度5 1 7% ,提取温度 5 5 8℃ ,料液比 1∶12 8,提取时间 2h。通过对 6种树脂进行静态吸附实验 ,选出NKA Ⅱ树脂为吸附分离杜仲叶绿原酸的最佳树脂 ,最佳吸附 解吸条件 :吸附流速 2ml/min ,原液过柱吸附 2次 ,最佳吸附剂为4 0 %乙醇。