地锦草水提物在IPEC-J2细胞中的抗炎与抗氧化作用

【目的】为了揭示地锦草(EH)在猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中的抗炎和抗氧化作用。【方法】利用不同浓度EH水提物(0、5、10、50、125、200μg/mL)处理IPEC-J2细胞12 h,通过CCK-8法检测IPEC-J2细胞活力,确定EH处理细胞的最佳浓度。将IPEC-J2细胞随机分为对照组(CT)、脂多糖(LPS)组(LPS)、EH+LPS组(ELP),每组3个重复。CT组细胞正常培养不做任何处理,LPS组细胞用5μg/mL LPS处理,ELP组细胞用5μg/mL LPS和最佳浓度EH共处理,各组细胞均处理12 h后,收集细胞和上清。利用实时荧光定量PCR方法检测细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)mRNA表达;ELISA法检测上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,化学荧光法检测上清液中活性氧(ROS)水平。【结果】与0μg/mL EH组相比,5、50μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力显著增加(P<0.05);10μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著增加(P<0.01),125μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力下降,但差异不显著(P>0.05),200μg/mL EH组IPEC-J2细胞活力极显著下降(P<0.01)。因此,后续选用10μg/mL EH处理IPEC-J2细胞。与CT组相比,LPS组IPEC-J2细胞中IL-6、TNF-α基因mRNA的表达极显著增加(P<0.01),上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度极显著增加(P<0.01),Keap 1、Nrf 2和HO-1基因mRNA表达极显著下降(P<0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px的含量极显著下降(P<0.01)。与LPS组相比,ELP组IPEC-J2细胞中IL-6基因mRNA表达极显著下降(P<0.01),TNF-α基因mRNA的表达显著下降(P<0.05),细胞上清液中MDA含量和细胞ROS的荧光强度均极显著下降(P<0.01),Keap 1、Nrf 2、HO-1基因mRNA表达极显著增加(P<0.01),GSH-Px含量极显著升高(P<0.01),SOD含量显著升高(P<0.05)。【结论】EH水提物在猪小肠上皮细胞中通过激活Keap1/Nrf2信号,提高抗氧化酶SOD和GSH-Px含量,启动下游靶基因HO-1表达,发挥抗炎和抗氧化的作用,且10μg/mL EH水提物作用效果最佳。

地锦草乙醇提取物对草莓的贮藏保鲜作用

研究地锦草乙醇提取物对草莓的影响来证实其对草莓贮藏保鲜有作用。以蒸馏水为对照,用不同浓度的提取液对淮南红颜草莓进行浸泡处理,选取相关品质指标,比较保鲜效果。处理组草莓采后生理品质显著提高,贮藏时间延长。与对照组相比,质量浓度为6.0 mg/mL的处理组失重率降低11.9%,可溶性固形物含量增加2.5%,维生素C含量增加23.1%,腐败指数降低37.8%,DPPH、ABTS自由基清除率分别增加13.8%、6.6%。结果表明,6.0 mg/mL地锦草乙醇提取液浸泡处理对草莓贮藏保鲜有较好的效果。

蒙药地锦草总黄酮提取工艺研究

对蒙药地锦草总黄酮提取工艺进行了研究。结果表明：乙醇提取法优于水提取法；用６倍量的７５％乙醇浸泡１２ｈ后回流提取１．５ｈ，共提取３次为最佳方案；提取液经石油醚脱色正丁醇萃取即得精制总黄酮。

地锦草不同提取部位抗皮肤癣菌作用

为研究地锦草不同提取部位的体外抗皮肤癣菌作用。采用大孔吸附树脂梯度洗脱分离法对地锦草乙醇提取物进行洗脱分离,得到五个洗脱部位;根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A),测定地锦草5个提取部位对17株临床常见皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。结果表明地锦草5个提取部位均有显著的抗真菌作用,其抗真菌有效物质主要集中在20%乙醇和40%乙醇洗脱部分。由此可知,地锦草不同提取部位对试验菌株的生长具有明显地抑制作用。

地锦草提取物对皮肤真菌麦角甾醇生物合成的影响

目的研究地锦草提取物对真菌细胞膜中麦角甾醇生物合成的影响。方法真菌经不同浓度地锦草提取物作用孵育7d后,经过皂化、提取,采用高效液相色谱法考察其麦角甾醇的含量变化。结果地锦草提取物能使真菌中的麦角甾醇含量下降(P<0.01),麦角甾醇含量变化有明显的剂量依赖性。结论地锦草提取物通过抑制真菌的麦角甾醇生物合成而发挥其高效抗真菌活性。

地锦草提取物对红色毛癣菌酶活性的影响

目的研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的影响,探讨其抗真菌作用机制。方法药物干预红色毛癣菌后分离菌体,按试剂盒要求处理样品,利用酶联免疫法和荧光分光光度法,研究地锦草提取物对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶活性的作用。结果地锦草提取物256μg.m l-1时,可显著降低红色毛癣菌中角鲨烯环氧化酶的活性(P<0.01);不同浓度的地锦草提取物,均可降低红色毛癣菌β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性(P<0.01)。结论地锦草提取物抗真菌机制可能与抑制角鲨烯环氧化酶和β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶的活性有关。

地锦草槲皮素提取工艺研究

目的对地锦草的提取工艺进行研究。方法采用正交试验法,以槲皮素的含量为考察指标进行试验。结果用地锦草重量10倍量的体积分数为75%的乙醇作为提取溶剂,提取2 h,共提取3次为最佳方案。结论提取方法操作简单、方便,为地锦草槲皮素提取工艺的进一步研究提供了依据。

用正交设计法优化地锦草中总黄酮的超声提取工艺

目的:优化地锦草中总黄酮的超声提取工艺。方法:将地锦草药材粉碎成超微粉末,采用单因素实验考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数对提取效果的影响,以总黄酮含量和浸膏得率为指标,采用L9(34)正交试验设计筛选最优提取工艺条件。结果:最优提取工艺条件为加12倍量的70%乙醇,提取2次,每次1.5h,提取得到总黄酮含量为(6.53±0.04)mg/g,浸膏得率为(15.27±0.55)%(n=3)。结论:该工艺合理、稳定,可用于提取地锦草中的总黄酮。

正交试验优选地锦草中没食子酸的提取工艺

目的通过试验优选大戟科植物地锦草中有效成分没食子酸的提取工艺。方法采用正交试验法，以提取时间、加水量和提取次数为研究考察的主要影响因素，每个因数选取三个水平进行实验设计，以没食子酸的含量为指标进行考察。结果影响地锦草水提取物中有效成分没食子酸含量的因素，按影响大小的顺序依次为提取溶液的用量、提取次数和提取时间，即水的用量为地锦全草的20倍量，总共需要煎煮3次，每次1．5小时为宜。结论在采用水煎煮法提取地锦全草中的有效成分没食予酸的工艺过程中，水的用量是最为重要的因素，这为地锦草中有效成分没食予酸提取工艺的进一步深入研究提供了依据。

地锦草有效成分总黄酮测定方法的建立及提取工艺研究

目的建立地锦草总黄酮含量的测定方法及优化地锦草中总黄酮的提取工艺。方法采用紫外-可见分光光度法测定总黄酮含量;提取工艺考察了水回流提取、乙醇回流提取及超声提取不同的提取方法,优选出乙醇回流提取法,采用单因素试验及正交试验优化地锦草的乙醇回流提取工艺。结果该测定方法的平均回收率为102.82%,RSD=1.2%;地锦草总黄酮提取工艺考察,最终确定最佳工艺:75%乙醇,15倍量,提取2次,每次2 h;提取率高达到2.588%。结论优选的总黄酮提取工艺方法简单、易行。

正交设计研究蒙药多叶棘豆总黄酮提取工艺

为多叶棘豆总黄酮提取工艺提供依据 ,采用正交设计优选了其最佳参数 .结果表明 ,最佳提取工艺组为A2 B2 C2 ,即加药材 8倍量的 75 %乙醇 ,回流提取 2次 ,每次

地锦草提取物抗口腔病原菌作用的体外研究

目的探讨地锦草乙醇提取物(AE)和石油醚提取物(PEE)对口腔病原菌的体外抗茵作用。方法用试管倍比稀释法测定两种提取物对常见口腔病原的最小抑茵浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC),判断其抗菌活性。结果AE对变异链球菌、粘性放线菌和牙银卟啉单孢菌等3种常见口腔病原茵的MIC分别为25mg/ml、50mg/ml、12.5mg/ml,MBC分别为50mg/ml、>100mg/ml、25mg/ml,PEE的MIC分别为5%、10%、2.5%,MBC分别为10%、>20%、10%。结论两种提取均有一定抗菌作用,但醇提物抗茵作用较强。管号12345AE(mg/ml)100502512.56.25PEE(%,V/V)201052.51.25MTZ(μg/ml)502512.56.253.30菌量(ml)0.10.10.10.10.12结果AE和PEE均对三种受试口腔病原菌有抑菌作用,见表2。表2AE和PEE对口腔病原菌的MIC及MBC菌类AE(mg/ml)MICMBCPEE(%,V/V)MICMBCMTZ(μg/ml)MICMBC变异链球菌25505%10%12.512.5粘性放线菌50>10010%>20%2525牙龊卟啉单孢菌12.5252.5%10%5.256.25从目前的结果看,地锦草两种提取物均有抗菌作用,说明其抗菌活性物质不只一种。其中抗牙龈卟啉单孢菌的作用较强,而抗粘性放线菌的作用较弱,拟进一步对提取物进行分析,找出抗口腔微生物的活性单体,为口腔抗菌药物的开发打下基础。

地锦草提取工艺研究综述

地锦草可治疗菌痢、咳血等多种疾病,是中医、蒙医常用的药材之一。近年来越来越多的学者致力于对其化学成分的提取工作,文章对地锦草提取工艺研究进展进行了综述,众多的学者把研究重点放在了总黄酮的提取领域,多糖及其他有效成分的提取工艺目前仍在不断的探索之中。

微波协助萃取地锦草中总黄酮

采用微波辅照诱导萃取法萃取地锦草中的总黄酮,将试剂微量化后,通过对提取条件的研究得出较佳的工艺条件为:提取溶剂为70%的乙醇,固液比为(g/ml)1∶10,微波功率为800W,辅照时间50s,提取次数为3次.

地锦草提取物通过miR-106-5p/TLR4信号通路改善非酒精性脂肪性肝炎

研究地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)提取物对高脂饲料联合葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)的改善作用及其干预的分子机制。将SPF级别C57BL/6小鼠雌雄对半随机分为正常对照组,NASH模型组,地锦草提取物低、高剂量组(n=10)。对照组给予正常饮水和食物。模型组和药物组在实验全程的14 d中均给予高脂饲料喂养,在此期间药物组进行灌胃给药,从第8 d开始给予持续饮用2%DSS水7 d。实验结束后杀小鼠,检测小鼠血清中甘油三酯(TG),谷丙转氨酶(ALT)含量;H&E染色法观察小鼠肝组织病理学变化;根据生物信息学及前期研究预测靶向调节TLR4的miRNA;采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织中miR-106-5p、Toll样受体4(TLR4)、IL-6及TNF-α基因的相对表达情况;Western blot法分析小鼠肝脏中TLR4、IL-1β蛋白水平表达变化。与正常组相比,模型组小鼠TG、ALT均有升高。H&E染色结果显示肝脏出现明显脂肪变性和炎症反应。RT-qPCR结果显示TLR4和炎性因子(IL-6、TNF-α)表达明显升高,而靶向调节TLR4的miR-106-5p表达降低(P<0.05)。Western blot结果显示模型组肝脏中TLR4、IL-1β蛋白表达水平升高(P<0.05)。经药物干预后,小鼠TG、ALT均有所下降;肝组织中TLR4和炎性因子mRNA相对表达水平达降低,miR-106-5p表达上升;TLR4、IL-1β蛋白表达水平下降(P<0.05)。地锦草提取物可有效改善高脂饲料联合DSS诱导的NASH的炎症情况及脂肪沉积,其机制可能与调控miR-106-5p/TLR4信号通路有关。

地锦草提取物对体外α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化活性研究

目的研究地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性及其体外抗氧化活性。方法从地锦草40%、70%、95%乙醇提取物对α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性中选择最适乙醇体积分数,再对该提取物用乙醚、氯仿、水饱和正丁醇和水相进行萃取分离,比较对α-葡萄糖苷酶的抑制活性、自由基清除能力、铁离子还原能力、羟自由基清除能力、超氧阴离子清除能力。结果地锦草95%乙醇提取物的抑制活性较优,再经乙醚萃取获得萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性最强,IC_(50)值为78.8μg/m L,化学成分分析显示其含有较多的酚性成分。乙醚萃取物具有较好的抗氧化能力,其自由基清除能力EC_(50)值为132.9μg/m L,铁离子还原能力EC_(50)值为76.9μg/m L,羟自由基清除能力EC50值为182.7μg/m L,超氧阴离子清除能力EC_(50)值为31.3μg/m L。结论地锦草95%乙醇提取物的乙醚萃取物具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性,同时具有一定的抗氧化活性。

地锦草不同提取方法对抑菌效果的影响

采用冷水浸渍、乙醇浸渍和水煮煎制等提取方法及对地锦草(Humifusa Euphorbia Willd)有效成分进行不同提取时间的提取,研究其提取物对荧光假单胞菌的抑菌活性。结果显示:冷水浸渍提取法所得提取物对荧光假单胞菌的抑菌效果最优,水煮法次之,乙醇浸渍法最差;冷水浸渍法和乙醇浸渍法均以浸渍48h抑菌效果最佳,水煮法以煎制1h效果最好。因此对地锦草有效成分的提取须采用适当的方法和适当的提取时间。

地锦草提取物抗真菌作用及对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶的影响

目的对地锦草提取物(EHE)进行体外抗真菌实验,探讨其抗真菌作用机制。方法采用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A),测定地锦草提取物对82株临床常见真菌的最低抑菌浓度值(MIC);酶联免疫吸附试验(ELISA)研究其对红色毛癣菌角鲨烯环氧化酶的影响。结果地锦草提取物对红色毛癣菌的平均MIC为446μg·mL-1,石膏样毛癣菌值的平均MIC为652μg·mL-1,紫色毛癣菌的平均MIC为1024μg·mL-1,许兰毛癣菌的平均MIC为896μg·mL-1,疣状毛癣菌平均MIC为853μg·mL-1,犬小孢子菌及4种念珠菌的平均MIC均>1024μg·mL-1;地锦草提取物256μg·mL-1时,可显著降低红色毛癣菌中角鲨烯环氧化酶的活性(P<0·01)。结论地锦草提取物有显著的抗真菌活性,对皮肤癣菌的敏感性比念珠菌高;其抗真菌机制可能与抑制角鲨烯环氧化酶的活性有关。

中药地锦草乙醇提取物体外抑制胃癌细胞增殖活性及机制研究

目的:探讨地锦草乙醇提取物(EEEH)对人胃癌(GC)细胞BGC823、MGC803、SGC7901及AGS增殖活性的抑制作用及机制。方法:采用蒸馏和冻干技术制备EEEH,用不同浓度的EEEH(62.5、125、250和500μg/m L)处理GC细胞,并设置溶剂对照组和空白对照组。采用MTS法检测胃癌细胞存活率;采用流式细胞术检测胃癌细胞凋亡率和周期分布;采用Western blot法检测胃癌细胞增殖、凋亡以及周期相关蛋白的表达水平。结果:MTS细胞增殖实验结果显示,与对照组相比,随着地锦草乙醇提取物浓度增加,GC细胞的增殖能力逐渐减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞术检测结果显示,62.5、125和250μg/m L的EEEH处理GC细胞MGC803和AGS 24 h后,与对照组相比,GC细胞的凋亡率显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05),并且AGS细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期(P均<0.05);Western blot检测结果显示,与对照组相比,经EEEH处理过的胃癌细胞中增殖相关蛋白PCNA以及抗凋亡相关蛋白BCL-2和BCL-XL的蛋白表达水平显著降低,促凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3出现明显的活性裂解片段,表明经EEEH处理后胃癌细胞凋亡活性增强,差异均有统计学意义(P<0.05),而caspase-9的蛋白表达水平并无明显变化。结论:EEEH能够抑制GC细胞增殖,其机制可能与EEEH诱导细胞凋亡和周期阻滞有关。

新疆地锦草提取物体外抗氧化及抑菌活性研究

为了对新疆地锦草提取物的体外抗氧化及抑菌活性进行初步研究,通过测定醇提物还原力、清除羟基自由基和DPPH·自由基的能力来评价抗氧化能力;采用滤纸片法来测定醇、水两种提取物的抑菌活性,并确定最低抑菌浓度(MIC)。结果表明,新疆地锦草醇提取物具有较强的抗氧化能力;地锦草醇、水两种提取物对受试菌株均有明显的抑菌作用,其中醇、水两种提取物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度一致,MIC为1.56%。醇提物对枯草芽孢杆菌和变形杆菌的最低抑菌浓度一致,MIC为3.125%,而水提物对枯草芽孢杆菌最低抑菌浓度为12.5%,对变形杆菌最低抑菌浓度为25%。;地锦草两种提取物均有较强的热稳定性,但会受到p H值的影响;表明新疆地锦草提取物有较好的抗氧化和抑菌作用,具有较好的开发应用潜力。