中华真地鳖Eupolyphaga sinensis Walker生物学研究

本文报道中华真地鳖ＥｎｐｏｌｙｐｈａｇａｓｉｎｅｎｓｉｓＷａｌｋｅｒ的卵鞘、龄期统计分析、虫龄历期、摄食量、增长量等生物学研究，为其饲养和利用提供参考依据。

Effect of Rhei Radix et Rhizoma and Eupolyphaga Steleophaga on liver protection mechanism based on pharmacokinetics and metabonomics

Objective:Based on metabonomics technology of high-performance liquid chromatography-mass spectrometry(HPLC-MS/MS)and hydrogen nuclear magnetic resonance spectroscopy(^(1)H NMR),the pharmacokinetic characteristics and therapeutic mechanism of Rhei Radix et Rhizoma(RhRR,Dahuang in Chinese),Eupolyphaga Steleophaga(EuS,Tubiechong in Chinese)combined with RhRR acting on acute liver injury were explored.Methods:Models of acute liver injury were established,and the pharmacokinetic methods of five components of RhRR-EuS in rats were found by HPLC-MS/MS.The liver tissues of different groups of mice were analyzed by ^(1)H NMR spectroscopy combined with multivariate statistical analysis to investigate the metabolomics of RhRR-EuS and RhRR.Results:Pharmacokinetic results showed there were different levels of bimodal phenomenon in different groups,and the absorption of free anthraquinone in RhRR increased after compatibility with EuS.In addition,the pathological state of acute liver injury in rats can selectively promote the absorption of emodin,chrysophanol,physcion and aloe emodin.Through 15 differential metabolites in the liver tissue of acute liver injury mice,it was revealed that RhRR-EuS and RhRR could protect the liver injury by regulating the metabolism of glutamine and glutamic acid,alanine,aspartic acid and glutamic acid,and phosphoinositide.However,the regulation of RhRR was weaker than that of RhRR-EuS.Conclusion:For the first time,we studied the pharmacokinetics and metabolomics differences of RhRREuS and RhRR in rats and mice with acute liver injury,in order to provide theoretical reference for clinical treatment of liver disease by DHZCP.

土鳖虫化学成分和药理作用的研究进展及其质量标志物(Q-Marker)的预测分析

土鳖虫是我国传统中药,分布于河南、河北、江苏、湖南等地,具有破血逐瘀、续筋接骨的功效。土鳖虫中化学成分种类丰富,主要包括蛋白质及多肽类、氨基酸类、脂肪酸类、生物碱、无机元素、核苷类等。现代药理研究表明,土鳖虫具备抗凝血并防止血栓形成、调节血脂的作用,此外,还具有抗肿瘤、抗炎、增强免疫力、抗氧化等作用。近年来,土鳖虫等动物类中药在临床应用方面备受关注。本文对土鳖虫化学成分和药理作用的研究现状进行总结,在此基础上分析功效作用与化学成分之间的联系,发现蛋白质及多肽类成分与抗凝血、调血脂作用关联紧密,生物碱类成分与抗菌抗炎作用相关。并从传统功效、现代药理、化学成分可测性、中药配伍等角度预测分析其质量标志物(quality marker,Q-Marker),初步确定土鳖虫活性肽组分、纤溶活性蛋白、脂肪酸类成分、生物碱、核苷类成分等可作为其质量标志物。中药质量标志物的研究为鉴定土鳖虫的真假优劣提供依据,也为后续开发土鳖虫新剂型、制定质量标准提供理论基础。

中药土鳖虫药理活性成分及其临床应用的研究进展

中药土鳖虫在临床上应用广泛,本文主要从土鳖虫的药理活性成分、临床使用方法及其应用的方向来进行阐述。土鳖虫的主要药理活性成分包括氨基酸、挥发油和生物碱等,具有降脂、抗凝、抑瘤和散瘀止痛等作用,临床上常与其他中药配伍使用,可用于高血脂、肝硬化、肿瘤以及骨科疾病等的治疗。本文旨在通过对相关内容进行归纳总结,为该药材的深入研究提供依据。

土鳖虫药材及其制剂特征离子鉴别研究

建立土鳖虫特征离子质谱测定方法,对土鳖虫及其制剂进行真伪鉴别和质量评价。使用超高效液相色谱-三重四级杆质谱,采用多反应监测模式,选择质荷比(m/z)415.72(双电荷)→406.72、415.72(双电荷)→667.34作为检测离子对,对土鳖虫药材及其制剂进行检测。24批不同产地的土鳖虫药材、21批土鳖虫提取物、6批成方制剂均能检出该离子对色谱峰,6批不同动物药(地龙、龟甲、僵蚕、鸡内金、蝉蜕、水蛭)药材和3批土鳖虫混伪品(金边土鳖、金边龙虱、美洲大蠊)中均未检出相应的色谱峰。本研究建立的方法为有效补充土鳖虫药材及其饮片检验标准上的不足,提高其质量控制水平,及保证土鳖虫相关药品临床用药的安全性提供了参考依据。

土鳖虫的本草考证

在系统查阅古今文献的基础上,对土鳖虫的名称、基原、功效主治、炮制方法及用药禁忌进行全面考证,以期为土鳖虫的正本清源及进一步资源开发利用提供参考。土鳖虫的基原为鳖蠊科昆虫地鳖Eupolyphaga sinensis Walker及冀地鳖Steleophaga plancyi (Boleny)雌虫的干燥体,金边土鳖Opisthoplatia orientalis Burm在广东省作为土鳖虫习用品入药。土鳖虫功专破血逐瘀,炮制以“火制法”为主,入药部位有使用全体、去足、去头足的不同,无瘀血停留或体虚有瘀之人慎用,孕妇禁用。

大黄䗪虫丸药理及临床应用进展

大黄䗪虫丸具有抗肿瘤、抗组织纤维化、预防血栓形成、保护内皮细胞功能、抑制视网膜微血管周细胞凋亡、防治血脂代谢紊乱等作用,可用于肝纤维化疾病、乙肝肝硬化、肝癌、脂肪性肝病、肿瘤疾病、皮肤病、糖尿病并发症、妇科疾病的治疗中。但目前的研究存在以下不足:肿瘤疾病的药理研究较多,临床研究较少,且多为疗效观察及初步机制探讨。在肝病、妇科类疾病方面,临床研究相对较多,但大样本、多中心、长期随访的临床研究较少,且机制研究较少。今后,应多开展大黄䗪虫丸治疗肿瘤疾病的大样本、多中心、长期随访的临床研究,进行其治疗其他疾病的机制研究,为经方的临床应用提供实验和临床参考。

ICP-MS法测定土鳖虫中重金属含量

采用ICP-MS法对不同产地土鳖虫中重金属及有害元素进行测定和分析,其中,射频功率:1550w,等离子体氩气流速:15.0 L/min,辅助气流量:1.0 L/min,雾化器氩气流速:0.8 L/min,雾化室温度:2℃,进样速度:0.1 r/s。测定结果为市场销售土鳖虫中铅、镉、砷、汞、铜、铬均有不同程度检出,含量范围分别为0.5~4.8 mg/kg、0.01~0.14 mg/kg、0.4~1.4mg/kg、0~0.08 mg/kg、15.3~42.7 mg/kg和1.7~25.3 mg/kg。ICP-MS法测定土鳖虫中重金属含量,方便快捷,方法准确度、精密度和线性良好,为进一步提高土鳖虫质量控制标准提供参考。

山东省市售土鳖虫质量分析与评价

目的:评价山东省市售土鳖虫质量状况。方法:收集山东省16地市市售土鳖虫样品28批,参照《中国药典》2020年版一部,分别对样品的性状、显微特征、薄层特征进行鉴别,对杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、黄曲霉毒素和浸出物进行检查,对样品进行聚类及相关性分析,对重金属污染情况就行了探索研究。结果:土鳖虫的性状及显微特征均符合药典规定;薄层色谱中,供试品溶液在与对照药材色谱相应的位置上,分别显相同颜色的荧光斑点和斑点;杂质含量为0.08%~2%,水分含量为6.7%~9.4%,总灰分含量为7.7%~15.8%(合格率为96%),酸不溶性灰分含量为1.1%~9.2%(合格率为96%),28批样品中,有两批同厂家样品检出黄曲霉毒素(检出率7%),浸出物含量为25.6%~37.0%,通过聚类分析,可将样品分为三类。结论:山东省市售土鳖虫总体质量较好,现行质量标准基本能满足其质量控制,极少部分样品中发现总灰分、酸不溶性灰分以及黄曲霉毒素含量超标等问题,需要进一步加强炮制工艺优化、贮藏环境监控及质量控制和监管。

土鳖虫水提液对实验性高脂血症大鼠血管内皮细胞的保护作用

目的 :研究土鳖虫水提液对高脂血症大鼠血管内皮细胞的保护作用。方法 :建立高脂血症大鼠模型 ,在实验不同阶段 ,观察大鼠血脂、血清超氧化物歧化酶 (SOD)、一氧化氮 (NO)、血浆内皮素 (ET)及循环内皮细胞 (CEC)的变化。结果 :实验第 4 0天 ,与正常组比较 ,高脂组血清总胆固醇 (TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C)及血浆ET均显著升高 (P <0 .0 1) ;血清SOD、NO显著降低 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。土鳖虫各剂量组血清TC、LDL C均显著降低 (P <0 .0 1) ;土鳖虫中、高剂量组血清SOD、NO明显升高 ,而血浆ET显著降低 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;土鳖虫高剂量组血清TG明显降低 (P <0 .0 5 )。实验第 6 0天 ,高脂组的CEC明显高于正常组 ,土鳖虫中、高剂量组CEC低于高脂组 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :土鳖虫水提液有调整脂质代谢、抗脂质过氧化反应、维持NO ET的平衡、保护内皮细胞作用 ,可能对防治动脉粥样硬化有益。

中药土鳖虫溶栓成分的分离纯化研究

对土鳖虫水浸醇沉提取物2号样品进行了离子交换柱层析,得组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。实验结果表明,组分Ⅲ的溶栓活性明显高于组分Ⅰ和组分Ⅱ,其蛋白质含量为88.9%,分子量约为38,018,效价为313 UK/mg,比活力为352 UK/mg蛋白。将组分Ⅲ再进行凝胶过滤柱层析,得组分Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。组分Ⅵ的生物活性高于组分Ⅳ和组分Ⅴ,蛋白质含量为89.3%,电泳呈现两条带,分子量约为34,623和39,811,效价为77 UK/mg,比活力为86 UK/mg蛋白。将组分Ⅵ进行反相高效液相色谱柱层析,收集保留时间为17 m in的洗脱峰,得到土鳖虫纯蛋白质,呈白色絮状,极易溶于水。再一次用反相高效液相色谱检查其纯度,保留时间为17.073 m in,无杂质峰。纤溶活性实验结果表明,组分Ⅵ既有直接降解纤维蛋白的作用,同时也有纤溶酶原激活剂样作用。

鸡血藤、鬼箭羽和土鳖虫调脂作用的比较

破血药土鳖虫升高血浆HDL-C/TC值和增加LCAT活性;和血药鸡血藤升高HDL_3-C/HDL_3-C比值,活血药鬼箭羽的这些作用居中。结果表明三种中药活血化瘀程度与其调脂作用大小有一定的顺序关系。

土鳖虫水提物对实验性高脂血症大鼠血管内皮和内皮素的影响

目的研究土鳖虫水提物对高脂血症大鼠血管内皮和内皮素 (ET)的影响。方法建立高脂血症大鼠模型 ,测定血浆ET的浓度 ,并应用内皮细胞铺片和免疫组化相结合的方法 ,在大鼠主动脉内皮细胞铺片上 ,计数内皮细胞和ET阳性细胞并定量分析ET的合成。结果实验第 80d ,与正常组比较 ,高脂组血浆ET显著增高 (P <0 .0 1) ;内皮铺片显示内皮细胞数量增多 ,排列紊乱 ,胞核大小和染色深浅不一 ,ET阳性细胞率显著升高 (P <0 .0 1)。土鳖虫中、高剂量组血浆ET水平和ET阳性细胞率显著降低 (P <0 .0 5～ 0 .0 1)。结论土鳖虫水提物能保护血管内皮 。

土鳖虫水煎剂对人多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响

目的 :观察中药土鳖虫对多囊肾病囊肿衬里上皮细胞增殖的影响。方法 :以灌服中药土鳖虫水煎液的 SD大鼠血清为含药血清 ,灌服等量生理盐水的 SD大鼠血清为对照血清。将囊肿衬里上皮细胞培养于含有下述物质的 RPMI 16 4 0液中 :(1)上皮生长因子 (EGF) 0、2 .5、5、10、2 0 ng/m l;(2 )含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,以等量对照血清为对照 ;(3) EGF 10 ng/ml分别加含药血清 1%、2 .5 %、5 % ,并以等量 EGF加对照血清作为对照。培养 4 8h后 ,以 5 -溴 - 2 -脱氧尿核苷嘧啶 (Brdu)掺入法检测细胞增殖。结果 :EGF能显著地刺激囊肿衬里上皮细胞增殖 ,一定范围内呈剂量依赖性 ;与对照血清比较 ,土鳖虫含药血清能明显抑制经或未经 EGF刺激的囊肿衬里上皮细胞增殖 ,并呈剂量依赖性。结论

土鳖虫脂溶性成分的研究

从土鳖虫中分离出3个单体,经鉴定为胆甾醇,棕榈酸,5,4′二羟基-7-甲氧基黄酮。

中华真地鳖生物学特性初步研究

中华真地鳖Eupolyphagesinensis系夜出性昆虫 ,其活动主要发生在夜间 ,1 9～ 2 4时活动最盛 ,且蜕皮高峰主要集中在后半夜。该文描述了初龄若虫的形态特征 ,对若虫的发育历期、蜕皮时间及卵鞘的孵化进行了研究 ,并比较了中华真地鳖若虫的消化道 ,提出了地鳖虫食品开发的流程 ;

土鳖虫提取液对人胃低分化腺癌细胞BGC-823的抑制作用

目的研究土鳖虫体外对人胃低分化腺癌BGC-823细胞抗肿瘤活性。方法采用MTT法测定了土鳖虫水提物和醇提物对人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖的抑制作用,采用生长曲线测定法检测土鳖虫醇提物对体外培养肿瘤细胞的细胞毒作用。结果土鳖虫水提物不能抑制体外培养的肿瘤细胞,而醇提物能显著抑制人胃低分化腺癌BGC-823细胞增殖,药物作用48h时抑制率最高,并有较好的剂量依赖关系。结论体外土鳖虫水提物没有抗肿瘤活性,醇提物有较强的抗肿瘤作用,值得进一步研究其抑制机理。

土鳖虫对血虚小鼠红细胞免疫功能的实验研究

目的 :研究土鳖虫对环磷酰胺致小鼠“血虚”模型红细胞免疫功能的影响 ,为探讨“虚 瘀”及活血化瘀机理提供新思路和途径。方法 :腹腔注射环磷酰胺 0 0 1g kg建立小鼠“血虚”动物模型 ,观察土鳖虫对实验动物红细胞免疫粘附功能指标的影响。采用酶联免疫吸附法 (ELISA)测血清抗心磷脂抗体 (ACA) ,ACA IgG、ACA IgA和ACA IgM含量。造模前后称体重 ,解剖分离心、肝、脾、肺、肾、胸腺各脏器称重 ,计算脏器系数。给正常小鼠ig土鳖虫 ,观察其对血清锌、钙水平的影响。结果 :环磷酰胺 (0 0 1g kg)ip小鼠 ,随着“血虚”模型的形成 ,小鼠的红细胞C3b受体花环率 (RBC C3bRR)下降 ,血清抗心磷脂抗体(ACA)ACAIgG、ACAIgA含量明显升高 ,体重下降及脾脏 ,胸腺重量减轻。土鳖虫 (2 5g kg )ig能提高“血虚”小鼠RBC C3bRR ,降低血清ACAIgG、ACAIgA水平 ,能纠正环磷酰胺引起的体重下降及增加脾脏及胸腺免疫器官的重量 ,土鳖虫 (2 5g kg)ig正常小鼠可升高血清锌、钙的水平。结论 :土鳖虫通过提高红细胞CR1 活性 ,增加红细胞免疫粘附功能 ,抑制血清ACA水平 ,血清中锌、钙含量的升高 ,可作为药物“生物药效探针”。

地鳖纤溶活性蛋白对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用

目的探讨地鳖纤溶活性蛋白(fibrinolytic protein from Eupolyphaga sinensis Walker,EFP)对H22荷瘤小鼠的抑瘤功效。方法采用水提取法对地鳖进行成分分离;皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤小鼠动物模型;灌胃和皮下注射法观察EFP的抑瘤作用;ELISA法检测血清抗H22抗体水平;记录各组体重变化、脾脏和胸腺等免疫器官的器官系数,检测肝脏丙二醛(MDA)水平、肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)以及血清谷丙转氨酶(GPT)活力等生理生化指标。结果EFP具有明显的抑瘤活性。经EFP灌胃和皮下注射后的荷瘤小鼠,与对照组荷瘤小鼠相比其胸腺指数、脾指数明显增加;抗H22抗体水平以及MDA、SOD、GPT、GOT活性明显增加;肿瘤生长缓慢。结论EFP是地鳖抗肿瘤作用的主要有效成分,EFP在动物体内具有抗肿瘤作用,能通过增强荷瘤小鼠参与免疫抗体以及相关酶的活性而发挥抗肿瘤作用。

土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用

目的研究土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡和细胞周期的影响,探讨土鳖虫抗肿瘤效应。方法以土鳖虫乳剂给SD大鼠灌胃,采血并制备血清。四氮唑盐法(MTT法)检测含药血清对肝癌HepG-2细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡。结果土鳖虫含药血清可明显抑制肝癌HepG-2细胞体外增殖,20%土鳖虫含药血清作用72h后抑制率高达56.728%,抑制率呈浓度依赖关系。流式细胞仪检测细胞凋亡发现肝癌HepG-2细胞以坏死居多,细胞周期多阻滞于G0-G1期。结论土鳖虫含药血清对肝癌HepG-2细胞体外增殖有明显的抑制作用。