杜仲叶水提取物对植物乳杆菌体外益生特性影响

为明确杜仲叶水提取物对植物乳杆菌体外益生特性的影响,采用活菌计数、扫描电镜和气相色谱等方法探究不同浓度ELWE对植物乳杆菌生长曲线、产酸性能、形态和耐受性等的影响。结果表明,培养24 h后,试验组的活菌数均显著高于对照组;ELWE(80,320 mg/mL)使植物乳杆菌菌体更加饱满,且能显著提高其产乳酸能力,36 h时乳酸含量分别提高42.07%和111.64%。在胃液环境的胁迫下,80 mg/mL ELWE组的对数存活率达到87.77%(3 h),显著高于对照组(0%);80 mg/mL ELWE可显著提高植物乳杆菌在热、NaCl、胆盐和真空冷冻干燥胁迫环境下的活菌数,分别保持在5.67,8.16,7.65,7.78 lg CFU/mL。80 mg/mL ELWE对植物乳杆菌体外益生特性有积极影响。研究为ELWE在益生菌行业的应用提供理论参考。

杜仲水提物诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞向神经元样细胞分化

目的 探讨杜仲水提物对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(Rat pheochromocytoma cells, PC12细胞)向神经元样细胞分化的作用。方法 用0~10 mg·mL^(-1)杜仲水提物培养PC12细胞4 d,双抗噻唑蓝法(MTT法)检测吸光度(A值)并选取最佳浓度配置杜仲诱导培养基;诱导4 d后通过免疫荧光标记神经丝蛋白H(neurofilament-H,NF-H)检测诱导情况;通过免疫蛋白印迹检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)及磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular signal regulated kinases, p-ERK)表达情况。结果 不同浓度杜仲培养4 d的PC12细胞,与空白对照A值相比,1~3 mg·mL^(-1)剂量组有增高趋势;4~7 mg·mL^(-1)剂量组有降低趋势;8~10 mg·mL^(-1)剂量组显著降低(P<0.05)。4 mg·mL^(-1)含杜仲诱导培养基培养PC12细胞4 d, 90%以上分化为神经元样细胞,细胞胞体变大,突起伸长,互相连接成网,约20%突起长度> 30μm,显著高于对照组。随着诱导时间的延长,NF-H表达逐渐增多增强,诱导4 d后,约90%以上的细胞NF-H强阳性表达,p-ERK蛋白表达水平较对照组明显降低。结论 杜仲水提物能够诱导PC12细胞分化为神经元样细胞,表达神经元特异蛋白神经丝蛋白,其机制可能与ERK信号通路调节密切相关。

蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法测定杜仲水提液多糖含量

采用蒽酮-硫酸法测定杜仲水提液中总糖含量,3,5-二硝基水杨酸法测定杜仲水提液中单糖含量,多糖含量为总糖与还原糖含量之差。该法简便、快速、准确、稳定,为其他材料水提液中多糖定量提供参考。

不同方法提取杜仲中桃叶珊瑚苷等4种高活性成分的比较研究

为研究生物化学方法对杜仲中高活性成分的提取率,本文以高效液相色谱法检验样品中提取出活性成分的含量差异,比较了在相同条件下酶解法、水提法、醇提法对杜仲树皮中桃叶珊瑚苷、京尼平苷、京尼平苷酸与绿原酸这4种活性成分的提取量,并对4种活性成分的不同提取效果进行了比较研究。结果发现三种方法的提取量存在明显差异,其中桃叶珊瑚苷提取量为:酶解法22. 42μg/g,水提法8. 27μg/g,醇提法9. 13μg/g;京尼平苷提取量为:酶解法77. 89μg/g,水提法33. 19μg/g,醇提法7. 76μg/g;京尼平苷酸提取量为:酶解法110. 05μg/g,水提法36. 63μg/g,醇提法47. 40μg/g;绿原酸提取量为:酶解法345. 35μg/g,水提法118. 85μg/g,醇提法172. 04μg/g,即酶解法提取量均比水提法、醇提法高出数倍。实验表明酶解法是3种方法中提取效果最好的,且无化学污染。

醇提水沉与水提醇沉提取杜仲叶活性成分的比较研究

分别采用正交设计实验考察了提取溶剂浓度、提取次数、提取时间、溶剂用量以及醇沉溶剂浓度等对醇提水沉法和水提醇沉法提取杜仲叶活性成分的影响,结果表明,无论是活性成分的含量,还是活性物质的得率,醇提水沉法都优于水提醇沉法.

杜仲雄花水提物镇静催眠作用的研究

研究不同剂量杜仲雄花水提取物的镇静催眠作用,并分析其有效作用剂量。观察不同剂量水提取物对小鼠自主活动的影响以及直接镇静催眠作用、与戊巴比妥钠的协同作用和抗惊厥作用。结果显示,杜仲雄花水提物能显著增加小鼠睡眠率,有效减少小鼠的自主活动次数;与戊巴比妥钠有较好的协同作用,能显著增加阈下剂量的小鼠睡眠率,延长阈上剂量的睡眠时间,缩短睡眠潜伏期;杜仲雄花水提物能一定程度上降低尼可刹米导致的小鼠惊厥率,延长惊厥潜伏期。杜仲雄花水提物具有一定的镇静催眠作用。

杜仲盐制前后质量变化的比较研究

目的:研究杜仲盐制前后质量的变化。方法:通过杜仲盐制前后松脂醇二葡萄糖苷的含量、醇溶性浸出物以及指纹图谱的变化进行比较研究。结果:杜仲盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量均有不同程度的下降,醇溶性浸出物因产地的不同而呈现出不同的变化趋势,杜仲指纹图谱共标出指纹峰11个,盐杜仲则标示出8个。结论:杜仲经盐制后松脂醇二葡萄糖苷的含量下降,醇溶性浸出物也发生改变,杜仲盐制后HPLC色谱指纹图谱指纹峰减少,且大部分成分含量下降。

杜仲叶水煎及醇提液中无机元素赋存形态分析

通过水煎及醇提法对杜仲叶中铁、锌、铜、锰、钾、钠、钙和镁8种无机元素进行提取,分别用微孔滤膜、D101大孔树脂、732阳离子树脂、D402螯合树脂将无机元素分为初级形态及次级形态。采用环己烷-正丁醇分配体系模拟人体肠胃条件将无机元素分为脂溶态和水溶态,用火焰原子吸收光谱法（FAAS）对各种形态的无机元素进行测定。结果表明：杜仲叶醇提液中各无机元素提取率均高于水煎液;杜仲叶醇提液中8种无机元素的提取率为6.61%-89.30%;次级形态分析参数表明各无机元素均以某种次级形态为主的多种形态共存于可溶态溶液中。该法测定各元素的回收率为98.99%-104.0%,相对标准偏差在0.35%-1.11%之间,具有良好的精密度和准确度。

杜仲皮水提液对大鼠成骨细胞BMP2基因表达的影响

研究旨在观察杜仲皮水提液对大鼠成骨细胞BMP2基因表达的影响,为补肾中药治疗骨质疏松等骨科疾病提供基础数据,采用酶消化法分离大鼠颅骨成骨细胞,取第2代成骨细胞,加入不同浓度的杜仲皮水提液(3×10^(-1)~3×10^(-5) mg·mL^(-1)),提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测成骨细胞BMP2基因表达的变化。结果显示:杜仲皮水提液浓度为3×10^(-1) mg·mL^(-1)、作用24 h时对大鼠成骨细胞BMP2基因表达有显著的促进作用。说明杜仲皮水提液能够促进大鼠成骨细胞BMP2基因的表达,尤其是较高浓度(3×10^(-1) mg·mL^(-1))作用24 h时促进作用更加明显。

杜仲叶水溶性活性成分提取工艺研究

采用正交设计实验研究了有机溶剂体积分数、提取次数、提取时间和料液比对杜仲叶水溶性活性成分提取的影响,确定了最佳提取工艺,实验中发现,有机溶剂体积分数影响最大,提取时间和提取次数影响次之,料液比影响不大.

杜仲水提物对脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响

目的探索杜仲水提物对脑梗死大鼠神经细胞凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为对照组、模型组、杜仲水提物组和Ravoxertinib组,各10只。HE染色检测大鼠大脑皮质损伤、TUNEL染色检测大鼠大脑皮质细胞凋亡、ELISA法检测氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平;Western印迹检测大鼠大脑皮质中ERK1/2信号通路。结果HE染色结果显示,对照组大鼠脑组织无明显病理变化,模型组大鼠脑组织病理损伤显著增加(P<0.05),杜仲水提物组和Ravoxertinib组大鼠脑组织病理损伤明显减轻(P<0.05);与对照组大鼠相比,模型组大鼠神经细胞凋亡率、Caspase-3和MDA水平、p-ERK1/2/ERK1/2和Bax表达水平明显升高,SOD水平明显降低(P<0.05);与模型组大鼠比较,杜仲水提物组大鼠和Ravoxertinib组大鼠神经细胞凋亡率、Caspase-3和MDA水平、p-ERK1/2/ERK1/2和Bax表达水平明显下降,SOD含量明显上升(P<0.05);与杜仲水提物组大鼠比较,Ravoxertinib组大鼠上述指标无明显差异(P>0.05)。结论杜仲水提物通过调控ERK1/2信号通路,改变大鼠脑组织神经细胞生物学行为,调节氧化应激反应,从而对脑梗死发挥治疗作用。

杜仲皮水提取物调节circFADS2靶向miR-491-5p干预类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞生长与凋亡

目的:探讨杜仲皮水提取物(water extract of Eucommia cortex,WEEC)对类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)生长与凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度WEEC(0.1、0.3、0.9和2.7 g/L)处理RA-FLS,CCK-8法检测细胞活力,选取最适WEEC浓度进行后续实验。细胞分别转染pcDNA-circFADS2和/或anti-miR-491-5p,探讨WEEC对RA-FLS生长与凋亡的影响及分子机制:用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测cleaved caspase-3的蛋白水平;RT-qPCR检测环状RNA-FADS2(circular RNA-FADS2,circFADS2)和miR-491-5p的表达水平;双萤光素酶基因报告实验检测circ-FADS2和miR-491-5p的靶向关系。结果:不同浓度WEEC处理后,RA-FLS的活力降低,凋亡率升高,cleaved cas-pase-3蛋白水平升高,circFADS2表达水平降低,miR-491-5p表达水平升高(P<0.05)。过表达circFADS2或抑制miR-491-5p表达后,WEEC处理的细胞活力升高,凋亡率及cleaved caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。circFADS2靶向调控miR-491-5p,过表达miR-491-5p逆转了circFADS2质粒对WEEC处理的RA-FLS活力与凋亡的影响。结论:杜仲皮水提取物通过调节circFADS2/miR-491-5p抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞生长并促进其凋亡。

杜仲皮水提取物及醇提取物预灌胃大鼠肝脏缺血再灌注处理后肝损伤情况观察

目的观察杜仲皮水提取物及醇提取物灌胃大鼠肝脏缺血再灌注处理后肝脏的损伤情况。方法 64只SPF级SD大鼠随机分为8组(假手术组,HIRI组,水提取物高、中、低剂量组,醇提取物高、中、低剂量组)。水及醇提取物组使用杜仲皮提取物(其余两组使用相同体积双蒸水)对大鼠进行灌胃预处理10 d,提取物剂量分别为80、40、20 g生药/kg。除假手术组外,其余7组进行缺血再灌注处理(缺血1 h,再灌注4 h)。再灌注4 h后,颈椎脱臼法处死大鼠,立即收集肝下腔静脉血,取肝脏标本。采用全自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。HE染色观察肝组织病理改变情况。ELISA法检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β);硫代巴比妥酸法测定肝组织中丙二醛(MDA);黄嘌呤氧化酶法检测肝组织中过氧化物歧化酶(SOD);Western-blotting法检测肝组织中Caspase3蛋白。结果与假手术组比较,HIRI组及各预处理组大鼠血清ALT、AST水平明显升高,但各预处理组以上指标的变化程度均较HIRI组降低,其中以水提取物组的血清ALT、AST降低明显(P均<0.05)。除假手术组外,其余各组大鼠肝组织均有不同程度的病理损伤改变,但各提取物组的肝损伤情况均较HIRI组有明显改善,其中水提取物组改善最为明显(P均<0.05)。与假手术组比较,HIRI组及各提取物组肝组织TNF-α、IL-1β水平及MDA水平明显升高,SOD水平降低,而各提取物组以上指标的变化程度均较HIRI组降低,以水提取物组为著(P均<0.05)。与假手术组相比,HIRI组Caspase3蛋白升高(P<0.05);与HIRI组相比,水提取物高剂量组Caspase3蛋白相对表达量降低(P<0.05)。结论杜仲皮水提取物及醇提取物灌胃大鼠肝脏缺血再灌注处理后肝脏的损伤程度降低,且降低程度呈现浓度依赖性,水提取物比醇提取物抑制肝脏损伤的作用更强;杜仲皮水提取物及醇提取物可能通过抑制肝组织炎症、氧化应激反应而起作用;杜仲皮水提物也可通过抑制细胞凋亡而起作用。

杜仲不同炮制品的水提液指纹图谱对比研究

目的:建立杜仲不同炮制品(生品、盐品与炭品)的水提液指纹图谱,从整体水平表征杜仲炮制前后的化学成分变化,为杜仲质量控制提供参考。方法:采用HPLC法,Kromasil 100-5-C18色谱柱,0. 3%磷酸水溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为1 m L/min,检测波长为238 nm。建立10批杜仲不同炮制品水提液的指纹图谱,利用中药指纹图谱相似度评价系统(2012A版)计算相似度,同时运用聚类分析(HCA)和主成分分析(PCA)对杜仲炮制前后进行模式识别分析。结果:建立了杜仲不同炮制品的水提液指纹图谱,生品标定了7个共有峰,盐品标定了7个共有峰,炭品标定了8个共有峰,并指认了其中5个共有峰。HCA和PCA模式识别能够明显区分杜仲不同炮制品。结论:HPLC指纹图谱结合化学模式识别能够有效地区分杜仲不同炮制品,为其质量控制研究提供参考。

杜仲叶中绿原酸提取工艺的优化

分别以水和乙醇溶液为溶剂从杜仲(Ecommia ulmoides Oliv.)叶中提取绿原酸,采用高效液相色谱法测定提取物中绿原酸的含量并计算提取率,设计正交试验优化提取工艺。结果表明,优化的醇提法工艺条件为料液比1∶15(m∶V,g/mL)、体积分数30%的乙醇作溶剂、提取时间2.0 h、提取次数2次;优化的水提法工艺条件为料水质量比1∶10、提取温度60℃、提取时间1.5 h、提取次数2次。

杜仲皮多糖提取工艺的研究

用蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定多糖含量。以多糖得率为指标,采用正交实验法分别对水提和醇沉过程的条件进行优选,最佳水提工艺为:提取温度100℃,料液比1:10,提取2次,每次4h;最佳醇沉工艺为:浓缩液加入3倍体积100%乙醇,沉淀4h,此工艺条件下多糖得率为1.58%。该工艺简单,适于杜仲皮多糖提取。

亚临界水萃取杜仲叶黄酮类化合物工艺优化研究

以杜仲叶为原料,采用亚临界萃取法提取黄酮类化合物,通过单因素及正交试验确定亚临界萃取的最优工艺条件。在最优的工艺下提取黄酮类化合物,并与超声波法提取黄酮类化合物得率进行对比。研究表明,亚临界萃取的最优条件为:提取温度120℃、提取时间30 min、料水比(g/m L)1∶25、压力1.0 MPa,此工艺条件下黄酮类化合物得率可达(3.09±0.06)%,超声波法黄酮类化合物得率仅为(2.17±0.05)%。亚临界萃取法能够大幅度提高黄酮类化合物的得率。