基于网络药理学探究地锦草防治溃疡性结肠炎的作用机制

【目的】基于网络药理学并结合分子对接方法分析地锦草防治溃疡性结肠炎(UC)的活性成分和靶点,探究其潜在机制,进而保护动物肠道。【方法】利用TCMSP数据库获取地锦草的活性成分及对应药物靶点。通过GeneCards、DisGeNET、TTD、PharmGKB和DrugBank数据库获取疾病靶点。药物靶点和疾病靶点取交集获取潜在靶点,分别借助STRING和DAVID数据库对潜在靶点进行蛋白互作(PPI)分析及GO功能和KEGG通路富集分析。借助AutoDock 1.5.7软件进行分子对接验证,利用PyMOL软件将对接结果可视化。通过体内试验利用30只BALB/c小鼠制作葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的UC模型,设置对照组、模型组、地锦草低(5 mg/mL)、高(15 mg/mL)剂量组、美沙拉嗪组(52 mg/mL)。除对照组外,其余各组小鼠连续7 d自由饮用3%DSS诱导UC模型,各给药组小鼠每天灌胃1次,根据小鼠体重灌胃相应剂量的药物0.1 mL/10 g,对照组和模型组小鼠灌胃等体积无菌生理盐水,连续7 d,测其体重变化、疾病活动指数(DAI)评分和结肠长度,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL6)和IL10含量。【结果】地锦草主要活性成分有山柰酚、4’-5二羟基黄酮和鞣花酸等,对应的药物靶点256个,疾病靶点4265个,潜在靶点128个,核心靶点7个。GO功能富集涉及对活性氧的反应、对氧化应激的反应、炎症反应、膜筏、小窝、激酶调节剂活性等。KEGG信号通路涉及PI3K-Akt和TNF信号通路等。分子对接结果显示,山柰酚和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、4’,5-二羟基黄酮和PPARG、鞣花酸和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、鞣花酸和IL6具有较强结合潜力。体内试验结果表明,与对照组相比,模型组小鼠体重严重下降,严重的甚至出现水样血便,DAI评分极显著升高(P<0.01),结肠组织的黏膜层及黏膜下层出现大量炎性细胞浸润,甚至有小溃疡的出现,表明小鼠UC造模成功。与模型组相比,各给药组小鼠结肠组织黏膜层炎症细胞浸润减少,DAI评分极显著降低(P<0.01),结肠挛缩情况好转,TNF-α和IL6含量显著减少(P<0.05),IL10含量显著增加(P<0.05),抑制炎症发生。【结论】地锦草中的山柰酚、4’-5二羟基黄酮和鞣花酸等主要活性成分可能通过作用于AKT1、PPARG和IL6等核心靶点参与炎症相关信号通路及生物功能,抑制炎症,减轻肠道损伤,从而发挥防治UC的效用。

基于非靶向代谢组学的斑地锦叶片和乳汁成分分析

为比较斑地锦(Euphorbia maculata L.)叶片和乳汁所含活性成分的差异,通过液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)进行相关代谢物数据采集,基于非靶向代谢组学对斑地锦叶片和乳汁的化学成分进行分析,采用主成分分析、多元统计分析、正交偏最小二乘判别分析相结合的方法鉴定差异代谢物,通过文献检索归纳比较叶片和乳汁主要差异代谢物的药理活性。结果表明,在斑地锦叶片和乳汁中共鉴定出1229种代谢物,主要为生物碱(217种)、苯丙素及其衍生物类(178种)、脂类(147种)、萜类(137种),黄酮类(113种)等化合物。通过多元统计分析筛选出859种差异代谢物,有466种代谢物在乳汁中高表达,其中3-脱氢莽草酸(酚酸类)、山梨酸(萜类)、原儿茶酸(酚酸类)、肉桂醛(苯丙素及其衍生物类)、橙皮苷(黄酮类)、川芎内酯(萜类)、α-细辛脑(苯丙素及其衍生物类)、水杨酸(酚酸类)、D-樟脑(萜类)、蒙花苷(黄酮类)、反式阿魏酸(苯丙素及其衍生物类)、姜黄素(酚酸类)、二十碳五烯酸乙酯(脂类)、β-石竹烯(萜类)等14种代谢物首次在斑地锦中被报道。斑地锦黄酮类活性成分在叶片中的表达量均明显高于乳汁;没食子酸乙酯、原儿茶酸乙酯、反式阿魏酸在乳汁中的表达量均明显高于叶片,其中反式阿魏酸在乳汁中的表达量为叶片的57.74倍。综上,斑地锦叶片和乳汁中代谢物成分和含量具有显著差异。

地锦草总黄酮对罗斯308肉鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及盲肠菌群的影响

试验旨在研究地锦草总黄酮对罗斯308肉鸡生长性能、免疫功能、抗氧化能力及盲肠菌群的影响。选取240只1日龄雄性罗斯308肉鸡随机分为3组,每组4个重复,每个重复20只鸡,试验期42 d。对照组饲喂基础日粮,地锦草总黄酮组饲喂基础日粮+300 mg/kg地锦草总黄酮,土霉素组饲喂基础日粮+200 mg/kg土霉素。结果显示:与对照组相比,地锦草总黄酮组1~21日龄和1~42日龄平均日增重显著升高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),与土霉素组无显著差异(P>0.05);地锦草总黄酮组血清免疫球蛋白水平显著高于对照组(P<0.05),免疫器官指数显著高于对照组和土霉素组(P<0.05);地锦草总黄酮组血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于对照组和土霉素组(P<0.05),丙二醛含量显著低于对照组和土霉素组(P<0.05);地锦草总黄酮组盲肠菌群多样性显著高于土霉素组(P<0.05);在科和属水平上,地锦草总黄酮组普雷沃氏菌科、p_251_o5菌科及其未培养菌属、螺旋体科及密螺旋体2属、纤维杆菌科及纤维杆菌属和WCHB1_41未培养菌科及未培养菌属等有益微生物的相对丰度显著高于对照组和土霉素组(P<0.05);莫拉菌科及不动杆菌属、动球菌科及土源芽孢杆菌属和赖氨酸芽孢杆菌属显著富集于土霉素组(P<0.05)。研究表明,罗斯308肉鸡日粮中添加300 mg/kg地锦草总黄酮能够替代土霉素,增强肉鸡生长性能、免疫功能和抗氧化能力,提高盲肠菌群的多样性及有益菌比例,从而在饲料替抗中具有一定应用潜力和良好开发前景。

基于网络药理学研究地锦草对糖尿病的作用机制

目的使用网络药理学方法分析地锦草对糖尿病产生作用的物质成分及治疗机制。方法借助TCMSP数据库检索地锦草中所含的主要活性成分及其作用靶点并进行筛选,得到地锦草治疗糖尿病的活性成分和作用靶点。筛选数据库GeneCards和OMIM以得到治疗糖尿病的相关基因,与药物活性成分作交集。依据STRING数据库并采用Cytoscape软件分析蛋白质相互作用(PPI)网络,获得核心靶点后通过在线分析网站Metascape进行GO分析和KEGG通路分析。结果共获得地锦草6个主要活性成分与糖尿病有关的作用靶点131个,GO分析结果显示主要与血管生成、抗缺氧、血小板激活、炎性反应等生物过程相关,KEGG富集分析表明关键通路主要集中于癌症通路与炎症相关通路等。结论PPI研究发现TNF-α、IL-6、AKT1均居于地锦草治疗糖尿病相关靶点的前5位,验证了网络药理学预测靶点的准确性。了解了地锦草治疗糖尿病的物质基础和分子机制,研究结果对地锦草的后续开发利用有一定的积极作用。

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定地锦草中8种成分的含量

目的:建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)用于同时测定地锦草中2种有机酸类和6种黄酮类成分的含量。方法:采用Hypersil GOLD C18(150 mm×3.0 mm,3μm),流动相为0.3%甲酸溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量为2μL;质谱采用ESI源,负离子模式监测,喷雾电压为-3000 V,离子化温度为500℃,多反应监测模式(MRM)用于定量分析。结果:所测定地锦草中的8个成分在测定浓度范围内峰面积和浓度均呈良好的线性关系(r≥0.9910),加样回收率在96.1%~99.9%,精密度、重复性和稳定性良好并符合方法学考察要求。结论:该方法简便、快速、准确、可靠,可用于地锦草中8种成分的含量测定。

地锦草脂溶性成分研究

采用硅胶柱层析的方法,从地锦草(EuphorbiahumifusaWild.)中分离得到5个化合物,经理化鉴别及波谱分析,鉴定为羽扇豆醇(lupeol,1)、cycloart23E en3β,25diol(2)、cycloart23E en3β,25diol(3)、cycloart25ene3β,24diol(4)、正十六碳酸α甘油酯(1glycerinhexadecylate,5)。化合物1～5均为首次从该植物中分离得到。

地锦草体外抑菌有效部位的筛选试验

采用水煎、水醇和五部位提取法从地锦草中提得组成成分不同的７ 种提取物，以肠道致病性大肠杆菌Ｏ７８∶Ｋ８０，沙门氏菌Ｃ７９－１，金黄色葡萄球菌为目的菌株进行体外抑菌试验。结果表明，水煎提取物对大肠杆菌Ｏ７８∶Ｋ８０，沙门氏菌Ｃ７９－１，金黄色葡萄球菌的最小抑菌质量浓度分别为１０，１０，１２．５ ｇ／Ｌ；水醇提取物对上述试验菌的最小抑菌质量浓度依次为５，７．５，１０ ｇ／Ｌ；五部位法所得５ 种提取物的抑菌浓度均大于１５

地锦草化学成分的研究

目的 研究地锦草的化学成分。方法 采用硅胶柱层析分离和 Sephadex L H- 2 0纯化 ,从地锦草中分得 9个化合物 ,经理化性质和波谱分析鉴定了它们的结构。结果 它们分别为β-谷甾醇 ( ) ,没食子酸 ( ) ,鞣花酸( ) ,短叶苏木酚 ( ) ,槲皮素 ( ) ,山奈酚 ( ) ,芹菜素 - 7- O-葡萄糖苷 ( ) ,木犀草素 - 7- O-葡萄糖苷 ( ) ,槲皮素 - 3- O-阿拉伯糖苷 ( )。结论 化合物 , , , 和

蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究

对蒙药地锦草总黄酮提取工艺进行了研究。结果表明：乙醇提取法优于水提取法；用６倍量的７５％乙醇浸泡１２ｈ后回流提取１．５ｈ，共提取３次为最佳方案；提取液经石油醚脱色正丁醇萃取即得精制总黄酮。

厚朴体外抑菌作用研究

目的探讨厚朴的体外抑菌作用。方法用K-B纸片扩散法。100%厚朴浸出液滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用进行研究。结果厚朴对以上细菌均有明显抑菌作用。结论厚朴在体外有明显的抑菌作用。

高效液相色谱法测定地锦草中槲皮素的含量

目的 :建立地锦草中槲皮素高效液相色谱测定方法。方法 :色谱柱Kromasil C18(4.6mm× 2 5 0mm ,5μm) ,流动相为乙腈 0 .4 %磷酸 (40∶6 0 ) ,检测波长 370nm ,流速 1.0mL·min-1。结果 :槲皮素在 0 .0 36 4～ 0 .12 74μg线性关系良好 (r =0 .9999) ,回收率 10 0 .7% ,RSD 2 .5 %。 结论 :为地锦草及其制剂提供了分析方法 ,该法简便 ,结果可靠。

地锦草总黄酮抗氧化作用的研究

地锦草总黄酮呈剂量依赖性的抗Ｏ－２·和·ＯＨ－的氧化作用。在ＶＢ２－Ｍｅｔ－ＮＢＴ体系中对Ｏ－２的ＳＣ５０＝０．５８μｇ／ｍｌ，ＩＣ５０＝０．３５μｇ／ｍｌ；在Ｖｉｔ·Ｃ－Ｃｕ２＋－Ｃｙｔｏ·Ｃ体系中对·ＯＨ－的ＳＣ５０＝２．４μｇ／ｍｌ，ＩＣ５０＝２．１μｇ／ｍｌ；在Ｖｉｔ·Ｃ－Ｆｅ２＋－ＤＲ体系中对ＭＤＡ的ＳＣ５０＝１５１．８μｇ／ｍｌ。地锦草的消肿、清热，伤口愈合等药效作用的发挥。

地锦草提取物对小鼠血液过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响

目的 :观察地锦草提取物对小鼠血液过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的影响。方法 :地锦草提取物给小鼠连续灌胃 2 3 d,1次 / d,1ml/次。结果 :与空白对照组比较 ,地锦草提取物可明显提高小鼠血液 CAT和 GSH- PX活性 ,并呈剂量依赖性。结论 :结果表明 ,地锦草提取物具有较强的清除自由基及抗氧化。

RP-HPLC法同时测定地锦草片中3种黄酮苷元的含量

目的建立同时测定地锦草片中槲皮素、木犀草素和山柰酚含量的HPLC法。方法采用KromasilC18柱（250mm×4．6mm，5μm），以甲醇一体积分数为0．1％的磷酸溶液（体积比为52：48）为流动相，流速为1.0mL·min^-1，检测波长为360nm，柱温30℃。结果槲皮素、木犀草素和山柰酚的线性范围分别为1．50-30．0mg·L^-1（r=0．9999）、2．24-44．8mg·L^-1（r=0．9998）和0．220-4．40mg·L^-1（r=0．9998）；平均加样回收率（n=9）分别为100．1％、100．5％和98．8％。结论方法简便、结果准确、重现性好，可用于地锦草片的质量控制。

高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定地锦草中没食子酸的含量。方法DiamonsilC18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-0．01％磷酸（10：90）；检测波长：273nm柱温：30℃；流速：1mL·min^-1，进样量：5μL。结果没食子酸在0．0t82～0．1824μg线性关系良好，回归方程为Y=2969．4X-4．252，r=0．9999。平均加样回收率为98．36％，RSD为2．83％。结论本方法简便、快速、重复性好，可用于测定地锦草中没食子酸的含量。

地锦草总黄酮预防四氯化碳所致急性肝损伤的实验研究

目的研究地锦草总黄酮(total flavonoids ofEuphorbiae hum ifusae,TFEH)对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤的保护作用。方法四氯化碳造成小鼠急性肝损伤模型,测定血清谷丙转氨酶(serum glutam ic pyruvic transam inase,SGPT)、肝组织谷丙转氨酶(liver glutam ic pyruvic transam inase,GPT)、超氧化物歧化酶(superoxidase d ismutase,SOD)活性及丙二醛(m alonaldehyde,MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)含量,采用光镜观察肝脏组织学变化。结果与四氯化碳模型组比较,经TFEH预防性治疗后,GPT、LGPT活性和MDA含量均明显降低(P<0.05或P<0.01),而GSH含量和SOD活力明显增高(P<0.05)。通过病理学切片观察,TFEH明显改善肝组织的病理变化。结论TFEH对四氯化碳造成的小鼠急性肝损伤具有保护作用。

地锦草体外抑菌作用研究

目的探讨地锦草的体外抑菌作用。方法用K-B纸片扩散法。100%地锦草浸出液滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、伤寒杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用进行了研究。结果地锦草对以上细菌均有明显抑菌作用。结论地锦草在体外有明显的抑菌作用。

斑地锦与地锦总黄酮含量及抗氧化活性比较

以5月营养生长期、7月开花前期、9月果期的斑地锦与地锦为材料,比较它们的总黄酮含量及抗氧化活性的差别.结果表明,斑地锦的总黄酮含量均低于地锦;开花前期斑地锦总黄酮含量为20.28～22.23 mg/g,地锦的为34.67～37.50 mg/g;斑地锦提取液还原力明显弱于地锦,并与总黄酮含量呈正相关;两者在超氧阴离子和羟自由基清除能力上差别不大,斑地锦提取液含量为1 mg/g时,对超氧阴离子的清除率为54%,地锦的为56%;斑地锦提取液含量为10 mg/g时,对羟自由基的清除率为89%,地锦的为92%.

地锦草不同提取部位抗皮肤癣菌作用

为研究地锦草不同提取部位的体外抗皮肤癣菌作用。采用大孔吸附树脂梯度洗脱分离法对地锦草乙醇提取物进行洗脱分离,得到五个洗脱部位;根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A),测定地锦草5个提取部位对17株临床常见皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。结果表明地锦草5个提取部位均有显著的抗真菌作用,其抗真菌有效物质主要集中在20%乙醇和40%乙醇洗脱部分。由此可知,地锦草不同提取部位对试验菌株的生长具有明显地抑制作用。

UPLC法同时测定地锦草中4种指标成分的含量

[目的]建立同时测定地锦草药材中没食子酸、鞣花酸、槲皮素、山奈酚4种指标成分的超高液相色谱法（UPLC）。[方法]采用UPLC法,色谱柱为Acquity UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm,1.7μm）;流动相为甲醇-乙腈4∶6（A）-0.2%甲酸水（B）溶液,梯度洗脱：0～3 min,5%A;3～4 min,5%～17%A;4～19 min,17%A;19～42 min,17%～30%A;42～50 min,30%～34%A;50～55 min,34%～70%A,体积流量0.2 m L/min;检测波长为0～4 min,270 nm;4～55 min,360 nm,柱温30℃。[结果]4种成分均达到基线分离,各成分在线性范围内有良好的线性关系（r〉0.9997）;回收率在96.5%～102.9%。[结论]建立的测定方法准确灵敏、重复性好,能较全面地评价地锦草药材的质量。